금낭화 (Dicentra spectabilis L.)는 개발가치가 있는 국내 자생화 중의 하나로서 우수한 품종의 대량생산이 절실히 요구되는 실정이다. 본 연구는 현탁배양을 통한 배발생세포의 대량증식과 체세포배 발생 및 식물체재생의 적정조건을 구명하여 효율적인 기내묘목의 대량생산 체계를 확립하고자 시도되었다. 1.0mg/L 2,4-D SH고체배지에서 유도된 배발생캘러스를 현탁배지에서 증식시킨 결과, 1.0mg/L 2,4-D를 포함한 SH배지에서 MS배지에 비해 증식율이 높게 나타났으며, 체세포배 발생율은 1/2배 SH기본배지에서 가장 높게 나타났다. 250$m\ell$ 삼각플라스크에서 5,000개 이상의 고빈도로 체세포배가 생산되었다. 체세포배로부터 발아유도시에 GA$_3$는 정상적인 식물체로의 재생을 억제하는 효과를 나타내었으며, 정상적인 식물체 재생은 1/2희석 SH배지에서 양호하였다, 신초와 뿌리를 갖는 유식물체를 모래와 원예용상토(5:1, vol)가 혼합된 토양이 함유된 포트에 이식하여 1개월 후 58%의 생존율을 나타내었다. 이상의 결과를 활용하면 체세포배로부터 금낭화의 묘목을 대량생산 할 수 있을 것으로 생각된다.
체세포배 유도를 통해 두릅나무 역병 저항성 개체인 '자오'의 효율적인 재분화가 가능하였다. 절편에 따라 배발생 캘러스에 요구되는 생장조절제의 종류가 다르게 나타났다. 잎의 경우 MS 배지에 2,4-D와 TDZ, L-glutamine이 처리된 배지에서 캘러스와 체세포배의 유도가 양호하였으며, 엽병과 뿌리는 2,4-D 단독처리 시 가장 좋은 결과를 얻을 수 있었다. 적정 배양조건하에서 배발생캘러스 유도율은 잎, 엽병, 뿌리로부터 각각 75%, 67% 및 83%를 나타냈다. 삼투압제 처리에 따른 체세포배의 발아율은 sucrose, glucose, maltose모두 90% 이상의 발아율을 보였으나, 식물체 형성은 2% sucrose에서 72%로 가장 좋았다. 어린 식물체는 생장조절제를 첨가하지 않은 1/2MS 배지에서 정상 식물체로 생장하였고, 인공상토에 이식하여 95% 이상 순화하였다. 본 실험결과는 두릅나무 역병 저항성 개체 '자오'의 체세포 배발생을 통한 기내 대량증식이 가능함을 보여주었다.
절화 장미의 기내 배양에서 품종간의 차리는 물론 적절한 사이토키닌의 종류와 그 농도를 구명하여 효과적인 대량증식 방법을 확립하고저 본 실험을 수행하였다. 신초 형성에 의한 수확률은 품종간에 현저한 차이가 있었으며, 공식 품종 중 'Golden Emblem'이나 'Tineke'에서 보다 'Carl Red'에서 신초 형성이 현저하게 많았으며, 사이토키닌의 종류로는 BA가 신초 형성에 2iP나 kinetin 보다 훨씬 효율적이었으나, 신초 가감후 신초 생장에는 2iP나 kinetin이 BA 보다 그 효과가 월등하였다. 신초 형성에 적합한 사이토키닌의 농도를 1.0 mg/L이었으나, 장미의 증식만을 고려할 때 사이토키닌면의 적정 농도는 BA 1.0 ∼ 5.0 mg/L라 할 수 있으며, 신초의 장점은 사이토키닌의 종류에 상관없이 농도가 증가할 수록 증가되는 경향을 나타내었다.
Spathiphyllum floribundum cv. Cupid를 기내에서 대량번식시키기 위하여 일련의 실험을 실시하였다. 신초경정을 LS배지에 TDZ (thidiazuron)와 BA (banzyladenine)가 첨가된 배지에서 배양한 결과, 신초의 증식 및 신초 cluster의 형성은 BA 2.0 mg/L 첨가배지에서 가장 양호하였다. 배지 내 BA와 PBZ (paclobutrazol)의 혼용첨가는 BA 단용첨가보다 신초증식 및 신초 cluster 형성을 촉진하였다. 형성된 신초 cluster를 5∼7 mm로 절단하여 BA또는 TDZ이 첨가된 배지에 배양하였다. BA 2.0∼3.0 mg/L가 첨가된 배지에서 신초수가 가장 많았으며 신초의 증식도 양호하였다. 형성된 신초 cluster 절편체 (5∼7mm)에서 신초의 신장 및 발근은 IBA 2.0∼3.0 mg/L 첨가배지에서 매우 양호하였다. 발근된 식물체는 vermiculite와 pelrlite가 1 : 1로 혼합된 용토에서 95% 이상 순화되었다.
무(Raphanus sativus L.)는 전세계적으로 재배되고 있는 뿌리 채소 중 하나로, 다양한 방법으로 소비되고 있다. 무의 F1종자 생산을 위한 원종 계통의 교배 과정에서는 화분 혼입으로 인해 순도가 떨어지는 문제가 발생할 수 있다. 따라서 본 연구에서는 무의 기내 대량증식을 위해 캘러스 재분화를 통한 대량증식 조건을 확립함으로써 기내배양 식물체를 증식시키고 원종 증식에 이용될 수 있도록 하는 것을 목표로 하였다. 무의 하배축을 이용한 캘러스 유기에서 다양한 농도의 2,4-D와 TDZ, kinetin 조합 중 가장 효과적인 조합을 선정하고, 유기된 캘러스를 두 종류의 배지(5H+1B, 1 mg/L NAA + 0.1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L IPA + 0.02 mg/L GA3 + 2 mg/L zeatin + 1 mg/L BA; 5H+0.1T, 1 mg/L NAA + 0.1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L IPA + 0.02 mg/L GA3 + 2 mg/L zeatin + 0.1 mg/L TDZ)에 치상함으로써shoot 재분화에 적합한 호르몬 조건을 탐색하였다. 무의 캘러스 배양 결과, RA2 계통과 RA10 계통은 1 mg/L 2,4-D + 0.05 mg/L kin 조합에서, RA4 계통은 1 mg/L 2,4-D + 0.1 mg/L kin + 0.025 mg/L TDZ 조합에서, RA30 계통은 1 mg/L 2,4-D + 0.2 mg/L kin 조합에서 캘러스의 형성이 효과적이었다. RA4 계통에서 유기된 캘러스의 shoot 재분화는 두 종류의 shoot 재분화 배지에서 모두 일어났지만, 그 빈도는 5H+1B 배지에서 훨씬 더 높았으며 재분화된 shoot를 발근배지에 계대배양하여 뿌리를 유도하고 기내 순화 과정을 거쳐 재분화된 소식물체를 얻을 수 있었다. 이 연구에서 확립한 조건들을 무의 기내 대량번식에 활용한다면, F1 종자 생산을 위한 원종 증식에 도움이 될 것으로 판단된다.
온실에서 생육하고 있는 Guzmaniz cv. Cherry의 신초를 채취하여 기내에서 대량번식하였다. 온실에서 생장한 신초는 초대배양에서 약 80% 정도로 오염율이 매우 높았다. Cytokinin이 단용으로 첨가된 배지에서 재생된 신초의 증식은 BA 2.0mg/L 첨가배지가 신초수 6.6개로 가장 좋았으며, kinetin 0.5mg/L 첨가배지와 BA 0.5~1.0 mg/L 첨가배지도 증식이 양호하였다. 신초증식에 양호한 cytokinin 과 농도를 선택하여 IAA와 혼용첨가한 배지에서는 kinetin보다 BA를 첨가한 배지가 전반적으로 신초증식이 높았으며, BA 2.0mg/L 단용첨가보다 BA 2.0mg/L 와 IAA 0.1~0.5mg/L를 혼용첨가하였을 때, 신초의 증식이 증가하였다. BA 2.0mg/L와 IAA 0.1mg/L 를 첨가한 배지에서 8.7개의 가장 높은 신초증식율을 나타냈었고, BA 2.0mg/L 와 IAA 0.5~1.0mg/L를 첨가한 배지도 신초증식이 매우 높았다. BA 0.5 mg/L와 IAA 0.1mg/L를 첨가한 배지에서, 80rpm으로 액체회전배양하는 것이 신초수가 12.4개로 액체정체배양이나 고체배양보다 증식율이 월등히 높았다. 신초의 발근은 IBA 2.0 mg/L첨가한 배지가 발근율 100%, 뿌리수 4.14개, 뿌리길이 1.53 cm로 발근이 가장 좋았다.
본 연구는 조직배양을 이용한 효율적인 블루베리의 묘생산 체계 개발을 위하여 수행되었다. 신초형성을 위한 초대배양을 위해서는 WPM 배지가 MS 배지보다 신초형성률, 마디수, 신초장 등에 있어서 유의적으로 우수하였다. 식물생장 조절제가 신초형성에 미치는 식물생장조절제의 영향을 조사하기 위해서는 zeatin(1, $2mg{\cdot}L^{-1}$), 2iP(10, $15mg{\cdot}L^{-1}$), 그리고 BA(4, $6mg{\cdot}L^{-1}$)를 처리하였으며, 신초의 증식에 미치는 영향을 확인하기 위해서는 zeatin($0.5mg{\cdot}L^{-1}$), 2iP(10, $15mg{\cdot}L^{-1}$), 그리고 BA($0.05mg{\cdot}L^{-1}$)를 처리하였다. 신초형성에 미치는 결과는 zeatin 처리가 신초형성률, 마디수, 신초장 등에서 유의적으로 효과적이었다. 반면 무처리와 BA 처리에서는 신초가 형성되지 않았으며, 2iP 처리의 경우 신초형성률이 낮았다. 기내 삽목으로 생산된 블루베리 신초의 계대배양에 있어 신초 발생 및 생장에 미치는 영향은 zeatin을 농도별로 처리한 결과, 모든 농도에서 신초의 형성률과 형성된 신초의 개수는 유의적 차이를 보이지 않은 반면 zeatin의 농도가 증가할수록 신초의 마디수는 증가하나 신초장은 짧아지는 경향을 보였다. 신초증식을 위한 적정한 zeatin 농도는 $0.5mg{\cdot}L^{-1}$ 였다.
Lilium oriental hybrid 'Casa Blanca'의 기내인편에서 자구를 대량생산하기 위하여 MS배지의 염류농도 및 당, 광조건 등이 자구의 형성 및 비대에 미치는 영향을 조사하였다. MS배지의 1/2~2배 염류농도에서 자구의 형성은 차이를 나타내지 않았으나 3배 염류농도에서 자구의 형성이 현저히 억제되었다 자구의 비대는 MS기본배지에서 가장 촉진되었다. 배지의 NH$_4$$^{+}$ : NO$_3$의 비율이 1 : 2와 1 : 3일 때, 또는 MS기본배지 (NH$_4$$^{+}$ : NO$_3$= 약 1 : 2)가 인편에서 자구의 형성 및 비대에 적절하였다. 따라서 MS 기본배지가 자구의 형성 및 비대에 양호한 것으로 나타났다. 당의 농도가 높아지면 자구형성은 억제되고 자구비대는 촉진되었으며, 당 9~12% 첨가배지에서 자구비대가 양호하였다. 배지내 활성탄의 첨가는 인편에서 자구의 형성을 억제하였으나 형성된 자구의 비대는 촉진하였다. 특히 활성탄 1 g/L를 첨가한 배지가 자구의 비대에 가장 효과적이었다. 자구의 형성 및 형성된 자구의 비대는 명, 암간에 차이를 나타내지 않았다. 따라서 L. Oriental Hybrid 'Casa Blanca'의 기내 대량번식은 당 9%와 활성탄 1 g/L가 첨가된 MS기본배지에서 기내인편을 배양하여 자구를 형성 및 비대시키고 형성된 자구의 인편을 계대배양하는 것이 효율적이었다.
본 연구는 나무이끼(Climacium japonicum) 배우체의 기내증식에 영향을 미치는 몇 종류의 화학적 및 물리적 환경을 표준화하기 위하여 실시하였다. 초기 배양재료는 멸균한 배우체의 정단을 Knop 배지(1865)의 다량요소와 Nitsch와 Nitsch배지 (1956)의 미량요소를 첨가한 고체배지에 배양하여 획득하였다. 배우체 생산을 위해 좋은 배양재료를 얻기 위하여 다져진 배우체 및 shoot의 정단부와 기저부를 평가하였다. 배우체의 기내생산에 미치는 영향을 검정하기 위해 배지 7종류, 총질소 4농도, sucrose 5농도, 광도와 온도 등의 요인들을 분석하였다. Shoot의 정단부가 배우체 번식을 위해 사용한 3종류의 절편체들 중 가장 우수하였으며, Knop 배지(1865)의 다량요소와 Nitsch와 Nitsch배지 (1956)의 미량요소를 첨가한 배지가 다른 종류의 배지들에 비해 배우체의 증식에 효과적 이었다. Sucrose의 농도가 높아질수록 배우체의 신장 및 증식에 좋은 영향을 미쳤으며, 질소의 결핍 및 과다는 배우체의 생장을 억제하였다. 광도의 강약에 따라 배수체의 수, 길이 및 생체중에 큰 변화를 보였으며, 배우체 생장을 위해 최적의 광도는 3000-4000lx. 인 것으로 생각되었다. 고온 또는 저온 조 건은 배우체의 증식과 생산에 부정적인 영향을 미쳤다. 본 연구에 의해 개발된 생산과정의 단순화, 대량화 및 영양체의 고품질화는 효과적인 이끼의 기내배양 방법으로 생각되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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