3-Hydroxypropionic acid (3HP) is a platform chemical and can be converted into other valuable C3-based chemicals. Because a large amount of glycerol is produced as a by-product in the biodiesel industry, glycerol is an attractive carbon source in the biological production of 3HP. Although eight 3HP-producing aldehyde dehydrogenases (ALDHs) have been reported so far, the low conversion rate from 3-hydroxypropionaldehyde (3HPA) to 3HP using these enzymes is still a bottleneck for the production of 3HP. In this study, we elucidated the substrate binding modes of the eight 3HP-producing ALDHs through bioinformatic and structural analysis of these enzymes and selected protein engineering targets for developing enzymes with enhanced enzymatic activity against 3HPA. Among ten AbKGSADH variants we tested, three variants with replacement at the Arg281 site of AbKGSADH showed enhanced enzymatic activities. In particular, the AbKGSADHR281Y variant exhibited improved catalytic efficiency by 2.5-fold compared with the wild type.
보리가루, 엿기름, 찹쌀가루의 수용성 추출물과 농축액이 효소적 갈변에 대한 억제 효과가 있는지를 PPO 활성에 대한 저해효과를 통하여 알아보았으며, PPO에 대한 저해효과가 가장 크게 나타난 엿기름 농축액의 갈변 정도와 환원성을 측정하고 이들 성질과 PPO활성에 대한 저해효과와의 상관관계도 조사하였다. 나아가 사과 슬라이스를 엿기름 농축액에 침지한 후 냉장하고 냉장 중 사과 슬라이스의 조직감과 갈변 정도를 조사한 결과는 다음과 같다. PPO에 대한 억제 효과는 엿기름 농축액이 가장 크게 나타났다. 엿기름 농축액은 가열 시간에 따라 당도, 갈변정도와 환원성은 증가하는 경향을 나타냈으며, PPO 활성은 감소하는 경향을 보였다 이러한 변화는 가열 60분까지는 서서히 변화하였으나 70분 이후에는 급격한 변화를 나타내었다. 또한 가열시간에 따라 엿기름 농축액의 pH는 감소하였다. 한편 엿기름 농축액에 침지한 사과 슬라이스의 냉장 저장중의 갈변정도는 6.9%로, 조직감의 변화는 14.3%로 가장 낮았다. 따라서 엿기름 농축액이 사과 슬라이스의 갈변 억제와 조직감 유지에 효과가 있는 것으로 나타났다.
This study was carried out to know the possibility of simultaneous utilization of laccase from white-rot fungus with cellulase on enzymatic hydrolysis of cellulosic substrate from autohydrolyzed oak wood. Laccases from 3 white-rot fungi, Pleurotus ostreatus. Ganoderma lucidum, and Phanerochaete chrysosporium, were isolated, purified and measured their activities. The highest activity was shown in Pleurotus ostreatus and the lowest in Phanerochaete chrysosporium. Laccase from Pleurotus ostreatus has optimum pH of 5.94, Km value of 3.209 mM and appeared to be stable at relatively wide pH range, 4.7-8.72. Temperature stability showed that 60% activity was preserved after 40 minutes at $50^{\circ}C$. Laccase from Ganoderma lucidum reached to the maximum activity during 15-20 day incubation. This enzyme has optimum pH of 6.45, Km value of 6.71 mM and pH range of 5.0-9.0 for stabilization. 95% activity was preserved at $30^{\circ}C$ and 58% activity at $50^{\circ}C$. Concerned to the enzymatic hydrolysis of cellulosic substrate with both enzymes, cellulase and laccase, simultaneously, mixed culture filtrates and mycellium extracts were shown higher hydrolysis rates than those of Trichoderma viride. There were no significant differences in the extent of hydrolysis among various mixed culture filtrates and mycellium extracts.
Jo Qtae;Choy Eun-Jung;Park Doo Won;Jee Young-Ju;Kim Sung Yeon;Kim Yoon
Fisheries and Aquatic Sciences
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제5권4호
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pp.263-270
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2002
The Pacific oysters, Crassostrea gigas, were stressed with different concentrations of benzo(a) pyrene and depurated to determine the hemocyte lysosomal membrane stability and hydrolytic enzymatic activity as a biomarker candidate to the chemical, using NRR (neutral red retention) and API ZYM System, respectively. The membrane damage measured as NRR decrease was significant with the increase of chemical concentration and exposure time (P<0.05), providing a possible tool for biomarker. Interestingly, the control showed intrinsic stress probably due to captive life in the laboratory, and a recovering trend was also found during the depuration. The benzo(a)pyrene-exposed oysters showed increased enzyme activities in alkaline phosphatase, esterase (C4), acid phosphatase, naphthol-AS-BI-phosphohydrolase, $\beta$-galactosidase, $\beta$-glucuronidase, and N-acetyl- $\beta$-glucosaminidase. Of them, only two enzymes, acid phosphatase and alkaline phosphatase, showed some potential available for the generation of enzymatic biomarker in the oyster. The results are suggestive of the potential availability of the cellular and enzymatic properties as a biomarker. However, considering that a robust biomarker should be insensitive to natural stress coming from normal physiological variation, but sensitive to pollutants, a concept of intrinsic stress the animal possesses should be taken into consideration. This reflects the necessity of further research on the intrinsic stress affecting the cellular and enzymatic properties of the chemicalstressed oysters prior to using the data as a biomarker.
This study prepared functional oyster hydrolysates using two-step enzymatic hydrolysis and investigated their functional properties. To prepare two-step enzymatic hydrolysates (TSEH), oysters were hydrolyzed using 1% Protamex (PR) at $40^{\circ}C$ and pH 6.0 for 1 hr before sequential treatment with one of the following enzymes for 1 hr: Alcalase (AL), Flavourzyme (FL), Neutrase (NE), pepsin (PE), and trypsin (TR). The PRAL, PRNE and PRTR hydrolysates had significantly greater angiotensin I converting enzyme (ACE) inhibitory activity than did PR and the other TSEHs. Only the antioxidant activity of the PRNE hydrolysate was significantly different (p<0.05), while none of the TSEHs had antimicrobial activity. The oyster hydrolysate prepared by sequential treatment with Protamex and Neutrase (PRNE) had the best ACE inhibitory activity and antioxidant activity, with $IC_{50}$ values of 0.40 and 0.94 mg/mL, respectively. The PRNE hydrolysate was processed through an ultrafiltration (UF) series with molecular weight cut-off (MWCO) membranes of 3, 5, 10, and 30 kDa, and the ACE inhibitory, antioxidant, and antimicrobial activities of the permeates were determined. The permeate through the 3-kDa MWCO membrane had greater ACE inhibitory activity and antioxidant activity than did the other PRNE permeates, with $IC_{50}$ values of 0.11 and 0.40 mg/mL, respectively.
본 연구에서는 항염증 펩타이드를 생산하기 위해 도루묵(Arctoscopus japonicus)의 어육과 알로부터 가수분해물을 제조하였으며, 단백분해효소, pH, 온도, 효소 농도 및 가수분해 시간에 따른 NO 소거활성을 측정함으로써 최적 가수분해 조건을 설정하였다. 어육 가수분해물의 최적 조건은 pH 5.0, 온도 $30^{\circ}C$, 효소 농도 1%, 가수분해 시간 4시간으로 확인되었으며, 알 가수분해물의 최적 조건은 pH 5.0, 온도 $70^{\circ}C$, 효소 농도 3%, 가수분해 시간 3시간으로 확인되었다. 이러한 최적의 가수분해 조건에서 어육 및 알 가수분해물의 NO 소거활성은 각각 18.94 및 19.81%로 측정되었다. 이는 도루묵 단백질 가수분해물 유래 항염증 펩타이드를 생산하기 위한 기초자료로 활용할 수 있을 것으로 기대된다.
Purpose: To understand the pathogenesis of the disease that presents abnormally proliferated vascular endothelial cells, a model of DMH(1,2-dimethylhydrazine)-induced abnormal proliferation of HUVECs(Human Umbilical Vein Endothelial Cells) was made. We indirectly determined that Protein Kinase C(PKC) restricts the cellular proliferation and inhibits the manifestation of growth factor by using several inhibiting substances of the transmitter through our previous studies. Thereupon, we attempted to observe direct enzymatic activities of PKC and its correlation with the abnormal proliferation of vascular endothelial cells. Methods: $10^5$ HUVECs cells were applied to 6 individual well plates in three different groups; A control group cultured without treatment, a group concentrated with $0.75{\times}10^{-8}M$ DMH only, and a group treated with DMH & $5{\times}10^{-9}M$ Calphostin C, inhibitor of PKC. In analyzing the formation of intracellular PKC enzyme, protein separation was performed, and separated protein was quantitatively measured. PKC enzyme reaction was analyzed through Protein Kinase C Assay System (Promega, USA), and the results were analyzed according to Beer's law. Results: Enzymatic activity of PKC presented the highest in all reaction time of a group concentrated only with DMH, and the lowest in the control group. The group treated with DMH and the inhibitor revealed statistically lower enzymatic activity than group only with DMH in all reaction time, although higher than the control group. Conclusion: From the enzymatic aspect, most active and immediate reaction of the PKC was observed in the group concentrated with DMH only. The group treated with DMH & PKC inhibitor showed meaningful decrease. Accordingly, PKC holds a significant role in DMH-induced abnormal proliferation of vascular endothelial cells.
Ham, Seung-Shi;Park, Kun-Pyo;Park, Book-Kil;Deoghwan Oh
Preventive Nutrition and Food Science
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제2권3호
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pp.232-235
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1997
This study was investigated to determine antimutagenic effects of enzymatic browning reaction products (PEBRPs) obtained by reaction of polyphenol compouns with oxidase extracted from potato. Catechol (Ca) PEBRPs showed the strongeest inhibitor effects with 90% inhibition on benzo-($\alpha$)-pyrene(B($\alpha$)P) induced mutagenesis in Salmonella typhimurium TA98, but he least with40% inhibition on the 2-aminofluorene (2-AF) induced mutagenesis in TA98. The strong antimutagenic activities with 80% inhibition were observed in the presence of 100$\mu\textrm{g}$/plate of hydroquinone(HQ)-PEBRP on the B($\alpha$)P or 3-amino-1,4-dimethyl-5H-pyrido[4,3-b]indole(Trp-P-1) induced mutagenesis in TA98, whereas HQ-PEBRP showed the least antimutagenic effect on 2-AF-induced mutagenesis. The addition of 100$\mu\textrm{g}$ hydroxyhydroquinone(HHQ)-PEBRP to the plate led to approximately 82% inhibitory effects on 2-AF or Trp-P-1 induced mutagenesis in TA98, whereas the least antimutagenicity was obsrved in the4-nitroquinoline-1-oxide(4-NQO) induced mutagenesis in the presence of 100$\mu\textrm{g}$/plate of HHQ-PEBRP. More than 80% inhibiton were observed in the presence of 200$\mu\textrm{g}$/plate of Pyrogalol(Py)-PEBRP on the B($\alpha$)P or Trp-P-1 induced mutagenesis in TA98, but the least with 38% inhibition on 4-NQO induced mutagenesis in TA98. The results indicate that enzymatic browing reaction products of potato have a strong modulatory effect on mutagen induced mutagenesis in TA98.
This study aimed to investigate the hepatoprotective activities of the sea cucumber products, including extracts and hydrolysates, in vitro and in vivo. Dried sea cucumber, produced on the western coast of Korea, was boiled in water or 70% ethanol at 85℃ or 100℃ for 18 or 24 h, respectively, to extract bioactive compounds. The enzymatic hydrolysates were prepared by reacting the dried sea cucumber with pepsin or neutral protease (PNL) under optimal enzyme conditions. The anti-inflammatory effect of the samples was investigated using RAW 264.7 cells treated with lipopolysaccharide (LPS). The amount of nitric oxide (NO) was produced from the cells treated with LPS and each sample was compared. Therefore, the pepsin hydrolysate treatment decreased NO production compared to LPS sole treatment. Furthermore, the effects of the samples on cell injury in the hepatic cell line and bisphenolA-induced hepatic injury mouse model were investigated. The water extracts and the pepsin hydrolysates of sea cucumber significantly inhibited cell injury generated in the hepatocytes without cytotoxicity (p < 0.05), whereas the ethanol extracts were cytotoxic. However, these results indicate that the extracts and the enzymatic hydrolysates derived from sea cucumber can be used as beneficial materials for inhibiting liver damage.
축산 분뇨의 퇴비화에 관련되는 세균들을 분리하고 이들이 생산하는 효소들 중 퇴비화에 관련되는 것으로 사료되는 amylase, cellulase, protease 및 lipase의 특성을 연구하였다. 발효 중에 있는 축산 분뇨로부터 24주의 균주를 분리하여 이중 protease, cellulase, amylase, 그리고 lipase의 활성을 모두 가진 6개의 균주들을 선별하였다. 분리한 6개의 균주들을 동정해본 결과 Corynebacterium varibilis, Bacillus spp., Pseudomonas spinosa, Acetobacter calcoaceticus 및 Athrobacter cumminsii 등으로 밝혀졌다. 이들이 분비하는 효소들의 특징은 중성에서 알칼리성에 이르는 광범위한 pH에서 효소들이 높은 활성을 보였으며, cellulase를 제외한 대부분의 효소들의 최대 활성 온도가 $60^{\circ}C$ 정도 였으나, cellulase의 경우 $37^{\circ}C$가 최적 활성 온도였다. 이는 발효가 진행되어 축산 분뇨에 고온의 열이 발생할 때, 이 환경하에서 유기물을 분해함으로써 발효과정을 원활히 진행시키는 것으로 생각된다. 다만 cellulase 생산 세균의 경우 축산 분뇨의 초기 발효시에 관여하여 균주의 성장 및 유기물의 분해에 관여하는 것으로 사료된다. 이와같은 결과는 축산분뇨 발효초기와 발효후기의 온도가 상승된 환경에서 작용하는 세균의 균총이 다름을 암시하고 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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