A gene coding for the GST of cotton (Gh-5) was cloned into Escherichia coli and experssed. The enzyme remained within the cytoplasm of E. coli. An 696 bp open reading frame was in the 988 base pair fragment of the recombinant plasmid pET-30b(+). The deduced protein sequence consists of 232 amino acids and has a molecular mass of 30235.58 Da. The cloned enzyme conjugated reduced glutathione and 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB). Plant GST cDNA was expressed in microbe and produced polypeptide had function as an enzyme.
생체에 투입되는 이물질(xenobiotics)들이 돌연변이를 일으키고 나아가서는 암을 유발시키게 되는 것은 이물질들이 생체내에서 어떤 양상으로 대사되느냐, 즉 이물질이 독성화되는 과정과 해독되는 과정에 있어서의 활성도의 차이에 따라 좌우되는 것으로 알려져 있다. 따라서 인삼이 이물질 대사 및 해독작용에 어떤영향을 미치는가를 밝혀보기 위하여 동물 실험을 통하여 발암물질로 알려진 Benzopyrene과 그 외 다른 유독한 화학약물들의 대사과정에 미치는 영향을 조사하여 보았다. 인삼투여군에 있어서 cyt. P-450와 관련된 Monooxy-genase system이 선택적으로 유도되었고 또 해독작용에 필수적인 Conjugation도 현저히 상승되었다. 이와 같은 이물질 해독작용의 선택적 유도는 인삼이 이물질 대사과정에 영향을 미쳐 독성물질 해독 항진효능이 있음을 제시해 주는 것으로 해석되어진다.
${\beta}$-Glucuronidase (EC 3.2.1.31) which hydrolizes D-glucuronate from ${\beta}$-D-glucuronide was purified from rat liver, using ammonium sulfate fractionation, DEAE-cellulose chromatography, Concanavalin-A Sepharose 4B chromatography and gel filtration on Sephadex G-200. This enzyme has the molecular weight of 280,000 daltons by gel filtration and 75,000 daltons by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. As its funtion is reverse of detoxification in the liver, the inhibition of the enzyme was tested with extracts of several food products and medicinal herbs, some are known as anti-cancer agents. Among them, Panax ginseng and Cortnellus shiiake inhibited the enzyme competitively and the $K_1$ values were $9.22 {\times}\;10^{-2}$ and 0.102 mg/ml, respectively. These inhibitors strongly bound to DEAE-cellulose. The negatively charged amino acids, L-aspartate and L-glutamate, inhibited the enzyme, and $K_1$ value of L-aspartate was 0.80 mM. The interaction between ${\beta}$-glucuronidase and p-nitrophenyl-${\beta}$-D-glucuronide was found to involve ionic forces by the effect of ionic strength on the kinetic constant, Vmax/Km. It was inferred from these findings that cationic group at the active center of the enzyme is probably involved in attacking the substrate.
신규 제초제 작용점의 발굴은 유전체학과 조합화학 등 새로운 기술이 등장하여 그 가능성이 높아지고 있다. 대략 $10^{30}$에서 $10^{50}$여 개의 화학물질의 합성이 가능하고 50,000여 개의 식물 유전자 지도가 완성되어 이들의 조합으로 새로운 제초제의 작용점 발굴 가능성이 높아지게 될 것이다. 즉, 고등식물이 가지고 있는 50,000여 개의 유전자 가운데 0.1%, 1.0% 또는 10%가 신규 작용점이 된다면 50, 500, 5000개의 신규 작용점을 발견할 수 있는 것이다. 신규 제초제의 개발을 위해서는 target enzyme의 선택과 결정, 저해제의 설계, 작용점까지 도달하는 과정, 대사적인 운명 등 여러가지 요인들이 검토되어야 한다. 이러한 과정에서 가장 중요한 것은 확실한 작용점의 선택에 있다. 또한 다양한 생화학적 정보를 통하여 작용점/효소의 저해로부터 고사에 이르는 과정을 이해함은 물론 보다 강력한 저해제의 합성과 살초과정을 이해할 수 있어야 할 것이다. 그 동안에는 이미 알려진 작용점을 대상으로 신규 화합물을 합성하거나 유도체를 개발하는 것이 대부분이었지만 최근에는 antisense 기법 등을 활용하여 새로운 치사관련 작용점을 찾아내는데 잠재력과 가능성을 확대시켜주고 있다. 새로운 치사관련 작용점을 발굴한 후에는 대상효소의 화학적, 생화학적 기능과 단백질의 구조를 분석하여 강력한 저해제를 설계하는데 활용하게 될 것이다. 치사관련 돌연변이체와 antisense 기법을 활용하고, 식물 생리학적 반응을 기초로 하여 리드화합물을 탐색하는 것은 새로운 접근방식이며 농약 화학적 특성을 갖는 효소 저해제들의 합성은 크게 6가지로 할 수 있다. 공통특이시얀 기질 유사체 합성, affinity labels, 자살기질체, 반응중간산물, 그리고 extraneous site inhibitors 등을 들 수 있다. 이와 같은 방법으로 후보화합물이 선발된다 하여도 실제식물에 처리하여 흡수, 이행, 대사 등에 관한 시험이 반드시 이루어져야 새로운 제초제를 탄생시킬 수 있다. 또한 약물의 전달과정과 무독화작용을 통하여 pro-herbicide에 대한 연구를 진행하게 될 것이며, 마지막으로 잡초와 작물간의 선택성이 고려되어야 효소 측이적 접근방식에 의한 신규 선택성 제초제의 개발이 성공할 수 있는 것이다.
Fungicide treatment is the most important method for the control of plant diseases caused by phytopathogenic fungi. But fungicide resistant strains have appeared in many phytopathogenic fungi. Until now, molecular mechanisms of fungicide resistance such as mutation of target protein, overproduction of target enzyme and detoxification of fungicide have been designated. Recently, it was demonstrated that active efflux of fungicides mediated by ATP-binding cassette (ABC) transporters also contributes to fungicide resistance in several filamentous fungi, such as Aspergillus nidulans, Penicillium digitatum and Botrytis cinerea.(중략)
The pesticide and carcinogen ethylene dibromide(EDB) is metabolized both by cytosolic GSH S-transferase and by microsomal mixed function oxygenase. Cytochrome P-450 IIE1 appears to be major enzyme to metabolize EDB.EDB is activated to a mutagen by enzymatic conjugation with glutathione (GSH). Such activation is an exception to the general mode of detoxification via GSH S-transferase action. The primary DNA adduct (>95) is S-[2-(N7-guanyl)ethyl] GSH and a minor adduct is S-[2-(N7-guanyl)ethyl]cysteine, which is excreted in the urine and may serve as a biomarker of damage.
Cytochrome P-450 3A4 (CYP3A4) is major enzyme in human liver, the role of this is detoxification and metabolizing more than 50% clinical drugs in use. The transcription of CYP3A4 is regulated by the Pregnenolone X receptor (PXR),of which human form is Steroid and Xenobiotics receptor (SXR).(omitted)
Water extract from Cnidii Rhizoma (CRW) was tested for colon cancer chemopreventive activity by measuring the induction of phase II detoxification enzyme activity [quinone reductase (QR) and glutathione S-transferase (GST)] and glutathion (GSH) levels and ornithine decarboxylase (ODC) activity in cultured human colorectal adenocarcinoma HT-29 cells. CRW inhibited cell proliferation in cultured HT-29 cells. CRW induced QR activity in a dose-dependent manner in a concentration range of 0.1${\sim}$5.0 $mg/m{\ell}$. GST activity was also induced with the treatment of CRW in HT-29 cells. In addition GSH levels was increased with CRW. CRW inhibited ODC activity, a key enzyme of polyamine biosynthesis, which is enhanced in tumor promotion. These results suggest that CRW has colon cancer chemopreventive activity by increasing phase II enzyme activity and GSH levels and inhibiting ODC activity in vitro.
댑싸리하고초 약침액을 이용하여 phase II detoxification 효소인 quinone reductase (QR 및 GST) 유도, GSH 생성량, phase I 효소 cytochrome P4501A1 활성억제, 발암물질 B[a]P-DNA adduct 형성의 저해효과 등을 측정하였다. QR 생성 유도를 Hepa1c1c7로 실험한 결과, 댑싸리하고초 약침액및 열수추출액 모두에서 유도 되었으며, 농도가 높아질수록 유도율이 더 높게 나타났으며, GSH와 GST의 유도율도 약침액에서 나타났다. 댑싸리하고초 약침액 $5{\times}$에서 45.2%의 cytochrome P4501A1 효소활성 저해효과를 측정할 수 있었다. 또한 B[a]P-DNA binding 저해효과를 실험한 결과, 약침액 $3{\times}$ 농도에서 45.0%의 저해효과가 있었다. 이상의 결과에 의하면 댑싸리하고초 약침액은 암억제 물질로서의 기능을 충분히 발휘할 것으로 사료된다.
To study the relationship between oxygen tolerance and enzyme activity in the oxygen metabolism of bifidobacteria, the activities of catalase, superoxide dismutase (SOD), NADH oxidase and NADH peroxidase from six typical bifidobacteria and other bacteria were assayed by spectrophotometry. Catalase activity was hardly detected in any of the bifidobacteria tested. SOD activity was detected in every species including the Clostridium species. In particular SOD activity was notably high in the aerosensitive Bifidobacterium adolescentis. This fact indicates that SOD activity is not a critical factor to ensure aerotolerance. Aerosensitive B. adolescentis showed very low NADH oxidative enzyme activity whereas other aerotolerant bifidobacteria exhibited considerable activity for the enzymes. It seems that detoxification of $H_2O_2$ by NADH oxidative enzymes might be an important factor in improving for aerotolerant bifidobacteria survival rates in an oxygen environment.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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