Although the Escherichia coli heat-labile enterotoxin B subunit (LTB) has already been expressed in several different systems, including prokaryotic and eukaryotic organisms, studies regarding the synthesis of LTB into oligomeric structures of pentameric size in the budding yeast Saccharomyces cerevisiae have been limited. Therefore, this study used a functional signal peptide of the amylase 1A protein from rice to direct the yeast-expressed LTB towards the endoplasmci reticulum to oligomerize with the expected pentameric size. The expression and assembly of the recombinant LTB were confirmed in both the cell-free extract and culture media of the recombinant strain using a Western blot analysis. The binding of the LTB pentamers to intestinal epithelial cell membrane glycolipid receptors was further verified using a GM1-ganglioside enzyme-linked inmmunosorbent assay (GM1-ELISA). On the basis of the GM1-ELISA results, pentameric LTB proteins comprised approximately 0.5-2.0% of the total soluble proteins, and the maximum quantity of secreted LTB was estimated to be 3 mg/l after a 3-day cultivation period. Consequently, the synthesis of LTB monomers and their assembly into biologically active aligomers in a recombinant S. cerevisiae strain demonstrated the feasibility of using a GRAS microorganism-based adjuvant, as well as the development of carriers against mucosal disease.
Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society
/
v.20
no.12
/
pp.117-124
/
2019
Vibrio cholerae is a very important pathogenic bacterium that has to be monitored in seafood and ships' ballast water. Various methods have been developed to identify this bacterium, yet these methods are time-consuming and have limitations for their sensitivity to detect contamination. The purpose of the present study was to develop a robust and reliable method for identifying V. cholerae. Peptide nucleic acid (PNA) probes were developed to use for PNA-based asymmetrical real-time PCR techniques. The toxigenic Cholera enterotoxin subunit B (ctxB) gene was selected as a target for detecting V. cholerae and the gene was synthesized as a positive template for conventional and real-time PCR. Real-time PCR primers and PNA probes were designed and standard curves were produced for the quantitative analysis. The selected PNA probes reacted specifically to V. cholerae without any ambiguity, even among closely related species, and the detection limit was 0.1 cfu/100 mL. Taken together, the PNA probes and asymmetrical qPCR methods developed in this present study could contribute to the rapid, accurate monitoring of V. cholerae in marine environments, and as well as in seafood and ships' ballast waters.
The FimH subunit of type 1-fimbriated Escherichia coli has been determined as a major cause of urinary tract infection. To produce a possible vaccine antigen against urinary tract infection, the fimH gene was genetically linked to the Itxa2b gene, which was then cloned into the pMAL -p2E expression vector. The chimaeric construction of pMALfimH/Itxa2b was transformed into Escherichia coli TB1 and its N-terminal amino acid sequence was analyzed. (omitted)
Enterotoxigenic E. coli is one of the major causative agents of the infantile diarrhea and traveler's diarrhea. The heat-stable enterotoxin(ST) is thought to be a virulence factor in the pathogenesis of the diarrhea and to be a maker for identification of the enterotoxingeic E. coli from non pathogenic E. coli. The isolate of enterotoxigenlc E. coli was isolated from swine during 1989 year(from 5 to 10 month) in the Kyong-gi and Chung-Cheong provinces, and three strains(KM-4, KM-7 and KM-12) was selected from 189 isolates of ST producing E. coli. The detection of a ST produced of the isolated E. coli was performed by the infant mouse assay(IMA). This study was designed to know optimal conditions for the production of the ST and the molecular properties of plasmids of the enterotoxigenic E. coli. Amount of ST produced were the most at initial pH 8.5~9.0 of succinate salts medium culture. The cultural time of the same medium was accumulated the highest level of ST was at the 14 to 16 hours, and then stationary phase was at the 20 hours. From this experiment the KM-7 strain was selected among ST producing strains by IMA. Partial plasmid-curing experiment was done to select plasmid encoding for ST among other plasmids and then comparing the plasmid pattern of ST producing strain(KM-7) with those of other ST non-producing strains, it is found that ST gene exists on the about 80 Kbp plasmid. Each fragment of this plasmid digested with EcoRl was ligated to vector pBR 322 and transformed into E. coli K-12. A clone producing ST(eKT 53) was selected by IMA. The EcoRl digestion pattern of the isolated plasmid(pKD 37) from the ST producing clone it is indicated that the size of the inserted fragment in eKT 53 strain is 16 Kbp. The cultured supernatant of eKT 53 strain was positive result of ST production in IMA.
Mastitis is one of the most significant cause of economic loss to the dairy industry. Especially, Staphylococcus aureus is a major contagious mastitis-causing pathogen in dairy cattle. Because of its high transmission rate and resistance to antibiotic therapy, staphylococcal mastitis presents a constant threat to the dairy industry. Staphylococcal enterotoxin C(SEC) produced by S aureus has been known as one of superantigens which are able to stimulate a large proportion of T lymphocytes independently of their antigenic specificity. In this experiment, we have conducted preliminary studies with mice and lactating cows to evaluate the immunogenicity and safety of the experimental vaccine consists of SEC mutant antigen on controlling the bovine mastitis associated with S aureus infections. The average value of somatic cell counts in quarter milk, isolation rate of S aureus were consistently decreased in SEC-SER vaccinated groups, whereas antibody titers were highly increased in SEC-SER vaccinated groups. Peripheral blood were also collected from the lactating cows to determine the proportion of leukocyte subpopulation associated with humoral immunity(HI) and cell mediated immunity(CMI). Proportion of leukocyte subpopulation expressing $BoCD2^+$(total T lymphocyte), $BoCD4^+$(T helper cell), $BoCD8^+$(T cytotoxic/suppressor cell) and NonT/NonB lymphocyte which are involved in CMI in SEC-SER vaccinated groups were decreased for the initial stage after first vaccination and then increased from ten weeks after first vaccination maintaining elevated level till 14 weeks after vaccination. In contrast, proportion of monocyte, MHC class II and B lymphocyte which are associated with the production of primary immune response in SEC-SER vaccinated groups were increased for the initial period and then decreased from ten weeks after first vaccination. We present evidence that vaccination of SEC-SER mutant antigen in lactating cows induced a significant proliferation of bovine T lymphocytes. These results suggest that SEC-SER mutant antigen used in this experiment might be one of potential immunogen in developing innovative vaccine against bovine IMI associated with S aureus. Additional challenge trials should be carried out to evaluate substantial protection against S aureus under the commercial farm conditions.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
/
v.21
no.1
/
pp.76-83
/
1992
Enterotoxigenic E. coli is one of the major causative agents of the infantile diarrhea and traveler's diarrhea. The heat-stable enterotoxin (ST) is thought to be a virulence factor in the pathogenesis of the diarrhea and to be a maker for identification of the enterotoxigenic E. coli from non pathogenic E. coli. ST producing E. coli KM-7 strain was isolated from the swine and molecular cloning of ST gene of KM-7 strain. Transformant eKT-53 $(ST^+,\;LT^-)$ was selected by infant mouse assay (IMA). The culture supernatant of eKT-53 strain was performed purification by multipled steps. The culture supernatant (crude ST) was purified by sequentially applying batch adsorption chromatography on Amberlite XAD-2 resin, ion exchange chromatography on DEAE-Sephacel anion exchanger, gel filtration chromatography on Bio-Gel P-6 and preparative polyacrylamide slab gel electrophoresis. About 113-fold purification was achieved with a yield of about 11% of crude ST and the minimum effective dose(MED) of this purified ST was about 2.8ng in IMA. Homogeneity of purified ST was demonstrated by showing a single band in analytical SDS polyacrylamide disc gel electrophoresis.
Lee, Chae Lim;Kim, Yeon Ho;Ha, Sang-Do;Yoon, Yo Han;Yoon, Ki Sun
Korean Journal of Food Science and Technology
/
v.52
no.6
/
pp.661-669
/
2020
Samgak-Kimbap is a popular ready-to-eat (RTE) food at convenience stores, in Korea. Although Samgak-Kimbap is distributed through the cold chain supply system, inappropriate temperature storage conditions prior to consumption are a cause of concern. The objective of this study was to evaluate the risk of Staphylococcus aureus growth in Samgak-Kimbap in the retail market. The prevalence and contamination levels of S. aureus in Samgak-Kimbap (n=170) were monitored, and the predictive growth model of a five-strain cocktail of enterotoxin-producing S. aureus (SEA, SEB, SEC, SED, and SEE) was developed in Samgak-Kimbap as a function of temperature (4, 10, 11, 20, 25, and 37℃). We could not observe the growth of S. aureus and enterotoxin-producing S. aureus in Samgak-Kimbap at temperatures below 10℃. The probability of illness with S. aureus per serving of Samgak-Kimbap was 1.44×10-10 per day. The most influential factor in increasing the risk of foodborne illnesses was the contamination level of S. aureus in Samgak-Kimbap.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
/
v.36
no.7
/
pp.938-943
/
2007
This study investigated the hazard analysis of ready-to-eat sandwiches sold in various establishments. Sandwich samples were collected from convenience stores, discount stores, sandwich chain stores, bakery shops, fast-food chain stores, and food service operations located in Daegu and Gyeongbuk. Out of 174 samples, 18 (10.3%) contained coagulase positive staphylococci with counts ranging from 0.30 to 4.08 log CFU/g. There was significant seasonal difference in Staphylococcus aureus isolation; the average count in summer (3.24 log CFU/g) was 3 times higher than that of winter (1.10 log CFU/g) (P<0.001). According to the microbiological guidelines of PHLS for ready-to-eat foods, 95.4% of the samples were acceptable. As a result of enterotoxin producing experimental data ($35^{\circ}C$, pH 5.8, NaCl 0.5%), enterotoxin was not produced in a sandwich until Staphylococcus aureus increased to a level greater than 4.95 log CFU/g. This microbiological hazard analysis data could be applied to future studies on quantitative risk assessment of ready-to-eat foods.
The generation of secretory IgA antibodies (Abs) for specific immune protection of mucosal surfaces depends on stimulation of the mucosal immune system, but this is not effectively achieved by parenteral or even oral administration of most soluble antigens. Thus, to produce a possible vaccine antigen against urinary tract infections, the uropathogenic E. coli (UPEC) adhesin was genetically coupled to the heat-labile Escherichia coli enterotoxin A2B (ltxa2b) gene and cloned into a pMAL-p2E expression vector. The chimeric construction of pMALfimH/ltxa2b was then transformed into E. coli K-12 TB1 and its nucleotide sequence was verified. The chimeric protein was then purified by applying the affinity chromatography. The purified chimeric protein was confirmed by SDS-PAGE and westem blotting using antibodies to the maltose binding protein (MBP) or the heat labile E. coli subunit B (LTXB), plus the N-terminal amino acid sequence was analyzedd. The orderly-assembled chimeric protein was confirmed by a modified $G_{M1}$-ganglioside ELISA using antibodies to adhesin. The results indicate that the purified chimeric protein was an Adhesin/LTXA2B protein containing UPEC adhesin and the $G_{M1}$-ganglioside binding activity of LTXB. thisstudy also demonstrate that peroral administration of this chimeric immunogen in mice elicited high level of secretory IgA (sIgA) and serum IgG Abs to the UPEC adhesin. The results suggest that the genetically linked LTXA2B acts as a useful mucosal adjuvant, and that adhesin/LTXA2A chimeric protein might be a potential antigen for oral immunization against UPEC.
Background: Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) infection is a primary cause of livestock diarrhea. Therefore, effective vaccines are needed to reduce the incidence of ETEC infection. Objectives: Our study aimed to develop a multivalent ETEC vaccine targeting major virulence factors of ETEC, including enterotoxins and fimbriae. Methods: SLS (STa-LTB-STb) recombinant enterotoxin and fimbriae proteins (F4, F5, F6, F18, and F41) were prepared to develop a multivalent vaccine. A total of 65 mice were immunized subcutaneously by vaccines and phosphate-buffered saline (PBS). The levels of specific immunoglobulin G (IgG) and pro-inflammatory cytokines were determined at 0, 7, 14 and 21 days post-vaccination (dpv). A challenge test with a lethal dose of ETEC was performed, and the survival rate of the mice in each group was recorded. Feces and intestine washes were collected to measure the concentrations of secretory immunoglobulin A (sIgA). Results: Anti-SLS and anti-fimbriae-specific IgG in serums of antigen-vaccinated mice were significantly higher than those of the control group. Immunization with the SLS enterotoxin and multivalent vaccine increased interleukin-1β (IL-1β) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) concentrations. Compared to diarrheal symptoms and 100% death of mice in the control group, mice inoculated with the multivalent vaccine showed an 80% survival rate without any symptom of diarrhea, while SLS and fimbriae vaccinated groups showed 60 and 70% survival rates, respectively. Conclusions: Both SLS and fimbriae proteins can serve as vaccine antigens, and the combination of these two antigens can elicit stronger immune responses. The results suggest that the multivalent vaccine can be successfully used for preventing ETEC in important livestock.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.