From the previous study, Enterococcus faecium SH01 was isolated from mukeunji, an over-ripened kimchi, and it produced bacteriocin SH01. Bacteriocin SH01 showed an inhibitory effect against Listeria monocytogenes ATCC 19111, a bacterial strain causing human listeriosis. Crude bacteriocin SH01 was purified by ammonium sulfate precipitation and its inhibitory activity at two concentrations (500 and 1,000 AU/g) against Listeria monocytogenes ATCC 19111 was investigated in ground beef at increasing temperatures (5, 10, 15, and 20℃) for 8 d. The number of Listeria monocytogenes ATCC 19111 significantly decreased (p<0.05) as the concentration of bacteriocin increased from 500 to 1,000 AU/g. Intrinsic crude protease activities in ground beef were examined and increased as the temperature increased. Experiments varying both the concentrations of added bacteriocin SH01 and temperature demonstrated a maximum inhibition (2.33 log reduction of bacteria) in samples containing 1,000 AU/g of bacteriocin SH01 incubated at 20℃. When the crude bacteriocin SH01 solution (1,280 AU/mL) was incubated with crude protease solutions at different temperatures, its activity decreased by only half (640 AU/mL), as assessed in an agar well diffusion assay. The finding that the antilisterial activity of bacteriocin SH01 increased with temperature can be explained by the fact that higher temperatures increase bacterial membrane fluidity, thereby promoting the cellular penetration of bacteriocin SH01 into L. monocytogenes. Bacteriocin SH01 may be an excellent candidate as a biopreservative for controlling L. monocytogenes growth in ground beef.
Listeria monocytogenes is a representative foodborne pathogen and causes listeriosis. Enterococcus faecium CJNU 2524 was confirmed to produce a bacteriocin with anti-listerial activity. To establish optimal culture conditions for the production of the bacteriocin from E. faecium CJNU 2524, different media (MRS and BHI broth) and temperatures (25℃, 30℃, and 37℃) were investigated. The results showed that the optimal culture conditions were MRS broth and 25℃ or 30℃ temperatures. The crude bacteriocin was stable in a broad range of pH conditions (2.0-10.0), temperatures (60℃-100℃), and organic solvents (methanol, ethanol, acetone, acetonitrile, and chloroform). The bacteriocin activity was abolished when treated with protease but not α-amylase or lipase, indicating the proteinaceous nature of the bacteriocin. Finally, the bacteriocin showed a bactericidal mode of action against L. monocytogenes. Therefore, it can be a biopreservative candidate for controlling L. monocytogenes in dairy and meat products.
Lactobacillus plantarum strain KK3 with tannase activity was isolated from Gochunipkimchi (red pepper leaf kimchi) and showed a high antagonistic activity against five kinds of food pathogens. Strain KK3 secreted antibacterial compound into culture medium and 24-h culture in MRS broth at $30^{\circ}C$ was enough for the antibacterial compound production. The crude antibacterial compound prepared from culture supernatant inhibited the growth of some Gram-negative bacteria and Bacillus cereus but not Listeria monocytogenes. The antibacterial activity was sensitive to proteinase K treatment, confirming its proteinaceous nature (bacteriocin). The crude bacteriocin was active in the pH range 3.5-8.5 and extremely stable after 15 min of heat treatment at $121^{\circ}C$. The strain KK3 produced equally active bacteriocin in Chinese cabbage juice as it produced in MRS broth.
Journal of the Society of Cosmetic Scientists of Korea
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v.28
no.1
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pp.150-165
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2002
The purpose of this study was to evaluate bacteriocin activity against human flora. Lactobiocin, a bacteriocin produced by Lactococcus sp. HY 449, inhibited the growth of Starphylococcus epidermidis, Starphylococcus aureus, Streptoccoccus pyogenes and Propionibacterium acnes. When crude bacteriocin was added to indicator cells during logarithmic growth, the optical density(O.D 650nm) of cells without bacteriocin increase after 5h of incubation. Whereas in the presence of bacteriocin, the O.D of cell suspensions decreased. The similar patterns were observed for absorbance readings at 280 nm and 260 nm. The release of cellular components when cell were treated with Lactobiocin suggests some degree of membrane damage or cell lysis. Scanning electron microscopy of cells following treatments with Lactobiocin in PBS buffer revealed disruptures of cell morphology. These results indicate that bacteriocin appears to cause cell lysis of tested strains. In cytotoxicity on human fibroblast, LD$\_$50/ of Lactobiocin was ca. 50 mg/ml and no change was observed cell proliferation at the same concentration. Any irritation and allergic reaction did not observed when evaluated by human patch test for Lactobiocin.
Lactobacillus sakei is known to be the most populous lactic acid bacteria in over-ripened kimchi. Twenty three strains of Leuconostoc species inhibiting the growth of Lb. sakei were isolated from kimchi and amongst these the Leuconostoc mesenteroides strain CK0122 exhibited the highest antagonistic activity against Lb. sakei. The culture supernatant of the strain CK0122 was fractionated by a molecular weight cutter and lyophilized. The fraction with a molecular weight of less than 3,000 Da showed antagonistic activity against Lb. sakei. The antibacterial activity of the active fraction was sensitive to proteinase K treatment, confirming its proteinaceous nature (bacteriocin). The crude bacteriocin was active in the pH range of 4 to 7 and extremely stable after 15 min of heat treatment at $121^{\circ}C$. The crude bacteriocin inhibited the growth of Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Alcaligenes xylosoxydans, Flavobacterium sp., and Salmonella typhimurium.
Pediococcus acidilactici strain M produced a bacteriocin which was proteinaceous, heat stable, and exhibited antimicrobial activity against lactic acid bacteria, variety of food spoilage and pathogenic bacteria. The antimicrobial activity was not caused by $H_2$$O_2$ and organic acid, and was remained between pHs of 4.0 to 9. Molecular weight of crude bacteriocin was approximately 2, 500. Phenotypic assignment after plasmid cruing experiment demonstrated that a 53.7 kilobase (kb) plasmid, designated as pSUC53, was responsible for the sucrose fermentation phenotype ($Suc^+$) and a 11.1 kb plasmid, designated as pBAC11, was associated with bacteriocin production phenotype ($Bac^+$). Neither of the two plasmids were linked to antibiotic resistance.
Phenotypic changes after plasmid curing experiment suggested that the bacteriocin production phenotype ($Bac^{+}$) might be linked to a chromosomal DNA and the mucin production phenotype ($Muc^{+}$) might be linked to a 62.5 kilobase (kb) plasmid (pMUC62) in Lactobacillus plantarum 27 isolated from meat starter culture. The non-mucoid ($Muc^{-}$) variants were missing pMUC62 but they produced bacteriocin as the wild strain ($Bac^{+}$). There was no difference in antibiotic resistance and sugar fermentation patterns between the wild strain ($Bac^{+}$$Muc^{+}$) and the nonmucoid ($Bac^{+}$$Muc^{-}$) variants. Antimicrobial spectrum of bacteriocin produced by both wild strain and $Muc^{-}$ variant of Lb. plantarum 27 included strains of Pediococcus acidilactici (A, M, H), Pediococcus sp. isolated from meat, Lactobacillus sp. isolated from meat, Lb. plantarum NCDO 955 and Staphylococcus aureus 485. Neither of the tested Gram negative bacteria were inhibited by bacteriocin. Antimicrobial activity of crude bacteriocin was retained after autoclaving, DNase or catalase treatment and exposure from pHs 4 to 9 but was lost after treating with several proteolytic enzymes and exposure at pH 10.
Freeze dried crude bacteriocin was encapsulated within an acid-soluble coating material, Eudragit EPO, using a surface modification technique through a hybridization system. The pH and titratable acidity of control yoghurt were 3.92 and 1.56%, respectively, after 24 hr of fermentation at $42^{\circ}C$, whereas yoghurt containing 500 AU/mL encapsulated bacteriocin exhibited a higher pH (4.37) and lower titratable acidity (1.2%). Yoghurt containing encapsulated bacteriocin had significantly lower titratable acidity when the duration of fermentation (to pH 4.5) and subsequent refrigerated storage ($4^{\circ}C$) was longer than 20 days. There were no significant differences in the viability of lactic acid bacteria after 15 hr of fermentation. This suggests that microencapsulated bacteriocin has the potential to control the excessive growth of yoghurt starters caused by temperature abuse or post-acidification.
Bacteriocins are proteins produced by a heterogeneous group of bacteria that have a bactericidal effect on closely related organisms. Recently, bacteriocins from lactic acid bacteria and other food-related organisms have been the subject of much research because of their potential as food biopreservatives. Various modifications of agar plate diffusion assays are the most widely used methods even though the limitations of such assays are generally recognized. The ability to obtain a concentrated crude preparation on bacteriocin by optimizing production parameters greatly simplifies recovery of bacteriocin on subsequent purification steps. Some studies performed to optimize bacteriocins have been purified to homogeneity, and the amino acid sequences of many of these purified bacteriocins have been determined. Obtaining characterization data on purified bacteriocin will minimize the risk of overlapping of research and confusion on identification of these compounds. Several me-chanisms leading to cell death have been hypothesized. These include depletion of the proton motive force(PMF) across the cell membrane: RNase and/or DNase activity within the sensitive cell; and pore formation and lysis of sensitive cells at the cell membrane.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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