• 한국식품영양과학회지
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• 제34권10호
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• pp.1633-1637
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• 2005

Driselase, Cellulase, Macerozyme R-200, Macerozyme R-10및 Sumyzyme MC 등 5종의 시판 식물세포벽분해효소가 당근의 세포벽물질(CWM)로부터 제조한 알콜불용성 잔사(AIR)와 cellulose fraction의 f-hydroxybenzoic acid 추출에 미치는 영향을 조사하였다. 당근AIR의 주된 페놀화합물은 P-hydroxybenzoic acid로 1,977 $\mu$g/g AIR였으며, vanillin, ferulic acid, p-hydroxybenzaldehyde가 각각 55.9, 13.6, 10.6 $\mu$g/g AIR인 것으로 나타났다. 효소에 함유되어있는 ferulic acid의 함량은 Driselase, Cellulase, Macerozyme R-200, Macerozyme R-10, Sumyzyme MC에서 각각 2,319, 2,060, 391, 95.2, 34.1 $\mu$g/g인 것으로 나타났다. 이들 효소와 세포벽물질과의 반응을 조사한 결과, Driselase와 AIR의 반응 후 유리된 p-hydroxybenzoic acid의 함량은 56 $\mu$g/g AIR로 알칼리 (4 M NaOH) 추출한 총량의 2.8$\%$에 해당한다. 따라서 p-hydroxybenzoic acid는 AIR과 셀룰로오스 분획으로부터 이들 효소에 의해 분리되기 어려운 것으로 나타났다.

• 미생물학회지
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• 제21권4호
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• pp.213-220
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• 1983

Conditions for isolation of protoplasts from conidiospores of Trichoderma koningii ATCC 26113 were tested. Maximum production of conidial protoplasts was obtained by preincubation of conidiospores on liquid minimal medium for 8 1/2 hrs. and by reaction with cell wall lytic enzyme for 3 hrs. Among effective cell wall lytic enzymes (Driselase, p-Glucuronidase, Novozyme and Zymolyase), Driselase was the most effective one on the production of conidial protoplasts. The production of conidial protoplasts was also enhanced by addition of 2-Deoxy-D-Glucose $(25{\mu}g/ml)$ into liquid minimal medium. Over 70% of the initial swollen conidia, preincubated in liquid minimal medium supplemented with 2-Deoxy-D-Glucose $(25{\mu}g/ml)$, were converted to protoplasts by incubation with 2% (w/v) commercial lytic enzyme Driselase at $28^{\circ}C$ for 3 hrs. The reversion frequency of the conidial protoplasts was about 30 times (25-50%) higher than that of mycelial protoplasts (0.6-1.3%).

• 한국균학회지
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• 제20권1호
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• pp.58-64
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• 1992

Trichoderma 속의 제균종중에서 10균주를 선별하여 protoplast 형성에 관한 제반조건을 검토하였으며 그 결과는 다음과 같았다. 보편적으로 protoplast 형성에 있어서 삼투안정제의 효과는 ${KCI}>(NH_4)_2{SO_4}>NaCl>mannitol>{MgSO}_4$ 순이었으며, 최적농도는 0.6-0.9M 사이에서 결정되었다. Protoplast형성을 위한 DRISELASE의 최적조건은 pH5.0, 효소농도 2%. 반응시간 4시간, 반응온도 $30^{\circ}C$ 이었다. NOVOZYM 234의 최적조건은 pH 5.5, 효소농도 1%,반응시간 3시간, 반응온도 $30^{\circ}C$ 이었다. Protoplast 생성은 대수증식기 초기와 증기사이의 균사체가 최적이었다. Protoplast 생성에 있어서는 DRISELASE가 효과적이었으나 T. longibruchiatum IAM 13107과 T. viride IAM 5141의 경우에는 NOVOZYM 234가 보다 효과적이었다.

• 한국균학회지
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• 제21권3호
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• pp.195-199
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• 1993

Fusarium oxysporum을 재료로 하여 polygalacturonase 활성능이 좋은 우량 균주를 개발하기 위하여 돌연변이주와 원형질체융합주를 선별하였다. MNNG를 처리하여 6개의 영양요구성 돌연변이주를 유도하였다. 세포벽 분해효소로는 driselase를 이용하고 삼투안정제로 0.6M KCI을 처리하여 돌연변이체로부터 원형질체를 얻었다. polyethyleneglycol 8,000과 $CaCl_2$를 이용하여 영양요구성 돌연변이체의 원형질체 사이에 융합을 시도하여 1개의 융합주를 얻었으며 융합률은 $5.0{\times}10^{-3}$이었다. polygalacturonase 활성도를 수정된 DNS법을 이용하여 측정하였다. 결과적으로, 선별된 융합주와 돌연변이주의 polygalacturonase 활성은 모균주와 비교하여 약 1.5배에서 3.5배가량 증가하였으며 그 중에서도 mutant Fx-2가 가장 높은 활성도를 나타냈다. 그러므로 이 방법은 우량균주개발을 위한 유용한 방법으로 판단되었다.

• 한국해양바이오학회지
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• 제12권1호
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• pp.50-58
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• 2020

Sphacelaria is a filamentous brown algal genus that can be epibiotic on macroalgae, marine plants, and sea turtles. Its important role in benthic ecosystems, exposure to different stressors (e.g., grazing), and use as a model organism make Sphacelaria ideal for assessing physiological responses of organisms to environmental inputs. Single-cell RNA sequencing is a powerful new probe for understanding environmental responses of organisms at the molecular (transcriptome) level, capable of delineating gene regulation in different cell types. In the case of plants, this technique requires protoplasts ("naked" plant cells). The existing protoplast isolation protocols for Sphacelaria use non-commercial enzymes and are low-yielding. This study is the first to report the production of protoplasts from Sphacelaria fusca (Hudson) S.F. Gray, using a combination of commercial enzymes, chelation, and osmolarity treatment. A simple combination of commercial enzymes (cellulase Onozuka RS, alginate lyase, and driselase) with chelation pretreatment and an increased osmolarity (2512 mOsm/L H₂O) gave a protoplast yield of 15.08 ± 5.31 × 10⁴ protoplasts/g fresh weight, with all the Sphacelaria cell types represented. Driselase had no crucial effect on the protoplast isolation. However, the increased osmolarity had a highly significant and positive effect on the protoplast isolation, and chelation pretreatment was essential for optimal protoplast yield. The protocol represents a significant step forward for studies on Sphacelaria by efficiently generating protoplasts suitable for cellular studies, including single-cell RNA sequencing and expression profiling.

• 미생물학회지
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• 제19권4호
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• pp.186-191
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• 1981

Protoplast production from Trichoderma koningii ATCC 26113 was investigated for the purpose of doing basic and applied researches by protoplast fusion of the cellulolytic filamentous fungus. High yields of protoplast were obtained by using the 18hr. old mycelia treated with the lytic enzyme Driselase of Kyowa Fermentation Co., Japan, in 0.6M $MgSO_4\;or\;(NH_4)_2SO_4$ as osmotic stabilizers. The optimum temeprature of mycelial digestion was about $28^{\circ}C$ and the number of protoplast increased rapidly after 3hr. digestion. Protoplasts produced at different periods showed distinct morphological heterogeneities in the whole size and the size of vacuole.

• 한국산림과학회지
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• 제74권1호
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• pp.29-36
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• 1986

이태리포푸라 I-214 (Populus euramericana cv. I-214)의 기내배양(器內培養)한 엽육조직(葉肉組織)에서 원형질체(原形質體) 분리(分離)에 미치는 몇가지 요인(要因)에 대(對)해 조사(調査), 검토(檢討)하였다. 기내(器內)에서 배양(培養)된 아(芽)를 다량(多量)으로 증식(增植)하기 위한 배지(培地)는 MS 기본배지(基本培地)에 $0.1mg/{\ell}$의 BAP를 첨가(添加)한 것이 가상 좋은 성적을 나타냈다. 엽(葉) 1g 당(當) $2.4{\times}10^6$개의 가장 높은 원형질체(原形質體) 분리(分離) 빈도를 나타낸 것은 Cellulase R-10 2 %, Macerozyme R-10 0.8 %, Hemicellulase 1.2 %, Driselase 2.0 %, Pectolyase Y-23 0.05 %에 DTT와 MES 완충액을 첨가(添加)한 후 삼투압 안정제로 0.6 M의 Mannitol을 넣고 pH를 5.6으로 조정한 효소용액(酵素溶液)이었다. CPW 용액(溶液)으로 세정(洗淨)한 후 0.6 M의 Sucrose 용액(溶液)에 처리(處理)한 것이 회수율(回收率) 51.8 %로 가장 높게 나타났다.

• 한국식물병리학회지
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• 제3권2호
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• pp.124-130
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• 1987

수도 도열병균(Pyricularia oryzae)의 균사체로부터 다량의 원형질체의 분리 및 세포벽 재생을 하기 위하여 필요한 몇가지 조건을 선발하였다. 나출을 위하여 기본용액으로 0.02M potassium phosphate buffer와 pH 5.2, 0.6M KCl로 삼투압을 조절하였고 분해효소는 ml당 각각 20mg Cellulase R-10, 5mg Macerozyme $-10, 10mg Driselase를 사용하였는데 각각의 단독처리구보다 3가지 효소의 복합처리구에서 원형질체 나출 정도가 우수하였다. 또한 선발된 복합효소액에 2일간 액체배양된 어린 균사체를 3시간, $30^{\circ}C$ 항온기에서 진탕했을 때 가장 많은 원형질체가 분리되었다. 원형질체로부터 세포벽의 재생은 순수 정제한 원형질체를 0.2M potassium phosphate와 0.6M KCl을 삼투압을 조절한 감자한철배지에 접종시켜 가장 높은 재생율을 얻을 수 있었다.

• 식물조직배양학회지
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• 제27권2호
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• pp.125-131
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• 2000

원형질체는 현탁배양된 세포괴로부터 1% cellulase R-10, 0.25% pectolyase Y-23, 그리고 0.5% driselase가 포함된 CPD 효소용액에서 4시간의 진탕 (40 rpm)조건에서 쉽게 분리되었다. 분리된 원형질체는 1 mg/L 2,4-D, 0.5 mg/L kinetin , 200 rng/L spermidine 그리고 68 g/L glucose가 포함된 KM 액체배지에서 배양되었으며, 또한 현탁배양중인 동종의 feeder cell이 있는 CP배지 위에 액체배양배지를 1 mL균일하게 퍼트린 후,$25^{\circ}C$, 암조건으로 4주간 양육배양하였다. 원형질체 유래 SF 캘러스는 0.05 mg/L IAA, 7 mg/L 2lip와 30mg/L sucrose가 첨가된 MS 재분화 배지에서 광조건으로 4주동안 배양되었을 때, 60% 이상의 shoot를 형성하였다. 이후, 식물의생장조절물질이 첨가되지 않은 MS 배지로 옮겨 뿌리를 유도하였으며, 재분화된 식물체는 토양으로 옮겨 배양 8주후에 종자를 형성하였다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제24권6호
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• pp.964-969
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• 1995

섬유성 biomass의 효율적인 이용을 위하여 CMCase, avicelase 분비력이 높은 균주(A. wentii MAW-598)와 ${\beta}-glucosidase$ (A. niger MAN-831) 분비력이 우수한 균주의 포자를 이용한 원형질세 형성.재생조건 및 융합을 실시하였다. 원형질체 형성 및 재생의 최적조건은 5일 성숙한 포자를 $30\mu\textrm{g}/ml$ 농도의 2-DG로 4시간 전배양하여 0.7M KCI 삼투압 안정제, novozyme(7.5mg/ml)+driselase(2.5mg/ml) 혼합효소로 5시간 반응시키는 것이 효과적이었다. 원형질체 융합 조건은 $CaCl_2$ 15mM, 25% PEG 4000, pH 5-7, $36^{\circ}C$에서 25~30분간 처리하였을때 효과적이었으며, 융합빈도는 $7.94\;{\times}\;10^{-4}$로 나타났다. FA-208 융합주는 친주에 비하여 각각 1.5, 1.3, 1.2배 효소활성의 증가를 나타내었다.