Kim, Kyong-Ho;Park, Ho-Ki;Park, Moon-Soo;Yeo, Up-Dong
Journal of Plant Biotechnology
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제3권2호
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pp.95-100
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2001
To select the section with shoot formation ability, the calli and shoot formation from three sections (first leaf including cotyledonary node, hypocotyl and cotyledon explants) of 5-days-seedlings of soybean were induced on MS medium supplemented with 1.0 mg/L BAP, 3% sucrose, and 0.3% gelrite for one month. The first leaf section exhibited the highest shoot formation rate (51%), followed the hypocotyl section (10%) and the cotyledon section (0%). The shoot formation rates and shoot number of the four excised sections (whole first leaf, a half of the first leaf, a third of the first leaf and only node) of the first leaf were also investigated on the same medium. A half of the first leaf explant and the third of the first leaf explant had higher shoot formation rates (76-80%) and numbers (3-4 / explants) than those in other two explants. Effects of six cytokinins (kinetin, zeatin, BAP, 2iP, PBA, and TDZ) on shoot formation were determined, using the half of the first leaf explants. Zeatin (1.0 mg/L) exhibited the highest in shoot formation rate (94%) and numbers (8 / explant). In addition, the combined effects of three cytokinins (zeatin, BAP, and TDZ; 0.5, 1.0, 2.0 mg/L, respectively) and an auxin (IAA; 0.0, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L) were determined. The combination (1:1, v/v) of zeatin (1.0 mg/L) and IAA (1.0 mg/L) exhibited the highest in shoot formation rate (96%) and numbers (16 / explant), twice more than zeatin (1.0 mg/L) alone. The shoot cuttings were transferred and cultivated on the rooting media supplemented with only auxin, IBA at various concentrations. The highest root formation (8 / shoot) was achieved on the medium supplemented with 1.5 mg/L. After 4 weeks of cultivation, the plantlets with an extensive root system were transplanted in pots with a soil mixture of vermiculite and fine sand. Transferred to field, about 75% of the plantlets survived.
인삼의 기내 화아형성과 cytokinin과의 관계를 조사하기 위하여 접합자배, 유식물체, 자엽마디 절편체를 cytokinin(BA, kinetin, 2-iP, zeatin) 5 $\mu$M 단독 혹은 GA$_3$ 5 $\mu$M와 함께 MS 배지에서 배양하였다. 화아형성은 재료에 관계없이 BA처리구에서 가장 높게 나타났으며, kinetin, 2-iP, zeatin 순으로 나타났다. Cytokinin과 GA$_3$를 함께 첨가한 경우에는 특히 자엽마디 절편체 재료에서 화아형성 빈도가 현저히 증가하여 BA와 함께 처리하였을 때는 100% 화아형성을 나타내었다. 사용한 cytokinin은 adenine 기본골격과 다양한 측쇄구조 (-R)로 이루어져 있는데 이 측쇄구조의 분배계수 (logP)가 인삼의 기내 화아형성과 높은 상관성을 나타내어 cytokinin류의 지용성이 화아형성에 중요하게 관여함이 시사되었다.
절화 장미의 기내 배양에서 품종간의 차리는 물론 적절한 사이토키닌의 종류와 그 농도를 구명하여 효과적인 대량증식 방법을 확립하고저 본 실험을 수행하였다. 신초 형성에 의한 수확률은 품종간에 현저한 차이가 있었으며, 공식 품종 중 'Golden Emblem'이나 'Tineke'에서 보다 'Carl Red'에서 신초 형성이 현저하게 많았으며, 사이토키닌의 종류로는 BA가 신초 형성에 2iP나 kinetin 보다 훨씬 효율적이었으나, 신초 가감후 신초 생장에는 2iP나 kinetin이 BA 보다 그 효과가 월등하였다. 신초 형성에 적합한 사이토키닌의 농도를 1.0 mg/L이었으나, 장미의 증식만을 고려할 때 사이토키닌면의 적정 농도는 BA 1.0 ∼ 5.0 mg/L라 할 수 있으며, 신초의 장점은 사이토키닌의 종류에 상관없이 농도가 증가할 수록 증가되는 경향을 나타내었다.
식물의 주요 phytohormone의 하나인 cytokinin은 식물체의 줄기와 뿌리성장 그 외에도 영양의 전달이나 노화방지, 열매숙성 등 식물의 성장과 발달에 미치는 영향은 크고 다양하다. Cytokinin 생합성에 관여하는 효소를 생산하는 것으로 알려져 있으며 토양박테리아 Agrobacterium tumefaciens에 존재하는 유전자인 isopentenyl transferase (jpt)를 이용한 많은 분자생물학적 연구가 진행되어 왔는데 그 중 하나로 이 연구에서 jpt 유전자에 의한 cytokinin의 overproduction이 식물체에 성장과 발달에 어떠한 영향을 주는지 관찰하고 그 결과가 제시할 수 있는 작물의 유전 공학적 이용가능성에 대하여 알아본다.
The activities of auxins and cytokinins have been examined in the growth of callus tissue derived from Phaseolus vulgaris L. cv. Damyang. The synthetic auxin, picloram was the most effective in promoting callus growth and the range of effective concentrations (0.1$\mu{M}$ to 32$\mu{M}$) was broad. 2, 4-D also enhanced callus growth at the optimal concentration of 3.2$\mu{M}$. NAA promoted callus growth at relatively higher concentrations than other auxins tested. IAA was less effective in supporting callus growth. Cytokinin bearing saturated side chain ($N^6$-isopentyladenine) was approximately 30 times more active than the corresponding unsaturated compound, $N^6$-($\D^2$-isopentenyl) adenine. The abilities of cytokinin-autonomous growth were also examined. Callus tissues previously grown on concentrations lower and/or higher than optimal concentrations of cytokinins were better habituated in the subsequent passage. It was suggested that the development of cytokinin autonomy may be related to dosage-concentrations of cytokinin in the previous passage.
Thalictrum rugosum 세포배양에서 여러 가지 식물생장 조절물질이 세포증식 및 berberine 생산에 미치는 영향을 조사하였다. 조사된 식물생장 조절물질들 중에서 indole-3-acetic acid(IAA)가 berberine 생산에 가장 적합함을 알 수 있었고 그 최적농도는 1$\mu \textrm m$ 이었다. 비교 기준인 2,4-D의 사용결과에 비할 때 60이상의 생산량 상승효과가 있었으며, cytokinin인 6-benzylaminopurine(BA)를 동시에 사용하는 것보다 IAA만을 단독으로 사용하는 것이 더 효과적이다.
To establish an the mass production system of grape anthocyanin pigments through callus and cell suspension culture, the effects of various combinations of auxins and cytokinins on friable callus production were studied. for friable callus production, 2,4-D was superior to other regulators. IAA at 2 mg/L induced callus from stem and petiole while NAA resulted in rooting. Callus induction rate increased with the 2,4-D level, and stem segments were superior to leaf blade or petiole, showing nearly 100% with 1 and 2 mg/L 2,4-D from petiole and stem. Combined treatments of 2,4-D + kinetin and NAA + BA also yielded friable callus from stem segments. In treatments with 1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L kinetin and 1 mg/L NAA + 1 mg/L BA, callus induction rate was nearly 100%. The combination effect of 2,4-D and BA on anthocyanin production was not significant.
본 연구는 감귤 품종인 '삼보감'과 '병귤'에서 3종류의 싸이토키닌(BA, 2iP, kinetin)과 그들의 농도(0, 0.1, 0.5, 1.0, 2.0mg/L)가 마디배양에 의한 대량 증식에 미치는 영향을 구명하고자 수행되었다. 마디의 절편체는 기내 발아된 두 품종의 유묘에서 얻어졌다. 두 품종을 비교하면 신초의 수는 '병귤'에서보다 '삼보감'에서 더 많이 형성되었다. 본 실험에서 사용된 3종류의 싸이토키닌 중에 고체 MS 기본배지에 첨가된 BA가 신초의 대량 생산에 가장 효과적인 촉진제였으며 그 적정농도는 1.0 mg/L인 것으로 나타났다. 줄기의 신장 뿌리의 형성은 싸이토키닌의 종른에 관계없이 싸이토 키닌의 농도가 증가함에 따라 억제되었다. 삼보감'에서는BA 1.0 mg/L에서 가장 탄은 신초 및 엽수를 형성한 반면 '병귤에서는 어떠한 싸이토키닌의 종류나 농도도 본 실험에서 신초 및 뿌리 등의 형성에 커다란 영향이 없었다.
땅두릅 미성숙 화기절편을 이용하여 1 mg/L 2,4-D의 고체배지에서 배발생 캘러스를 유도하였고 동일조건의 액체배지에서 증식시켰다. 배발생 세포를 270$\mu\textrm{m}$의 걸름체로 거른 다음 배발생 세포는 싸이토카이닌이 포함된 MS 액체배지에서 2주 동안 배양하였고 그후 생장조절물질이 없는 MS 액체배지에서 5주간 배양하여 1차 체세포배가 유도되었다. 이들중 어뢰형과 자엽형 시기의 배를 생장조절물질이 없는 MS고체 배지에 치상하였을 때 캘러스의 형성 없이 2차배가 직접 유도되었다. 2차배를 유도할 때 2mg/L kinetin에서 얻어진 1차 배에서 가장 높은 빈도의 2차배가 발생되었다. 식물체 재생은 1 mg/L kinetin 혹은 1 mg/L zeatin을 처리하여 얻어진 1차 자엽형배로부터 유도된 2차 자엽형배를 생장조절물질이 없는 MS 고체배지에 치상하였을 때 높게 나타났다 (각각 25.4%, 28.6%). 2차배로부터의 3차배 발생과 식물체 재생과의 상관 관계를 볼 때 식물체의 재생에 있어서 3차배의 배발생은 저해적인 영향을 주었다.
어수리의 미숙배로부터 체소포배 형성시 자엽의 수적변이에 미치는 cytokinin의 영향을 조사하하였다. 구상형배에 0.2mg/l의 BA, 2ip, kinetin을 각각 처리하여 2주간 배양하였을 때, 다자엽의 형성률은 각각 84.9, 42.6, 32.9%로서 대조구(25.2%)에 비하여 BA>2ip>kinein순으로 높았으며 특히 BA 처리시에 가장 높게 나타났다. 또한 BA를 농도별(0, 0.01, 0.05, 0.1mg/l)로 배발생세포괴에 2주간 처리하였을 때, 다자엽의 형성율은 각각 23.3, 39.7, 69.4, 74.4%로서 농도가 높을수록 증가하는 경향이었다. 0.2mg/l의 BA를 구상형, 심장형, 또는 어뢰형, 자엽시기의 배에 2주간 처리한 경우에 다자엽의 형성률은 각각 92.4, 84.4, 26.3%로서 배발생 초기에 처리될 경우에 더욱 높게 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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