This study describes RT-PCR and in situ hybridisation protocols, and the immunohistochemical detection method that we have developed to detect and localise cells that express HO-1 in the skin. We found that HO-1 mRNA was absent in normal mouse skin, but after UVA irradiation HO-1 mRNA was expressed in the dermal fibroblasts, and strongly in basal epidermal cells. HO-1 protein was also induced strongly in dermal fibroblasts, and also in epidermal cells. In addition, the HO substrate heme was reduced in skin microsome at 72 hrs post UVA (when HO activity is high). At the same time, the HO products bilirubin and iron levels were elevated in the cutaneous tissue. Thus in addition to a dermal response, there appears to be an epidermal HO response to UVA in vivo that may be relevant for immune modulation by UVA radiation.
피부는 낮 동안 태양빛과 인공 빛에 끊임없이 노출되어 있으며, 그중 5%는 UV 영역, 50%는 가시광선, 나머지 45%는 적외선 영역으로 구성되어 있다. 이중 자외선의 피부에 대한 영향은 많은 연구가 되어 왔으나, 나머지 영역에 대한 연구는 미진한 실정이다. 이에, 가시광선에서 적외선 사이의 파장이 피부 섬유아세포에 어떤 영향을 미치는지 연구하고자 하였다. 광처리에 의한 효과는 광파장, 처리 시간, 광세기, 광조합 등 다양한 파라미터들의 조합에 의해 그 효능이 결정되므로, 본 연구에서는 섬유아세포의 성장 및 콜라겐 합성과 관련된 기능을 촉진시킬 수 있는 광처리 조건을 찾아내고자 하였다. 가시광선과 적외선 영역 사이의 6개의 파장을 처리한 결과, 레드(630 nm)와 그린(520 nm) 파장에 의해 섬유아세포의 증식이 증가함을 확인하였다. 광처리 시간은 콜라겐 합성량 증가를 위해서는 10 min의 광처리가 30 min의 광처리 보다 적합한 조건이었다. 광세기는 $0.05{\sim}0.75mW/cm^2$에서 6개의 광세기로 분할하여 실험한 결과, 레드 $0.3mW/cm^2$와 그린파장 0.15, $0.3mW/cm^2$ 세기가 type I collagen의 mRNA의 양을 증가시킬 수 있었다. 마지막으로 두 개 파장을 순차적으로 조합 처리하였을 때의 효과를 확인한 결과, 레드와 그린파장의 조합 조건은 섬유아세포의 수적증가를 목적으로 할 때 효율적인 방법이며, 콜라겐 합성에는 레드 단독처리가 보다 효과적인 방법이었다. 따라서 본 연구에서 제시하는 광처리 조건을 이용시 피부 세포의 성장이나 콜라겐 합성에 긍정적 영향을 유도할 수 있으며, 재생 및 피부 미용 등에 활용할 수 있는 가능성이 클 것으로 기대된다.
Retinoids are essential regulators of spithelial cell growth and celluar differentiation. They are also known to be effective in photoaging. It was reported that topical application of retinoic acid improves facial wrinkle carsed by collagen synthesis reduction in photodamaged skin. Collagen synthesis by retinoic acid may contribute to the wrinkle effacement. Since celluar retinoic acid binding protein II is slsctively induced in human skin and dermal fibroblasts in vitro by retinoic acid, this response can be used to mesure retinoids potency and activity. In order to know the activity of retinoids and their relations with collagen synthesis, we treated dermal fibroblasts with retinoids for 48 hours at 10-6-10-7M and measured CRABPII mRNA level by quantitative Nortern blotting. We also measured the rate of collagen systhesis by retinoids using 3-dimensional dermal equivalent. CRABPII mRNA level was increased 3-fold by retinoic acid, 2.1-fold by retinol and 1.4-fold by retinaldehyde. Collagen systhesis was increased 34% by all-trans retinioc acid, 26% by retinol, 17% by retinaldehyde and 7% by retinyl palmitate. From the above results, retinoids were found to be a potent indecers of CRABPII mRNA and collagen synthesis. Though retinoic acid was the most effective, its use has been restricted because of the side effects. Instead, retinol can be a best candidate in cosmetics for the treatment of photodamaged skin in terms of efficacy and safety.
It was assumed that the effect of estrogen on wound healing would be variable according to patient's gender and age since estrogen is a sex steroid. This study was designed to determine the variability of the effect of estrogen on proliferation of human dermal fibroblasts and collagen synthesis which are most important in wound healing considering patient's gender and age. Fibroblasts were isolated from the dermis of female patients in premenstrual, menstrual, or postmenopausal age group and that of male patients. The isolated fibroblasts were cultivated in the presence of estrogen($1.0{\mu}g/ml$). The cells were seeded at $5.0{\times}10^3cell/well$ in Dulbecco's Modified Eagle's Medium/Ham's F-12 nutrient including 5% fetal bovine serum in 96-well plates. The cells were incubated for 3 days. For fibroblast proliferation MTT assay method was used. To measure the production of collagen, the collagen type I carboxy- terminal propeptide enzyme immunoassay was carried out. Estrogen stimulated the proliferation of fibroblasts in female patients, but not in male patients. The greatest cell proliferation and collagen synthesis was seen at women in menstrual and postmenopausal age. These results demonstrated that effects of estrogen on dermal fibroblast proliferation and collagen synthesis were variable with gender and age.
Ultraviolet (UV) radiation-induced loss of dermal extracellular matrix is associated with skin photoaging. Recent studies demonstrated that keratinocyte-releasable stratifin (SFN) plays a critical role in skin collagen metabolism by inducing matrix metalloproteinase 1 (MMP1) expression in target fibroblasts. In the present study, we examined whether SFN released from UVB-irradiated epidermal keratinocytes increases MMP1 release from dermal fibroblasts, and whether these events are affected by p-coumaric acid (p-CA), a natural phenolic compound with UVB-shielding and antioxidant properties. HaCaT cells were exposed to UVB in the absence and presence of p-CA, and the conditioned medium was used to stimulate fibroblasts in medium transfer experiments. The cells and media were analyzed to determine the expressions/releases of SFN and MMP1. UVB exposure increased SFN release from keratinocytes into the medium. The conditioned medium of UVB-irradiated keratinocytes increased MMP1 release from fibroblasts. The depletion of SFN using a siRNA rendered the conditioned medium of UVB-irradiated keratinocytes ineffective at stimulating fibroblasts to release MMP1. p-CA mitigated UVB-induced SFN expression in keratinocytes, and attenuated the MMP1 release by fibroblasts in medium transfer experiments. In conclusion, the present study demonstrated that the use of UV absorbers such as p-CA would reduce UV-induced SFN-centered signaling events involved in skin photoaging.
본 논문에서는 인간의 피부섬유모세포(Human dermal fibroblasts)로부터 확보한 전사체 정보를 활용하여 나이를 예측하는 방법을 소개한다. 제안 방법에서는 훈련을 통해 확보한 분류기 및 회귀 모델을 이용하여 샘플이 속한 적합한 연령 그룹을 선택한 후, 선택된 연령 그룹에 속하는 훈련 데이터의 관측값을 활용하여 구체적인 연령을 예측한다. 연령을 예측하려는 샘플이 입력되면 복수 개의 판별 규칙이 순서대로 실행되는데, 개별 판별 규칙에서는 분류기와 회귀 모델을 동시에 실행하여 해당 판별 규칙에 대한 선택조건이 만족되는지 여부를 확인한다. 선택 조건이 만족될 경우 판별 규칙의 타겟 연령 그룹에 속하는 데이터를 이용하여 훈련된 회귀 모델로 연령을 예측하며, 선택 조건이 만족되지 않으면 후속 판별 규칙을 실행한다. 공개 데이터에 대하여 실험한 결과 기존 연구에서 달성한 7.7년의 평균 예측 오차보다 우수한 5.7년이라는 평균 예측 오차를 달성함을 확인하였다.
In order to investigate the effects of GamiTakliSodocyum(GTS) on wound healing, migration of epidermis, formation of granulation tissue and number of capillary within the granulation tissue were measured in diabetic mice by local application and NZW rabbits by local application and prescription of medicine in vivo, and proliferation of human epidermal keratinocytes and human dermal fibroblasts and composition of extracellular matrix were measured in vitro. The results were summerized as follows. 1. $2\%,\;10\%$ GTS remarkably increased migration of epidermis in diabetic mice by local application. 2. $2\%,\;10\%$ GTS remarkably increased formation of granulation tissue, number of neovascularization within the granulation tissue in diabetic mice by local application. 3. 5\%,\;10\%$ GTS remarkably increased migration of epidermis in NZW rabbits by local application. 4. $5\%,\;10\%$ GTS remarkably increased fonnation of granulation tissue, number of neovascularization within the granulation tissue in NZW rabbits by local application. 5. $5\%,\;10\%$ GTS increased migration of epidennis in NZW rabbits by prescription of medicine. 6. $5\%,\;10\%$ GTS increased formation of granulation tissue, number of neovascularization within the granulation tissue in NZW rabbits by prescription of medicine. 7. GTS didn't show effect on the proliferation of human epidermal keratinocytes. 8. GTS increased the proliferation of cultured human dermal fibroblasts. 9. GTS increased the expression of procoliagen ${\alpha}1(I) mRNA in cultured human dermal fibroblasts. 10. GTS increased the expression of fibronectin mRNA in cultured human dennal fibroblasts according to dosage of GTS using northern blot hybridization but didn't increase, using RT-PCR. From the above results, it is conclude that GTS might use on wound healing.
Purpose: Human acellular dermal matrix(ADM) is widely used in the treatment of congenital anomalies and soft tissue deficiencies. But it is rapidly degraded in the body and does not provide satisfactory results. There is a need to improve collagen fiber stability through various methods and ultimately regulate the speed of degradation. Methods: The ADMs were added with various cross-linking agents called glutaraldehyde, dimethyl 3,3'-dithiobispropionimidate to produce cross-linked acellular dermal matrices. 1,4-butanediol diglycidyl ether solution was applied with a pH of 4.5 and 9.0, respectively. The stability of cross-linked dermal matrix was observed by measuring the shrinkage temperature and the degradation rates. The cross- and non-cross linked dermis were placed in the rat abdomen and obtained after 8, 12 and 16 weeks. Results: The shrinkage temperature significantly increased and the degradation rate significantly decreased, compared to the control(p<0.05). All of cross-linked dermises were observed grossly in 16 weeks, but most of non-cross linked dermis were absorbed in 8 weeks. Histologically, the control group ADM was found to have been infiltrated with fibroblasts and most of dermal stroma were transformed into the host collagen fibers. However, infiltration of fibroblasts in the experiment was insignificant and the original collagen structure was intact. Conclusion: Collagen cross-linking increases the structural stability and decreases degradation of acellular dermis. Therefore, decrease in body absorption and increase in duration can be expected.
Kim, Ju-Young;Kim, Young-Ae;Yun, Hye-Jeong;Park, Hye-Min;Kim, Sun-Yeou;Lee, Kwang-Gill;Han, Sang-Mi;Cho, Yun-Hi
Nutrition Research and Practice
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제4권5호
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pp.362-368
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2010
Oral administration of royal jelly (RJ) promotes wound healing in diabetic mice. Concerns have arisen regarding the efficacy of RJ on the wound healing process of normal skin cells. In this study, a wound was created by scratching normal human dermal fibroblasts, one of the major cells involved in the wound healing process. The area was promptly treated with RJ at varying concentrations of 0.1, 1.0, or 5 mg/ml for up to 48 hrs and migration was analyzed by evaluating closure of the wound margins. Furthermore, altered levels of lipids, which were recently reported to participate in the wound healing process, were analyzed by HPTLC and HPLC. Migration of fibroblasts peaked at 24 hrs after wounding. RJ treatment significantly accelerated the migration of fibroblasts in a dose-dependent manner at 8 hrs. Although RJ also accelerated the migration of fibroblasts at both 20 hrs and 24 hrs after wounding, the efficacy was less potent than at 8 hrs. Among various lipid classes within fibroblasts, the level of cholesterol was significantly decreased at 8 hrs following administration of both 0.1 ug/ml and 5 mg/ml RJ. Despite a dose-dependent increase in sphinganines, the levels of sphingosines, ceramides, and glucosylceramides were not altered with any concentration of RJ. We demonstrated that RJ enhances the migration of fibroblasts and alters the levels of various lipids involved in the wound healing process.
Mechanical stimulation is known to activate several cellular signal transduction pathways, leading to the induction of signaling molecules and extracellular matrix (ECM) proteins, thereby modulating cellular activities, such as proliferation and survival. In this study, primary human dermal fibroblasts (HDFs) were seeded onto chitosan-based scaffolds, and then cultured for 3 weeks in a bioreactor under a cyclic strain of 1 Hz frequency. Compared to control samples cultured under static conditions, the application of a cyclic strain stimulated the proliferation of HDFs in I week, and by week 3 the thickness of the cell/scaffold composites increased 1.56 fold. Moreover, immunohistochemical staining of the culture media obtained from the cell/scaffold samples subjected to the cyclic strain, revealed increases in the expression and secretion of ECM proteins, such as fibronectin and collagen. These results suggest that the preconditioning of cell/scaffold composites with a cyclic strain may enhance the proliferation of HDFs, and even facilitate integration of the engineered artificial dermal tissue into the host graft site.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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