Objectives Eucommiae cortex is one of the frequently used herbs for musculoskeletal disorders, with well-known anti-inflammatory effect. Meanwhile, powdered form of herbal drugs is more advantageous than decoction form, in that storing and taking is more convenient. Thus, the authors aimed to investigate whether the drying method affects the index compound level and anti-inflammatory effect of eucommiae cortex water extract. Methods Eucommiae cortex was extracted in distilled water at $100^{\circ}C$ for 3 hours, filtered, and then evaporated under vacuum. One half of the sample was freeze-dried at $-80^{\circ}C$. Another half of the sample was added with dextrin and then spray-dried at $180^{\circ}C$. To assess the possible change in index compound content, pinoresinol diglucoside was selected as the index marker. The content level of the index compound in various extract sample was quantified through high performance liquid chromatography. In addition, iNOS assay in LPS-induced RAW 264.7 cells was adopted to determine the anti-inflammatory effect of various extract samples. Furthermore, MTT assay was performed to confirm that the result of iNOS assay was not due to cytotoxicity. Results There was no significance difference in index compound content between extract samples obtained through two different drying methods. Anti-inflammatory activity of extract samples were similar at the matching concentration, regardless of the drying methods. Extract samples did not show any significant cytotoxicity. Conclusions Extract samples of eucommiae cortex were obtained through freeze-drying and spray-drying. Neither change in index compound content nor difference in anti-inflammatory activity was observed between drying methods.
We derived following result by organizing research about processing of medicinal of before Han(漢) dynesty. The human being intake of natural substance for the purpose of treatment was what happened later than the use of natural substance as food. According to the record of by the early years of Shang(商) dynasty, we can assume that we cooked food with water and fire. The reason why there is no appearance of common production that can be included under the name of 'Tang Ye(湯液)' in the medical record discovered from Ma Wang Dui(馬王堆) is because 'Tang Ye' was yet developed. However, as the presentation of format of medicine process, there was gradual formation of medicinal fluid concept. There are quite of records on major details of cloth manufacture like washing and selection, grinding, processing of medicine from the recordings of "Wu Shi Er Bing Fang(五十二病方)", "Yang Sheng Fang(養生方)", "Za Liao Fang(雜療方)" discovered at Ma Wang Dui. It used words like 'Ze(擇)', 'Qu(去)' for the selection and 'Jiu(酒)', 'Zhuo(濯)' for the wash as a process method before cloth manufacture. When filter the processed medicine, it used words like 'Zhuo(捉)', 'Suo(索)', 'Jun(浚)' and used 'Yin Gan(陰乾)', 'Bao(暴)', 'Yang(暘)' for dry. The 'cutting(切削)' that crushes the medicine used different names based on the properties of medicines. The most frequent crush is 'Ye(冶)' and it means the powered medicine after dry. There was thermal process of mild fire(微火) and heating of 'Wen(溫)'. There are many states of medicine seen from the medical record discovered at Ma Wang Dui so they can be said as original medicine. 藥末劑 is relatively commercialized type then. Here, it includes later 湯劑 but there was no name such as 'decoction(湯)' or 'decoction of medical ingredients(湯液)'. Also, 'Fu Ju(㕮咀)' is the transformation of what was 'Fu Qie(父且)' at "Ja Liao Fang" of medical books of Ma Wang Dui with time flow. The original meaning of 'Fu Qie(父且)' is 'Fu Zu(斧俎)' and it means the crushing medicine with axe. The most important thing among the medical books of Han dynasty is "Shen Nong Ben Cao Jing(神農本草經)" and "Shang Han Za Bing Lun(傷寒雜病論)" of Zhang Zhong Jing(張仲景). "Shen Nong Ben Cao Jing" mentioned the dry method of medicine, collection and process production time, cooked and uncooked use of medicine and there are several types of medicine. Other than those, it mentioned 'Seven methods of combining herbs(七情合和)' to address cautions for combining medicines. Therefore, the 'processing of medicinal' in east Han dynasty period entered the theoretical step. However, there is only little recording on cloth manufacture of detailed medicine. From the "Shang Han Za Bing Lun" of Zhang Zhong Jing, the development in the way of 'processing of medicinal' reveled the cloth manufacture for each medicine. This tradition is continued until today and so it presents the development of purpose of 'processing of medicinal' is to greatly present the effect of medicine and to reduce the side-effect.
음양곽 성분 중에서 icariin, magnoflorine을 분리하고 이를 표준품으로 음양곽 추출액의 이들 성분에 대하여 HPLC를 이용한 정량법을 수립하였으며 이 성분들의 추출효율을 여러 가지 추출조건하에서 검토하고 그 함량을 분석 하였다. Icariin은 0.1-0.4 mg/ml 농도에서, magnoflorine은 0.02-0.1 mg/ml 농도에서 아래와 같은 조건으로 정량 분석하였다. Icariin의 HPLC조건 :칼럼, LiChrosorbRPl8; 용출용매, MeOH/water/acetic acid (60 : 40 : 0.5); 검출기, 자외부 흡광광도계; 측정파장, 270 nm; 주사량, $25\;{\mu}l$. Icariin의 retention time은 7.37 min으로 다른 성분과도 잘 분리되었다. Icariin 0.1-0.4 mg/ml 50% (v/v)에탄올 용액에 대해 검량선을 작성하여(n=8) 직선을 얻었으며 그 회귀선은 y = -1.4+18296x이고 correlation coefficient (r)=0.9999로 1.00에 매우 접근하였다. Magnoflorine의 HPLC 조건 : 칼럼, LiChrosorb RP18; 용출용매, MeOH/80 mM $Na_{2}\;HPO_{4}/water$ (35 : 35 : 30); 검출기, 자외부 흡광광도계; 측정파장, 270nm ; 주사량, $25\;{\mu}l$. Magnoflorine의 retention time은 11 min이고 $2{\sim}10\;mg/100\;ml$ 50% 에탄올용액을 표준액으로 검량선을 작성하여 직선상의 검량선을 얻었으며(n=6) 그 회귀직선은 y = -0.02+5.7X이고 correlation coefficient (r)=1.0079로 1.00에 근접하였다. 음양곽의 추출용매로 물 또는 50% (v/v)에탄올을 사용하고 추출온도, 추출시간을 달리하였을 때 icariin, magnoflorine, 엑기스의 추출효율을 분석하였다. Icariin은 $50{\%}$ 에탄올($80^{\circ}C$, 1시간)로 추출하였을 때와 물($100^{\circ}C$, 3시간)로 가열 추출하였을 때 거의 같은 정도로 추출되었으나 magnoflorine은 50% 에탄올로 추출하였을 때 더 많이 추출되었다. 반면에 음양곽의 엑기스량은 50% 에탄올로 추출하였을 때 가장 적었고 물로 추출하였을 때는 추출시간이 길면 길수록 더 많았다. 음양곽을 직접 차(茶)로 음용할 때의 추출 조건에서는 icariin 및 magnoflorine의 추출 효율이 약 25%이므로 음양곽 엑기스로 가공한 차제제가 더 바람직하다고 생각된다. 음양곽 중에 icariin및 magnoflorine의 함량은 각각 0.94, 0.16%임을 처음으로 분석하였다.
한방 보혈제의 기본처방인 사물탕과 보기제의 기본 처방인 사군자탕의 방사선 조사 마우스에서의 방사선 방호 효과를 소장움 생존(고선량 방사선, 12 Gy), 조혈세포 생존(중간선량 방사선, 6.5 Gy), apoptosis 형성(저선량 방사선, 2 Gy) 실험법을 적용하여 관찰하였다. 방사선조사 전 사물탕투여군(경구투여: 음수 mL당 2 mg씩 7일간, 복강내주사: 마리당 1 mg씩 방사선 조사 24시간 전)에서 소장움의 생존이 증가되었으며 (방사선대조군: $38.48{\pm}4.34$, 복강내 주사군: $77.98{\pm}16.11$, P<0.005), endogenous spleen colony의 형성도 높게 나타났고(방사선대조군: $3.5{\pm}4$, 경구투여군: $10.7{\pm}7.730$, 복강내주사군: $8.667{\pm}5.244$, P<0.05), 소장움에서의 apoptotic cell의 발생율은 억제되었다(방사선대조군: $5.111{\pm}0.529$, 복강내주사군 $3.919{\pm}0.214$, P<0.01). 사군자탕 병행투여군에서는 이상의 실험에서 통계적으로 유의성 있는 효과는 없었다. 이상의 결과는 사물탕이 방사선방호 식품으로 활용될 수 있는 가능성을 제시하였으며, 각 구성약재 및 성분의 효과에 대한 연구가 계속되어야 할 것이다.
Objectives : Hwangryunhaedok-tang (HRHDT) is one of the well-known prescription herbal drugs of Korean herbal medicine, which has been widely used for the treatment of various bacterial and inflammatory diseases. This study was conducted in order to develop the tablet formulations of HRHDT and compare its efficacy with the other commercial formulations. Methods : Corresponding herbal medicines comprising of HRHDT were extracted with water for 3 hr at $95{\sim}100^{\circ}C$ and then vacuum dried. Subsequently, some pharmaceutical excipients such as microcrystalline cellulose, croscarmellose sodium, magnesium stearate, etc were used to prepare the HRHDT tablets. The contents with characterizing components of HRHDT tablet was compared with the HRHDT decoction. The contents of characterizing components were analyzed with HPLC. Furthermore, we investigated the anti-inflammatory and anti-oxidative abilities of two different commercial HRHDT granules (HJP-1 and HJP-2) and were compared with that of the formulated HRHDT tablets. The anti-oxidant properties of HRHDR were studied using the 1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl (DPPH) radical, contents of total flavonoid and polyphenol. In addition, based on this result the anti-inflammatory effects have verified by mechanism from LPS- treated Raw264.7 macrophages. Results : The results demonstrated that HRHDT tablets showed more anti-inflammatory and anti-oxidative effects than HJP-1, HJP-2. Moreover, it showed more superior effects in terms of dose, usability and stability than the granules. Conclusion : Hence, we concluded that in order to improve the quality and efficacy of the Korean herbal medicine, it is necessary to develop appropriate methods and establish standardized techniques for the development of good formulations.
수종의 식물병원균(흰비단병균, 균핵병균, 좀검은균 핵병균)이 생산하는 가수분해산소(Cellulase Cx, Invertase, $\beta-amylase$, Xylanase, PMG, PG, Phosphatase, Protease)를 균계체내의 효소 및 배양여액내의 효소와 균핵내의 효소(좀검은균핵병균은 제외)로 나누어 그의 생산량과 pH에 따른 활성의 변화를 검토한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 배양 10일후의 Cx활성은 균핵병균이 다른 균에 비하여 활성이 높았고 흰비단병균과 균핵병균은 산성측(pH 3.0 부근)에서, 좀검은균핵병균은 중성측(pH6.0 부근)에서 활성이 높았다. 2. 흰비단병균의 Invertase는 다른균에 비하여 약 20배정도 높은 활성을 보였고 3균주 모드 배양여액과 균계체간에 효소활성의 차가 인정되지 않았다. 3. Xylanase의 활성은 3균주 모두 균계체, 균핵 및 배양여액에 따라 또 pH에 따라 아주 다양한 변화를 나타냈고 균핵내에서 활성이 높았다. 4. $\beta-amylase$의 활성은 공시균중 좀검은균핵병균의 균계체, 배양여액이 가장 높았다. (약 12.0ug/min) 흰비단병균과 균핵병균ㅇ서는 균계체나 균핵에서 보다 배양여액에서 높았는데 활성최적pH는 균계체, 균핵 모두 pH 6.2였으나 배양여액에서는 흰비단 병균과 균핵병균이 pH3.0이었는데 반해 좀검은균핵병균은 pH6.2였다. 5. PMG의 활성은 공시균 모두 배양여액에서 높았고 균계체에서는 균핵병균과 좀검은균핵병균이 높았으며 활성최적 pH는 균에 따라 또는 측정부분에 따라 다양하게 나타났다. 6. PG의 활성은 흰비단 병균과 균핵병균의 균계체에서 각각 9,1ug/min. 9.5ug/min으로서 가장 높았고 활성최적 pH는 흰비단병균이 pH4.5부근 균핵병균이 pH.3.0부근이었다. 7. 흰비단병균과 균핵병균의 Phosphatase는 산성측(최적 pH3.5)에서 활성이 높았고 좀검은 균핵 병균은 산성, 중성, 알카리측에서 각각 Peak가 나타났으나 최적 pH는 9.5였다. 8. 공시균주 모두 Protease는 pH 10.0에서 최고활성을 나타냈고 특히 좀검은균핵 병균의 배양여액내 효소활성이 높았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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