Korean Journal of Animal Reproduction (한국가축번식학회지)
- Volume 22 Issue 1
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- Pages.1-9
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- 1998
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- 1226-5284(pISSN)
Developmental Capacity of Bovine Follicular Oocytes after Ultra-Rapid Freezing by electron Microscope Grid II.Cryopreservation of In Vitro Matured Bovine Oocytes
Electron Microscopic Grid를 이용한 초급속 동결이 소 난포란의 발달능에 미치는 영향. II. 체외 성숙된 소 미수정란의 동결에 관한 연구
Abstract
This study was carried out to confirm whether the developmental capacity of bovine mature oocytes frozen ultra-rapidly using electron microscopic(EM) grids and EFS30 can be obtained, and whether the cryoprotectants and the freezing method used in this study effect detrimentally to the bovine oocytes by indirect immunocytochemistry. As freezing solution, we used EFS30 which consisted of 30% ethylene glycol, 0.5 M sucrose, 18% ficoll and 10% FBS added in D-PBS. The results obtained in this experiment were summarized as follows: When the effects of cryoprotectant and freezing procedure on the microtuble, micrfilament and chromatin morphology of oocytes were evaluated using indirect immunocytochemistry, the results of freezing as well as exposure group were not different with that of the control oocytes. When the fertilization abnormality after ultrarapid freezing of bovine mature oocytes was examined by Hoechst staining, the rates of total penetration(96.7, 9.0%), normal two pronuclei formation(74.6, 68.9%) and mean number of sperm / oocyte(1.50, 1.44) were not different between control and freezing group. In addition, when the developmental capacity of frozen-thawed of oocytes(85.5%) was survived, 74.5% of them were cleaved and 31.4% of cleaved embryos were developed to blastocyst. These data were similar to those of the control(76.0%, 34.6%) and exposure(74.5%, 33.0%) except survival rates. Also, when the total cell number of blastocysts produced from the each treatment at day after IVF was examined by hoechst staining, there were not different among groups. There results demonstrate that developmental capacity of frozen-thawed bovine mature oocytes can be successfully obtained by ultra-rapid freezing method using EM grid and EFS30 solution.
본 연구는 체외에서 성숙된 소 미수정란을 electron microscope grid와 동해제인 EFS30을 이용하여 초급속 동결하였을 때 정상적인 배 발달의 유도 가능성 여부를 조사하고 동해제 및 동결방법의 유해성 여부를 indirect immunocytochemistry방법으로 확인하고자 실시하였다. 동해제는 30% ethylene glycol, 0.5 M sucrose, 18% ficoll과 10% FBS가 들어 있는 PBS로 된 EFS30을 사용하였다. 본 연구에서 얻어진 결과는 다음과 같다. 동해제와 동결과정이 난자의 microtubule, microfilament 및 chromatin의 형태에 미치는 영향을 indirect immunocytochemistry방법으로 조사하였던 바, 동해제 노출 뿐 아니라 동결에 의해서도 대조군과 차이를 나타내지 않았다. 초급속 동결이 소 미수정란의 체외수정에 미치는 영향을 검토했을 때, 총 정자침투율(96.7%, 90.0%), 정상 자응전핵 형성율(74.6%, 68.9%)과 난자당 정자수(1.50, 1.44)가 동결군과 대조군에 있어서 차이는 볼 수 없었다. 또한, 초급속 동결-융해 후의 체외발달능을 조사했던 경우, 85.5%의 높은 난자 생존율과 74.5%의 난할율, 그리고 31.4%의 배반포 형성율을 얻었다. 이러한 결과는 난자의 생존율을 제외한 수정율과 배반포 형성율에 있어서 대조군(76.0%, 34.6%)과 노출군(77.9%, 33.0%)의 결과와 매우 유사한 것이었다. 이와 더불어, 각 처리군에서 얻어진 배반포기배를 Hoechst 염색방법으로 총세포수를 조사하였을 때도 그 차이는 확인할 수 없었다. 따라서 체외에서 성숙된 소 미수정란은 EM grid와 EFS30 동결액을 이용한 초급속 동결방법으로 동결하였을 때 정상적인 배발달을 유도할 수 있다는 것을 알 수 있었다.(收量)은 양공시두부(兩供試頭部) 모두 괴근장(塊根長)과 정(正)의 상관(相關)이, 분기수(分岐數)와는 부(負)의 상관(相關)이있었다.(發芽率)이 98.1%이던 것이 68.8%로 감소(減少)하였다. 3. 온도변화(溫度變化)에 따른 수수의 발아소요일수(發芽所要日數)는 12일(日)(
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