본 연구는 삼채의 조추출물과 유기용매 분획물들을 가지고 DPPH 라디칼 소거 활성에 의한 항산화 활성 검색 결과 디클로로메탄($CH_2Cl_2$) 분획물과 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물에서 라디칼 소거 활성을 나타냈으며, xanthine oxidase 억제 효과는 DPPH 활성 라디칼 소거 활성에서 제일 뛰어났던 에틸아세테이트 분획물에서, superoxide 소거 활성은 헥산(n-hexane) 분획물에서 활성이 나타났다. RAW 264.7 세포에 lipopolysaccharide로 자극을 주고 삼채 주정 추출물 및 유기용매 분획물들을 처리하여 확인해본 결과, 조추출물과 물 분획물을 제외한 나머지 유기용매 분획물에서 염증유발 인자(NO, $PGE_2$, iNOS, COX-2, IL-6 및 $IL-1{\beta}$) 생성억제 효과가 나타났으며, 그중 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물에서 억제 효과를 확인할 수 있었다. 본 실험 결과 삼채 조추출물과 유기용매 분획물에서 항산화 효과 및 염증 유발 인자의 생성 억제 효과가 나타났으며, 이러한 결과 삼채에서 유효성분 추출을 통한 항산화, 항염증 물질의 연구 또는 예방하거나 치료할 수 있는 염증 억제 성분의 분리 및 그 작용기전 연구에 중요한 기초 자료가 될 것이라 생각한다.
벼의 염기서열 분석이 완료됨에 따라 유전자의 세포내 기능을 밝히기 위한 기능유전체 연구가 활발히 진행되고 있다. 이를 위해 효율적으로 아그로박테리움을 이용해 원하는 유전자를 식물체 내로 형질전환을 하기 위한 노력은 지금도 계속 진행되고 있다. 본 실험에서는 캘러스를 유기한 후 아그로박테리움을 이용해 접종하는 기존의 방법과 달리, 성숙 종자를 소독한 후 2,4-D가 포함된 액체배지에 24시간 침종하여 배 부분이 발아하기 시작하는 종자를 이용해 바로 아그로박테리움을 접종하여 체세포변이의 발생을 최소화하고 유전자를 포함하고 있는 아그로박테리움이 식물 조직내로 침투할 수 있는 효율을 증가시키며, 그 후 캘러스를 유기하여 재분화 시킴으로써 형질전환 식물체를 얻는 방법을 새롭게 수립하였다. 배양과정 중 공동배양 배지에 아그로박테리움 성장억제물질인 silver nitrate와 항산화 물질인 DTT를 첨가하여 공동 배양 기간을 7일 이상으로 늘림으로써 벼 형질전환효율을 증가시킬 수 있었고, PCR 분석을 통해 원하는 목표 유전자가 형질전환체에 안정적으로 도입이 되는 것도 확인할 수 있었다. 또한, 이 방법은 형질전환 효율이 낮은 일품벼와 같은 품종에도 적용할 수 있을 것으로 판단된다. 이러한 결과를 종합해 볼 때, 본 실험을 통해 얻어진 새로운 공동배양 방법은 우수한 농업적 형질을 가진 벼 육종 소재 및 품종 개발시 효율적으로 이용할 수 있을 것으로 생각된다.
Objective : Hongyi (Formica yessensis) is the dried insect of fomicidae. In previous studies, it appeared possibilities on anti-thrombosis, preventing atherosclerosis, treating rheumatoid disease, and inhibiting hela cell. In this study, we investigated anti-inflammatory effects and mechanism of Hongyi. Methods : Hongyi A was extracted by water and made dried powder. Hongyi B was extracted by ethanol and made dried powder. We measured Nitric Oxide (NO) production on the mouse macrophages (RAW 264.7), mouse vascular endothelial cell (MOVAS) and human vascular endothelial cell (HUVEC) for anti-inflammatory effect. In addition, we conducted reverse transcription reaction (RT-PCR) for investigating the mechanism. Results : In RAW 264.7 macrophages stimulated by LPS, Hongyi A ($100{\mu}g/m{\ell}$) decreased NO production compared with LPS $2{\mu}g/ml$ control group with statistical significance (p<0.05). Hongyi A (50, $100{\mu}g/m{\ell}$) also decreased NO production compared with LPS $4{\mu}g/ml$ control group with statistical significance (p<0.01). Hongyi B (50, $100{\mu}g/m{\ell}$) decreased NO production compared with LPS $2{\mu}g/ml$ control group with statistical significance (p<0.01). Hongyi B (10, 50, $100{\mu}g/m{\ell}$) also decreased NO production compared with LPS $4{\mu}g/ml$ control group with statistical significance (p<0.01, p<0.001, p<0.001). In the MOVAS, Hongyi A and B increased NO production compared with control group. In the HUVEC, Hongyi B increased NO production compared with control group. The expression of NF-${\kappa}B$ in 12-hours MOVAS culture was decreased by Hongyi A and B (10, $50{\mu}g/ml$) compared with control group, but expression of $I{\kappa}B$ was increased. In the 24-hours MOVAS culture, expression of $I{\kappa}B$ was significantly increased. The expression of NF-${\kappa}B$ in 12-hours HUVEC culture was decreased by Hongyi A and B compared with control group, but expression of $I{\kappa}B$ was increased. Hongyi B also increased eNOS mRNA gene expression. Conclusions : Hongyi A and B showed anti-inflammatory effect in mouse macrophages with the activation of vascular endothelial cell through NO production in MOVAS and HUVEC repectively. Honyi B showed superior effect than Hongyi A, but additonal mechanism study should be conducted.
Background: Many strategies are required for cervical cancer reduction e.g. provision of education cautious sexual behavior, HPV vaccination, and early detection of pre-invasive cervical lesions and invasive cancer. Basic health data for cervical cytology/ HPV DNA and associated factors are important to make an appropriate policy to fight against cervical cancer. Aims: To assess the prevalence of abnormal cervical cytology and/or HPV DNA and associated factors, including sexual behavior, among Bangkok Metropolitan women. Materials and Methods: Thai women, aged 25-to-65 years old, had lived in Bangkok for ${\geq}5$ years were invited into the study. Liquid-based cervical cytology and HPV DNA tests were performed. Personal data were collected. Main Outcomes Measures: Rates of abnormal cytology and/ or high-risk HPV (HR-HPV) and factors associated with abnormal test (s) were studied. Results: Abnormal cytology and positive HR-HPV were found in 6.3% (279/4442 women) and 6.7% (295/4428), respectively. The most common abnormal cytology was ASC-US (3.5%) while the most common HR-HPV genotype was HPV 16 (1.4%) followed by HPV 52 (1.0%), HPV 58 (0.9%), and HPV 18 and HPV 51 at equal frequency (0.7%). Both tests were abnormal in 1.6% (71/4428 women). Rates of HR-HPV detection were directly associated with severity of abnormal cytology: 5.4% among normal cytology and 13.0%, 30.8%, 40.0%, 39.5%, 56.3% and 100.0% among ASC-US, ASC-H, AGC-NOS, LSIL, HSIL, and SCC, respectively. Some 5% of women who had no HR-HPV had abnormal cytology, in which 0.3% had ${\geq}$ HSIL. Factors associated with abnormal cytology or HR-HPV were: age ${\leq}40$ years, education lower than (for cytology) or higher than bachelor for HR-HPV), history of sexual intercourse, and sexual partners ${\geq}2$. Conclusions: Rates for abnormal cytology and HR-HPV detection were 6.3% and 6.7% HR-HPV detection was directly associated with severity of abnormal cytology. Significant associated factors were age ${\leq}40$ years, lower education, history of sexual intercourse, and sexual partners ${\geq}2$.
본 연구에서는 우리나라에서 가장 많이 재배되고 있는 캠벨어얼리 포도 품종에서 포도가지를 대상으로 산화방지, 항염증 및 항가려움증 효과를 검증하고 활성물질을 나타내는 지표물질을 추적 조사하였다. 그 결과 포도가지 추출물의 총 폴리페놀과 총 플라보노이드 함량은 각각 $201.42{\pm}4.16$과 $11.85{\pm}0.44mg\;GAE/g$으로 조사되었다. 또한 캠벨어얼리 포도가지 추출물의 ABTS와 DPPH 라디칼 소거 활성은 각각 $45.60{\pm}0.09$ ($IC_{50}$)과 $299.13{\pm}0.22$ ($IC_{50}$)으로 나타나 산화방지 활성이 우수하였다. 게다가 캠벨어얼리 포도가지 추출물은 지방질다당류로 활성화된 RAW 264.7 세포에서 전염증성 매개물인 산화질소와 프로스타글란딘 $E_2$를 iNOS와 COX-2 분자 발현 억제를 통하여 억제하였고, 전염증성 사이토카인인 인터류킨-1베타와 인터류킨-6를 농도 의존적으로 억제하는 효능이 있었다. 더욱이 phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)와 calcium ionophore A23187로 활성화된 인간 유래 비만세포인 HMC-1 세포에서 종양괴사인자-알파와 인터류킨-6를 농도 의존적으로 억제하는 효능이 있었다. 마지막으로 Compound 48/80으로 유도되는 마우스 가려움증을 캠벨어얼리 포도가지 추출물은 효과적으로 억제하였다. 이러한 캠벨어얼리 추출물에서 활성을 나타내는 물질을 추적한 결과 레스베라트롤의 함량이 높게 검출되었다. 그러므로 본 연구의 결과를 종합해 볼 때 캠벨어얼리 포도가지 추출물은 아토피 질환에서 나타나는 염증과 가려움증을 효과적으로 제어할 수 있는 효과적인 소재임을 제시하였다.
The aerial part of Trichosanthes kirilowii Maxim. (Cucurbitaceae), has long been used in traditional Korean and Chinese medicines for the treatment of heatstroke. We isolated and identified three flavones, luteolin-7-O-${\beta}$-D-glucopyranoside(1), luteolin-4'-O-${\beta}$-D-glucopyranoside(2), luteolin(3) from its methanolic extract. In the present study, we found that luteolin attenuates the lipopolysaccharide(LPS)-induced inflammation in BV2 microglial cells. Luteolin significantly inhibited LPS-induced production of pro-inflammatory mediators such as nitric oxide(NO) and prostaglandin $E_2(PGE_2)$ in BV2 microglia in a concentration-dependent manner without cytotoxic effect. Luteolin dose-dependently suppressed the protein expression of inducible nitric oxide synthase(iNOS) and cyclooxygenase-2(COX-2). In addition, luteolin also showed significant induction of heme oxygenase(HO)-1. These results suggest that both the aerial part of T. kirilowii and luteolin may be good candidates to regulate LPS-induced inflammatory response.
In the present study, vasorelaxant effect of the extract of seeds of Oenothera odorata (SOO) and its possible mechanism responsible for this effect were examined in vascular tissues isolated from rats. Changes in vascular tension, 3',5'-cyclic monophosphate (cGMP) levels were measured in thoracic aorta rings from rats. Methanol extract of seeds of Oenothera odorata relaxed endothelium-intact thoracic aorta in a dose-dependent manner. A dose-dependent vascular relaxation was also revealed by treatment of ethylacetate, n-butanol, and H2O (aqua extract of seeds of Oenothera odorata , ASOO) extracts partitioned from methanol, but not by hexane extract. However, the vascular relaxation induced by ASOO were abolished by removal of endothelium of aortic tissues. Pretreatment of the endothelium-intact vascular tissues with NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) or 1H-[1,2,4]-oxadiazole-[4,3-α]-quinoxalin-1- one (ODQ) significantly inhibited vascular relaxation induced by ASOO. Moreover, incubation of endothelium-intact aortic rings with ASOO increased the production of cGMP. However, ASOO-induced increases in cGMP production were blocked by pretreatment with L-NAME or ODQ. The vasorelaxant effect of ASOO was attenuated by tetraethylammonium (TEA), 4-aminopyridine, and glibenclamide attenuated. On the other hand, the ASOO-induced vasorelaxation was not blocked by verapamil, and diltiazem. Taken together, the present study demonstrates that ASOO dilate vascular smooth muscle via endothelium-dependent NO-cGMP signaling pathway, which may be closely related with the function of K+ channels.
본 연구는 착상 후 단계의 쥐 배아와 난황낭을 대상으로 구리 결핍이 NO 하부 신호전달체계에 영향을 주는지를 알아보기 위한 것으로, 연구 결과는 다음과 같이 요약할 수 있다. 첫째, 구리 결핍은 정상적인 배아 및 난황낭 발달을 억제하고, NO의 생물학적 이용도와 아세틸콜린에 대한 NO dose-response를 낮추었다. 둘째, 구리 결핍은 NO의 하부 신호전달 물질인 cGMP 수준을 감소시켰으나, NO/cGMP 하부 신호전달체계 표적 중 하나인 P-VASP에는 영향을 미치지 않았다. 셋째, 구리 결핍 배양액에 NO donor를 첨가하는 것은 구리 결핍 배아와 난황낭의 기형 발생 빈도를 구리 정상군과 비슷한 수준으로 개선시켰다. 넷째, NO donor 첨가는 구리 결핍군에서 감소되었던 cGMP의 농도를 유의적으로 증가시켰지만, P-VASP에는 영향을 미치지 않았다. 상기 연구 결과들은 구리 결핍으로 인한 NO의 생물학적 이용도의 감소가 기형발생의 주요 발생 기전이라는 것을 뒷 받침하고 있다. 또한, 임상적으로 임신 기간 중 적절한 구리 섭취의 중요성을 강조한다.
Objectives : This study was carried out to know the effects of Danggwisayeokgaohsuyusaenggang-tang(hereinafter referred to DST) on arthritis induced by collagen on DBA/1 OlaHsd mice. Methods : For this purpose, DST was orally administered to mouse with arthritis induced by collagen II. Cytotoxicity, high performance liquid chromatograph(HPLC) analysis, arthritis index, value of immunocyte in draining lymph node and paw joint, cytokine were measured in vivo. Results : 1. The cytotoxicity against human fibroblast cells(hFCs) was not measured in any concentration. 2. In HPLC analysis, There are high peak patterns at 8 minute(min), 12 min, 35 min, 45 min. 3. The arthritis index was decreased significantly. 4. The degree of arthritis induced damage of joint of DST group is slight compared with control group in histopathologic observation(Hematoxylin and eosin stain(H&E), Masson's trichrome(M-T) staining). 5. In total cell counts of draining lymph node(DLN) and paw joint, the cells in DLN decreased significantly on DST 200 mg/kg and the cells in paw joint decreased significantly on 200 mg/kg and 50 mg/kg. 6. In DLN, $CD4^+/CD25^+$, $CD3^+/CD69^+$, major histocompatibility complex(MHC), class-II/$CD11c^+$ cells decreased significantly on DST 200 mg/kg and 50 mg/kg $CD3^+/CD8^+$ cells decreased significantly on DST 200 200 mg/kg, $CD4^+$, $CD3^+/CD44^+$ cells decreased. 7. In paw joints, $CD4^+$, $CD11b^+/Gr-1^+$ cells decreased significantly on DST 200 mg/kg and 50 mg/kg. 8. In joints, levels of $IL-1{\beta}$, IL-6, $TNF-{\alpha}$, cyclo-oxygenase-2(COX-2), NOS-II were decreased on DST 200 mg/kg and DST 50 mg/kg. 9. In analysing of cytokine in CD3/CD28 activated spleen, IL-17 was decreased significantly, IL-4 was increased significantly $INF-{\gamma}$ was decreased on DST 200 mg/kg. 10. In analysing of cytokine in collagen activated spleen, IL-17 were decreased significantly, IL-4 was increased significantly. Conclusions : This results demonstrated that DST suppressed the inflammatory progression of collagen-induced arthritis(CIA) mice and supported further studies are required to survey continuously in looking for the effective substance and mechanism in the future.
Objectives : This study was designed to investigate effects of the combination with Korean Red Ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer), Gastrodia Rhizoma (Gastrodia elata Blume) and Polygoni Multiflori Radix (Polygonum multiflorum Thunberg) on metabolic disorders including cholesterol and erectile dysfunction in hyperlipidemia rats.Methods : Animals were divided into six groups; Control with normal diet, high fat/cholesterol-diet (HFCD), fluvastatin, Korean Red Ginseng treated (KRG), and the combination treated (Korean Red Ginseng, Gastrodia Rhizoma and Polygoni Multiflori Radix; 1:1:1 for KGP1 and 2:1:1 for KGP2). The experimental groups initially received HFCD for 10 weeks and then treated orally with fluvastatin, KRG, KGP1 and KGP2 during the final 6 weeks. Erectile function was determined by the measurements of intracavernosal pressure (ICP) and maximal arterial pressure (MAP) after electrical stimulation of the cavernosal nerve.Results : KGP2 decreased the level of total cholesterol and LDL cholesterol in the sera of HFCD rats without no changes of body weights. KRG, KGP1 and KGP2 decreased the level of C-reactive protein (CRP) levels except of fluvastatin, synthetic HMG-CoA reductase inhibitor. KRG, KGP1 and KGP2 significantly increased the ICP, ICP/MAP ratio, area under the curve (AUC) compared with those of normal rat. Morphometric analyses showed that KRG, KGP1 and KGP2 increased the volume of smooth muscle and the regular arrangement of collagen fibers in corpus cavernosum of HFCD rats. The penile expression of eNOS was increased by KRG, KGP1 and KGP2.Conclusions : Based on these results, we suggest that the combination with Korean Red Ginseng, Gastrodia Rhizoma and Polygoni Multiflori may improve hyperlipidemia through regulating the lipid profiles and erectile dysfunction in rats.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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