A 1.5-year-old neutered male domestic short hair cat was presented with multiple nodular mass, and suspected mast cell tumor on the surface of the right ear, accompanied by submandibular lymph node involvement. Histopathological Examinations and KIT (CD117) immunohistochemical staining was performed after the surgical resection of the entire right ear pinna. This patient was diagnosed with an anaplastic mast cell tumor with a diffuse positive cytoplasmic expression of KIT. Imatinib mesylate was prescribed after surgical resection; the patient presented without recurrence or metastasis for 2 years. Mild leukopenia was observed as the only side effect of imatinib mesylate during medication.
We investigated the effect of a single intravenous dose of Fumonisin $B_1(FB_1$) of rat kidney on the time sequence. Male Sprague-Dawley rats were intravenouslyin jected with FB$_1$at 1.25 mg/kg and were euthanized at 12 hrs, 1, 2, 4, and 6 days after the injection. In $FB_1$ treated rats, serum BUN and creatinine were elevated from 12 hrs. Microscopically, the initial target site was tubules of inner stripe, with mild degenerative and necrotic changes at 12 hrs, but the tubules recovered on day 4. In outer stripe, there were only a few scattered necrotic cells on day 1. These changes became more obvious over the time passed and most severe on day 4. On day 6, regeneration occurred, manifest as hypertrophic, basophilic tubular cells. The dying cells were proved to necrotic cells instead of apoptotic cells by TUNEL. Ultrastructural changes were cytoplasmic vacuole, dilated endoplasmic reticulum, swollen mitochondria, ballooned microvilli of the tubular cell in the outer stripe. These results showed that the renal tubules of outer medulla were the target to $FB_1$-induced nephrotoxicity in the rat. However, initial target was mner stnpe of medulla.
Lincomycin, an inhibitor of plastid protein synthesis, was found to block the synthesis of apoprotein P700 with a molecular mass of 72 kDa and the assembly of the Chl a-protein of PS I. Synthesis of the polypeptides of 48, 43.5, and 32 kDa of the PS II complex is also suppressed. This process is accompanied by the disappearance of the PS Two reaction center Chl a at 683 nm, and of the PS One reaction center Chl a at 690, 696, and 705 nm on the fourth derivative of the absorption spectra at 77K. Lincomycin does not affect the synthesis of LHC subunits. It increases the content of the two main Chl forms of LHC at 648 nm (Chl b) and 676 nm (Chl a). The low-temperature fluorescence ratio F736/F685 is also increased. However, the effect of cycloheximide (an inhibitor of cytoplasmic protein synthesis) leads to the reduction of polypeptides of the light-harvesting Chl a/b-protein complex in the range of 29.5-22 kDa. Under these conditions, the relative amount of Chl b and the F736/ F685 fluorescence ratio decrease significantly. This is obviously the result of blocking the LHC I and LHC II synthesis. At the same time rifampicin and actinomycin D (inhibitors which block transcription in chloroplast and nuclear genome, respectively) inessentially affect the characteristics of these complexes.
In vitro analyses of type I signal peptidase activities require protein precursors as substrates. Usually, these pre-proteins are expressed in vitro and cleavage of the signal sequence is followed by SDS polyacrylamide gel electrophoresis coupled with autoradiography. Radioactive amino acids have to be incorporated in the expressed protein, since the amount of the in vitro expressed protein is usually very low and processing of the signal peptide cannot be followed by SDS polyacrylamide gel electrophoresis alone. Here we describe a rapid and simple method to express large amounts of a protein precursor in E. coli. We have analyzed the effect of ionophors as well as of azide on the accumulation of expressed protein precursors. Azide blocks the function of SecA and the ionophors dissipate the electrochemical gradient across the cytoplasmic membrane of E. coli. Addition of azide ions resulted in the formation of inclusion bodies, highly enriched with pre-apo-plastocyanine. Plastocyanine is a soluble copper protein, which can be found in the periplasmic space of cyanobacteria as well as in the thylakoid lumen of cyanobacteria and chloroplasts, and the pre-protein contains a cleavable signal sequence at its N-terminus. After purification of cyanobacterial pre-apo-plastocyanine, its signal sequence can be cleaved off by the E. coli signal peptidase, and protein processing was followed on Coomassie stained SDS polyacrylamide gels. We are optimistic that the presented method can be further developed and applied.
Park, Won-Chul;Son, Joo-Young;Chung, Sook-Hyun;An, Woon-Gun
Preventive Nutrition and Food Science
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제7권2호
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pp.128-132
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2002
The present study was performed to observe the role of protein kinase C (PKC) inhibitors (H-7, staurosporine) and daunorubicin in the cell death process of MCF7 cells; and examined whether or not the type of induced cell death was apoptosis. The usefulness of the combined therapy of PKC inhibitors and daunorubicin to improve the adverse effect of daunorubicin was also investigated. Cell death was induced by treatment with PKC inhibitors or daunorubicin. Characteristic morphologic features of cell shrinkage, chromatic condensation, and cytoplasmic vacuolization were observed. These treatments also stimulated the cleavage of poly-(ADP-ribose) polymerase (PARP), an early event in apoptosis. With slight differences in the percentage of apoptosis-induced cells, staurosporine, H-7 and daunorubicin effectively induced apoptosis in MCF7 cells. Furthermore, combined treatment of PKC inhibitors and daunorubicin significantly drove the cells into an apoptotic state. Hence, our results revealed the possible therapeutic value of combined therapy for the prevention of drug resistance and adverse side effects.
한국미생물생명공학회 2001년도 Proceedings of 2001 International Symposium
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pp.62-72
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2001
The N-carbamoyl-D-amino acid amidohydrolase (D-carbamoylase) gene (dcb) from Agrobacterium tumefaciens AM 10 has been successfully cloned and expressed in Escherichia coli. Expression of D-carbamoylase gene under the 17 promoter in different host strains showed that the optimal expression was achieved in E. coli JM109 (DE3) with a 9-fold increase in enzyme production compared to the wild-type strain. The co-expression of the GroEL/ES protein with D-carbamoylase protein caused an in vivo solubilization of D-carbamoylase in an active form. The synergistic effect of GroEL/ES at 28$^{\circ}C$ led to 60 % solubilization of the total expressed target protein with a 6.2-fold increase in enzyme activity in comparison to that expressed without GroEL/ES and 43-fold increase in enzyme activity compared to A. tumefaciens AM 10. Attempts to express D-carbamoylase in an altered redox cytoplasmic milieu did not improve the enzyme production in an active form. The Histidyl-tagged D-carbamoylase was purified in a single step by Nickel-affinity chromatography and was found to have a specific activity of 9.5 U/mg protein.
Morphological changes of the oviductal epithelium of the rat treated with hormones ($17{\beta}$-estradiol ${\mu}g$/day and progesterone 2.5mg/day) for ten days were observed transmission and scanning electron microscopically. The results obtained were as follows: 1. The cilia formation of ciliary cell(CC) was more accelerated by the treatment of estradiol than progesterone, but the balance of estrogen and progesterone was required for the maintenance of CC. The effect of hormone was different between the segments for the maintenance of CC. 2. The short secretory cell(SSC) was severely inhibited in the formation of secretory granules with single hormonal treatment but the activity of secretion was more inhibited by progesterone than by estradiol. 3. The long secretory cell(LSC) had not a great difference between estradiol and progesterone treatments as compared with the normal sexual cycle, but the formation of secretory granules was somewhat accelerated by progesterone treatment. 4. The formation of secretory granules of junctional cell (JC) was severely accelerated by estradiol treatment as compared with the normal sexual cycle. The formation of secretory granules during progesterone treatment, on the other hand, was inhibited completely, but the numbers of pinocytotic vesicles appeared at the cytoplasmic apical portion. 5. Three types of secretory cells, SSC, LSC and JC, on the rat oviductal epithelium could be suggested to have different cell tapes respectively from the morphological changes by hormone treatment.
Raf-1, a cytoplasmic serine/threonine protein kinase, serves as a central intermediate in many signaling pathways in cell proliferation, differentiation, and development. In this study, we investigated that B-raf, Drosophila homolog of the human c-raf-1, is involved in ultraviolet (UV) responsive events by using hypomorphic mutant $D-raf^{c110}$ and Draf-lacZ transgenic fly. At first, effect of UV damage on the survival of wild-type and $D-raf^{C110}$ strains was examined. In terms of $1/LD_{50}$ value, the relative ratio of UV sensitivities of wild-type versus $D-raf^{C110}$ strain was 1 : 2.2. By using quantitative $\beta$-galactosidase activity analysis, transcriptional activity of the D-raf gene promoter was also examined in UV-irradiated Draf-lacZ transgenic larvae. UV irradiation increased the expression of lacZ reporter gene in Draf-lacZ transgenic fly. However, in $D-raf^{C110}$ strain the transcriptional activity of D-raf gene promoter by UV irradiation was extensively reduced. Results obtained in this study suggest that D-raf plays a role in UV response, leading to better survival of Drosophila to UV damage.
Membrane-type 1 matrix metalloproteinase (MT1-MMP) is a zinc-dependent proteinase found in cholesterol-rich lipid rafts on the plasma membrane. MT1-MMP hydrolyzes extracellular matrix (ECM) proteins, activates pro-matrix metalloproteinase-2 (proMMP-2) and plays an important role in ECM remodeling, cancer cell migration and metastasis. The role of caveolin-1, an integral protein of caveolae, in the activation of MT1-MMP remains largely unknown. Here, we show that the expression of caveolin-1 attenuates the activation of proMMP-2, reduces proteolytic cleavage of ECM and inhibits cell migration. We utilized the cytoplasmic tail domain deletion (${\Delta}CT$) or the E240A mutant of MT1-MMP. Co-expression of caveolin-1 with the wild-type or the ${\Delta}CT$ MT1-MMP decreased the proMMP-2 activation and inhibited collagen degradation and cell migration. Caveolin-1 had no effect on the catalytically inert E240A MT1-MMP. Our findings suggest that caveolin-1 is essential in the down-regulation of MT1-MMP activity by promoting internalization from the cell surface.
5종류의 식초(감식초, 포도식초, 사과식초, 고칼슘현미식초 및 현미식초)의 S. mutans에 대한 항균력을 조사하였다. 그 결과 감식초가 가장 높게 나타났으며 포도, 사과, 고칼슘 현미, 현미식초 순으로 나타났다. 감식초는 1.5%이상 첨가하였을 때 항균효과를 나타내었으며, 4%농도에서 균의 생육이 정지되었다. 투과전자현미경(TEM)으로 균 내부구조의 손상정도를 관찰한 결과, 세포벽 및 세포막이 파괴되었다. 각각의 식초에 대한 총페놀 함량을 조사한 결과, 감식초가 237.49mg%로 가장 높았으며, 총페놀함량이 높을수록 항균력은 높게 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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