우리나라에서의 바이러스 무감염란 생산에 필요한 기초자료를 얻기 위하여 Cymbidiun mosaic virus와 Tobacco mosaic virus를 중심으로 그 감염상 및 감염된 바이러스의 혈청학적 반응, 검정식물상의 반응, 물이적 성질, 형태등을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 란에 발생하는 바이러스병의 병징은 크게 1) 모자이크, 2) 괴저줄무늬 모자이크, 3) 괴원륜문, 4) 퇴록륜문 및 5) 괴달반점의 5군으로 분류되었다. 2. 수원근교의 난 재배농장에서 수집한 각종란의 바이러스 이병률을 조사한 결과 CyMV는 $45\%$의 감염율을 나타내었고, TMV는 한개체에서도 검출되지 않았다. 3. CyMV의 검정식물인 Chenopodium amaranticolor, Cassia occidentalis 및 Datura stramonium에 CyMV 병즙액을 접종한지 7-12일 후에 퇴록국부반점이 나타났다. 4. CyMV의 물리적 성질을 Chenopodium amaranticolor를 검정식물로 하여 조사한 결과, 내열성은$75-80^{\circ}C$ 내보존성은 8일, 내포석성은 $10^{-5}-10^{-6}$으로 나타났다. 5. CyMV의 혈정학적 한천내 확산반응에 사용된 0.1M 및 0.01M의 Phosphate, Imidazol 및 Tris 완충간에는 침강대 형성에 차이를 볼 수 없었다. 그러나 이들 완충액의 수소이온농도간에는 침강대 형성에 심한 차이를 나타내어, pH 7.0에서는 침강대가 뚜렷하였고 pH9.0에서는 미약하였다. 6. CyMV를 전자현미경으로 관찰한 결과 크기 460-580mu의 간상입자의 빈도가 제일 높았다.
Cymbidium의 mild mosaic 병주로부터 각종 초본식물에 즙액접종되는 소구형 바이러스를 분리하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 본 바이러스를 즙액접종하였을 때 C. amaranticlor, C. quinoa, Cymbidium spp., Dianthus caryophyllus는 전신감염, C.ficifolium, Gomphrean globosa는 국부감염되었다. 2. 본 바이러스는 Myzus persicae로 전반되지 않고, 영양번식기관에 의하여 전반되었다. 3. 조즙액중의 불활성화한계는 내열성이 $90^{\circ}C$ (10분)이고 내희석성이 $10^{-6}$, 내보존성이 60일 $(20^{\circ}C)$이였다. 4. 본 바이러스는 C. amaranticolor병엽을 동결후, chlorform으로 청등하여 분획원심분리와 sucrose density gradient 원심분리법으로 순화하였다. 5. 순화시료의 자외선흡수곡선은 최고 261nm, 최저 243nm이고 260/280=1.72, 최고/최저=1.26의 핵단백에 의한 흡수곡선을 나타냈다. 침강계수는 $S_{20,w}=126$의 수치가 얻어졌다. 6. 本 바이러스의 항혈청은 침강반응혼합법에 의해 2,025배의 역가를 나타냈고, 한천내확산법에 의한 시험에서 CarMV와 혈청학적관계가 있는 것으로 나타났다. 7. 本 바이러스의 형태는 직경 약 28nm의 소구형(다면체) 입자이고, empty particles도 소수 관찰되었다. 5. 본 바이러스에 감염된 C. amaranticolor, C. ficifolium, Cymbidium spp.의 병엽초박절편을 전자현미경으로 관찰하였든 바, 각종 세포의 세포질, 액포 및 도관내에 소구형 입자가 산재 또는 집괴의 소재양식으로 확인되었다. 9. 이상의 결과를 종합해서 본 바이러스를 Cymbidium mild mosaic virus로 명명한다.
Most orchids are propagated by tissue culture. To survey the viral infection of tissue cultured Orchids, total RNA was extracted from in vitro Cymbridium and Phalaenopsis spp. collected from companies producing tissue-cultured orchids, and RT-PCR analysis was conducted with primer pairs specific to Cymbidium mosaic virus (CymMV) and Odontoglossum ring spot virus(ORSV), which are infecting wide range of orchid genera. The bulb size of Cymbidium infected with CymMV and ORSV was compared with healthy one at 10 months after planting in vitro orchids in the glasshouse. The CymMV or ORSV infection in 97 Cymbidium and 55 Phalaenopsis plants was 84.5 and 89.1 %, respectively. Mixed infection was found in 52.6 and 47.3% of Cymbidium and Phalaenopsis tested, whereas virus-free orchids were 15.5 and 10.9%, respectively. The CymMV and ORSV reduced the bulb size by 2.7-50% depending on the cultivars of Cymbidium. The both viruses caused yellowing, mottle and mosaic with or without necrosis in 4 Cymbidium cultivars.
This study was carried out to detect cymbidium mosaic potexvirus (CymMV) and odontoglossum ringspot tobamovirus (ORSV) in cultivated orchid plants in Korea. The standard double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) were carried out for detection of the viruses in the collected orchid samples. ELISA was suitable for massive-scale diagnostic method for virus detection in orchids. RT-PCR was rapid, time-saving and reliable detective method, and detection limit data showed that RT-PCR was 103 times more sensitive than ELISA. Of the 321 individual orchids representing 5 orchids genera tested by the ELISA, CymMV and ORSV were detected in 15.6% and 22.4%, and mixed infection of the both viruses with 4.9%, respectively. Of the Cymbidium plants tested, cultivated plants showed 52.5% virus infection rate with either CymMV or ORSV and both viruses.
Cymbidium mosaic virus (CymMV) is one of economically important viruses that cause significant losses of orchids in the world. In the present study, a reverse transcription recombinase polymerase amplification (RT-RPA) assay combined with a lateral flow immunostrip (LFI) assay was developed for the detection of CymMV in orchid plants. A pair of primers containing fluorescent probes at each terminus that amplifies highly specifically a part of the coat protein gene of CymMV was determined for RT-RPA assay. The RT-RPA assay involved incubation at an isothermal temperature (39℃) and could be performed rapidly within 30 min. In addition, no cross-reactivity was observed to occur with odontoglossum ringspot virus and cymbidium chlorotic mosaic virus. The RT-RPA with LFI assay (RT-RPA-LFI) for CymMV showed 100 times more sensitivity than conventional reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Furthermore, the RT-PCR-LFI assay demonstrated the simplicity and the rapidity of CymMV detection since the assay did not require any equipment, by comparing results with those of conventional RT-PCR. On-site application of the RT-RPA-LFI assay was validated for the detection of CymMV in field-collected orchids, indicating a simple, rapid, sensitive, and reliable method for detecting CymMV in orchids.
Cymbidium mosaic virus (CyMV) was purified from CyMV infected orchid plant leaves by Sephacryl S-500 HR column chromatography. Partial purification was done by solubilization with Triton X-100 (alkylphenoxypolyethoxy ethanol) and precipitation with polyethylene glycol (PEG 6,000) followed by ultracentrifugation on 30% sucrose cushion. Based on the spectrophotometric analysis, 33 mg of CyMV could be obtained form 100 g of CyMV-infected orchid plant leaves. The purified CyMV represented one distinct homogeneous band by SDS-PAGE, and electron microscopy revealed that it was highly homogeneous and not fragmented. Bioassay demonstrated that the purified CyMV had a normal infectivity to Chenopodium amaranticolor and orchid plants. Based on these results, the purification method in this work could be served as an improved method for the purification of CyMV and similar viruses with good yield, high purity and native integrity.
Park, Chung Youl;Baek, Da Some;Oh, Jonghee;Choi, Jong-Yoon;Bae, Dae Hyeon;Kim, Jeong-Seon;Jang, Gil-Hun;Lee, Su-Heon
식물병연구
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제22권2호
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pp.65-71
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2016
Cymbidium mosaic virus (CymMV) is a major virus infecting orchid plants and causing economic loss. In this study, the incidence of viral infection in Calanthe spp. at the Korean Institute of Calanthe was investigated using reverse transcription polymerase chain reaction. The CymMV infection rate was 42%, and the two viruses Odontoglossum ringspot virus and Cucumber mosaic virus had frequencies of 8% and 2%, respectively. Additionally, we characterized an isolate of CymMV, CymMV-GW, using biological tests and examined the nucleotide sequence properties of its complete genome. CymMV-GW induced chlorotic ringspots and chlorotic spot symptoms in inoculated leaves of Chenopodium amaranticolor and Nicotiana benthamiana, respectively. In this study, we have for the first complete genome sequence of CymMV-GW in Korea. The CymMV-GW genome was 6,225 nucleotides in length, excluding the poly-(A) tail, and showed whole-genome nucleotide and amino acid sequence identities of 97.7% and 100%, respectively, with the NJ-1 isolate of CymMV. Here, we report the complete genome sequence of the CymMV-GW isolate and viral infection rates for Calanthe spp. in Korea.
Kim, Sung-Ryul;Yoon, Ju-Yoon;Choi, Gug-Sun;Chang, Moo-Ung;Choi, Jang-Kyung;Chung, Bong-Nam
The Plant Pathology Journal
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제26권2호
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pp.130-138
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2010
Orchid fleck virus (OFV) is an unassigned plant virus in the family Rhabdoviridae. OFV was isolated from Cymbidium sp. showing oval necrotic lesions on their leaves in Korea, and designated as OFV-NHHS1. The complete nucleotide sequence of the RNA1 (6,413 nt) (GenBank accession no. AB516442) and RNA2 (6,001 nt) (GenBank accession no. AB516441) was determined in this study. RNA1 and RNA2 contained five and one ORF respectively. RNA1 encodes nucleocapsid (N) of 49 kDa, ORF2 of 26 kDa, ORF3 of 38 kDa, ORF4 of 20 kDa and glycoprotein (G) of 61 kDa proteins, whereas RNA2 encodes a single polymerase of 212 kDa. OFV-NHHS1 shared extremely high similarity of 98.6-100% and 98.9-99.6% in nucleotidle and amino acid sequences with a Japanese isolate, OFV-so, respectively. However, the N, G and L of OFV-NHHS1 revealed 6.9-19.3%, 7.3-12.0%, and 13.4-26.6% identities to those of 29 Rhabdoviruses, respectively. To survey the infection rate of OFV in commercial orchids in Korea, 51 Cymbidium sp., 10 Phalaenopsis sp., 22 Oncidium sp. and 21 Dendrobium sp. plants that showed typical viral symptoms were collected. RT-PCR with specific primers for detection of Cymbidium mosaic virus (CymMV), ORSV and OFV showed high infection rate by ORSV alone and double infection by ORSV and CymMV. One of the orchids tested was infected with OFV. This is the first report of the complete nucleotide sequences of OFV isolated in Korea.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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