본 연구는 도축 폐기물인 가축혈액을 이용하여 항고혈압 기능성 식품소재로서의 angiotensin I converting enzyme 저해 펩타이드 분획을 생산하기 위한 조건과 가능성을 조사하기 위하여 수행되었다. 산업적으로 이용 가능한 단백분해효소 중 Alcalase가 혈장 원액 및 그로부터 분리된 albumin에 대하여 가장 높은 활성의 가수분해물을 생성하였다. 특히 albumin의 Alcalase 가수분해물과 이를 gel chromatography를 통새 분획하여 얻은 고활성 분획의 $IC_50$값은 각각 0.5 및 0.02 mg/mL로서 지금까지 보고된 식품단백질 유래 펩타이드 혼합물들과 비교할 때 활성이 매우 높은 것에 속함을 알 수 있었다. 또한 이 고활성 펩타이드 분획은 혈장 원액으로부터 단순한 한외여과만을 거쳐도 얻을 수 있음을 확인함으로써 산업적 실용화 가능성이 높은 공정임을 알게 되었다.
To investigate the inhibitory activity of 2-hydroxy-3-amino-4-phenylbutyrate-harboring aminopeptidase N inhibitors, p-nitro-AHPA-peptide derivatives (1 and 2) and an AHPA-peptide derivative (3) were synthesized by chain elongation from C-terminal end using DCC/HOBt as a coupling reagent. The peptides $1{\sim}3$ exerted strong inhibitory activities against aminopeptidase N with $IC_{50}$ values of 1.8, 7.3 and $24.0\;{\mu}g/ml$, respectively, and cytotoxicity on cancer cell lines in vitro.
Rebamipide, 2-(4-chlorobenzoylamino)-3-[2(1H)-quinolinone-4-yl]-propionic acid, a novel antipeptic ulcer agent, has been reported to prevent various acute experimental gastric mucosal lesions and to accelerate the healing of chronic ulcers. Therapeutic effect of rebamipide was investigated with regard to the inhibitory effect on xanthine oxidase activity and type conversion of the enzyme which play a profound role in oxygen radicals generation system. Intraperitoneal administration of rebamipide at 60 mg/kg body weight reduced the xanthine oxidase activity, lipid peroxide content in ammonia induced hemorrhagic lesion. These results suggest that the therapeutic effect of rebamipide on gastric mucosal lesion may be in part due to the inhibitory activity of xanthine oxidase and type conversion rate of the enzyme.
해조류 매생이의 기능성을 증명하기 위하여 열수 또는 에탄올 추출하여 여러 가지 생리활성에 대하여 조사하였다. 우선, 매생이 열수와 에탄올 추출물의 항산화능을 조사하기 위하여 DPPH radical 소거능, SOD 유사활성을 측정하였다. 그 결과, 매생이 열수와 에탄올 추출물의 농도가 증가함에도 불구하고 낮은 증가율을 보였는데, 10 mg/ml에서 DPPH radical 소거능은 각각 10.8, 62.4%, SOD 유사활성은 각각 13.8, 27.1%로 나타났다. 항고혈압 활성 측정에서는 1 mg/ml의 매생이 열수와 에탄올 추출물이 각각 5.9, 49.7%의 활성을 보여 비교적 높은 효능이 매생이 에탄올 추출물에서 나타났다. 매생이 열수와 에탄올 추출물의 혈당 강하 효과는 ${\alpha}$-glucosidase 저해능 분석으로 측정하였는데, 1 mg/ml 농도의 매생이 열수와 에탄올 추출물은 각각 1.4, 67.3%로써 비교적 높은 효능을 매생이 에탄올 추출물에서 보였다. 매생이의 숙취해소 효능은 ADH와 ALDH 활성증진에 매생이 열수와 에탄올 추출물이 미치는 영향을 조사함으로써 증명하고자 하였다. 그 결과, 매생이 열수와 에탄올 추출물의 농도가 증가함에도 불구하고 알콜 분해능 증가율이 낮게 나타났으며, 심지어 acetaldehyde 분해능은 관찰되지 않았다. Elastase 억제 효능 분석에서는 매생이 열수와 에탄올 추출물 10 mg/ml에서 각각 75.9, 51.2%로 나타났다.
This study was devised to observe in vitro, the inhibitory effects of acidic polysaccharide fractions from Korean red ginseng (KRG) and white ginseng (KWG) on the lipolytic action of loxohormone-L and on angiotensin converting enzyme (ACE, peptidyldipeptidase hydrolase, EC 3.4.15.1) . The crude acidic polysaccharides (CAP) extracted from main and lateral roots of KRG and KWG were separately purified through several procedures. The total inhibitory activities on the lipolytic action of toxohormone-L of CAP from main roots of KRG and KWG was higher than those of CAP from lateral roots of KRG and KWG, respectively, and that of CAP from main root of KRG was 3.1 times higher than that of CAP from main root of KWG. The specific activity of CAP from main root of KRG was measured as 5.40 units/mg, when one unit was defined as the amount giving 50% inhibition on toxohormone-L induced lipolysls. A subfraction named PG4 3 obtained by replanted chromatography on DEAE-TOYOPEARL 650M gave the specific activity of 24.4 units/mg. On the other hand, it was found that the total inhibitory activity on ACE of CAP from lateral root of KRG was the highest among the 4 kinds of CAP, but the specific activity of CAP from lateral root of KWG was the highest.
대두발효식품의 기능성 탐색 연구의 일환으로 Bacillus natto 를 접종한 납두의 발효과정 중 고혈압을 유발하는 angiotension converting enzyme의 저해 peptide를 분리하고 저해효과를 검토함으로서 대두발효식품의 우수성을 입증하기 위한 과학 적 접근을 시도하고자 하였다. 납두는 Bacillus natto균을 이용하여 제조하였고, 2$0^{\circ}C$, 3$0^{\circ}C$, 4$0^{\circ}C$, 5$0^{\circ}C$, 6$0^{\circ}C$에서 0~72시간 동안 배양하면서 protein량, protease activity, ACE 저해율 을 측정하고 저해활성을 가지는 peptide를 정제 후 아미노산 조상을 분석하였다. Bacillus natto에 의한 납두의 발효시간이 경과함에 따라 protein 함량이 증가하여 4$0^{\circ}C$, 60시간에서 최대를 나타낸 후 감소하였다. 발효시간에 따른 protease activity는 4$0^{\circ}C$, 60 시간 배양이 최적의 조건이었으며, 최적 발효조건에 따라 납두를 제조한 후 20 mM sodium phosphate buffer(pH 7.0)를 가해 추출한 추출물을 Amicon membrane YM-3 filtration 과 Sephadex G-10, G-25를 이용한 gel filtration으로 부분정제하였다. 또한 정제한 peptide는 첨가함량이 높아질수록 저해활성은 높게 나타났으며, 1 mg 정도의 peptide 함량으로 74.74%의 저해율 을 나타내었다. 정제한 peptide의 아미노산 조성은 alanine(30.84%), phenylalanine(30.03%), histidine(20.24%) 순서로 그 함량이 높게 나타났다.
For the purpose of isolation and screening of tyrosinase inhibitory activity from edible mushrooms, Pleurotus ostreatus, Auricularia auricula-Judae, Umbilicaria esculenta, Agaricus bisporus, Flammuline velutipes, Lentinus edodes, Ganoderma lucidum, and Coriouls versicolor were examined by tracing inhibitory activities against tyrosinase, utilizing L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) as a substrate. Among the eight edible mushrooms tested, Umbilicaria esculenta showed potent enzyme inhibitory activities above 7804% against tyrosinase in ethylacetate (EtOAc) extracts. Ganoderma lucidum and Agaricus bisporus showed inhibitory activities of 67.3% and 51.5% in water extracts. EtOAc extracts of Umbilicaria esculenta was fractionated from silicagel column chromatography and one fraction showed the most inhibitory activity of 60.9%. The three bands (Rf=0.38, 0.27, 0.19) were isolated from preparative TLC of the fraction for purification and identified as mixtures of orsellinate, methyl orsellinate, methyl lecanorate, and methyl gyrophorate by high pressure liquid chromatography (HPLC), ultravisible spectrophotometer (UV), mass spectrophotometer (Mass), nuclear magnetic resonance spectrometer (NMR).
문어육의 Aroase AP10 가수분해물을 제조하고 이들 가수분해물을 한외여과막을 통과시켜 회수한 분자량 10,000 Da이하의 저분자물질을 Bio-gel P-2 gel chromatography를 행하여 ACE 저해효과를 가지는 3개 획분을 분취하였다. 또한 이들 획분을 SuperQ-Toyopearl 650S column을 이용한 이온교환크로마토그래피에 의해 4개의 활성획분을 분리하였다. 이중 ACE 저해효과가 가장 높은 C-1 획분의 아미노산 조성은 arginine, lysine, histidine 및 leucine의 함량이 가장 많아 전체의 약 60%를 차지하였으며 $IC_{50}$은 $3.10{\mu}g$으로 나타났다.
국내산 곡류의 에탄올 및 메탄올 추출물로부터 콜레스테롤 생합성계에서 가장 중요한 율속효소로 알려져 있는 HMG-CoA reductase 저해활성을 검색하였다. HMG-CoA reductase activity 측정용 효소원은 cholestyramin을 급여하여 사육 한 후 밤 12시경에 간율 적출하여 얻어진 microsome을 freeze-thaw방법으로 조제하였고 효소활성은 spectrophotometric assay로 측정하였다. 그 결과 각 시료 추출물을 $100{\;}{\mu}g/assay$ 되게 첨가한 경우 HMG-CoA reductase 억제활성은 에탄올 추출물에서는 수수가 가장 높은 활성을 보였고 다음은 흑임자였으며 나머지는 활성이 미미하거나 전혀 없는 것으로 나타났다. 메탄올 추출물에서는 기장이 가장 높은 활성을 나타내었고 다음은 수수였으며 그 다음은 메밀, 흑미의 순으로 나타났다. 또한 추출물에서 높은 억제활성을 나타내었던 수수와 기장 메탄올 추출물을 각종 용매로 분획하여 활성을 검토한 결과 수수와 기장 모두 헥산 획분에서 가장 높은 활성을 나타내었다.
전통된장으로부터 안지오텐신전환효소(angiotensin converting enzyme; ACE)를 저해하는 물질을 추출하여 그 구조를 밝혀냈다. ACE 저해물질을 열수추출한 다음 gel permeation chromatography (GPC)를 통하여 ACE 저해작용이 큰 두 개의 큰 획분을 받았다. 앞획분은 90%와 70%의 ACE 저해효과를 나타내었으나 단일물질로 분리되지 않아 계속하여 역상 HPLC를 통하여 순수 분리를 하였다. 그러나 앞획분은 순수분리되지 않아 결국 2차원 전기영동/TLC를 통하여 분리한 결과 분자량이 759.63인 아미노기를 갖고 있는 비펩타이드 물질임이 밝혀졌다. 뒷획분은 다른 조건의 HPLC(reverse column과 $NH_2$, column)를 이용하여 순수분리에 성공하였다. 이중 ACE 저해효과가 큰 물질은 분자량 271.33인 dipeptide인 arginine-proline임을 밝혀냈다. 이물질의 ACE $IC_{50}$은 $92\;{\mu}M$이었다. 본 연구 결과는 대부분 ACE 저해물질이 3개 내지 7개 등의 긴 펩타이드임을 감안할 때, 짧은 dipeptide로 ACE 저해펩타이드가 한국의 전통된장에서 생산할 수 있음을 보여주고 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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