인삼에 이용할 수 있는 vector system의 개발연구의 일환으로 우선 Agrobacterium spp.를 인삼의 잎, 줄기 및 뿌리에 접종하여 crown gall tumor의 형성 및 탈분화 그리고 Agrobacterium spp.의 opine화합물의 이용정도등을 조사하였던 바 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. Agrobacterium tumefaciens C58은 인삼의 모든 부위에서 crown gall tumor를 형성하였으나 secondary tumor나 teratoma는 형성하지 못했다. 2. Wild type Agrobacterium tumefaciens Y101, Y104, Y109는 crown gall tumor를 형성하였으며, tumor의 형태, 크기 그리고 생장 정도는 strain별로 차이가 있었다. 3. Agrobacterium tumefaciens Y194는 특히 amorphic tumor를 형성하였다. 4. 줄기에서 형성된 tumor조직에서 callus를 유기하고자 phytohormone free배지 및 2,4-D 첨가 배지에 접종한 결과 전혀 callus가 형성되지 않았다. 5. 뿌리에서 형성된 callus가 형성되긴 하였으나 출현빈도가 극히 낮았으며, 정상 조직과는 달리 2,4-D의 효과가 미미하였다. 6. Agrobacterium spp.에 의한 opone화합물의 이용능력을 조사한 결과, Agrobacterium tumefacciens Y104, Y110 과 C58은 nopaline type이었고 Y109는 octopine type이었으며, Y101은 nopaline과 octopine 어느것도 이용하지 못하였다.
연초 crown gall tumor와 genetic tumor의 형성시 형태적 특성과 조직배양시 식물호르몬에 대한 반응을 조사하였다. Crown gall tumor는 A. tumefaciens C58을 감염시켜 형질전환된 tumor조직으로부터 획득하였으며, genetic tumor는 N. glauca (2n=24)와 N. langsdorffii (2n=18)의 종간교배에 의하여 유기된 잡종식물체에서 자발적으로 발생한 tumor조직으로부터 획득하였다. 형성된 crown gall tumor, genetic tumor및 teratoma shoot의 형태적 특성은 매우 비슷하였으며, 식물조직배양시 식물호르몬이 전혀 첨가되지 않은 기본배지에서 생장이 왕성하였다. Crown gall tumor는 식물호르몬 무첨가배지에서 전형적인 tumor callus가 형성되었으며 teratoma shoot도 형성되었다. 반면에 genetic tumor는 2,4-D 0.5mg/L 첨가된 배지에서 tumor callus가 형성되었으며, 식물호르몬 무첨가배지에서는 많은 teratoma shoot가 형성되어 식물호르몬의 조절에 의해서 phenotype을 거의 비슷하게 할 수 있었다. Genetic tumor는 재분화시 정상적인 식물체보다는 뿌리를 갖지 못하는 teratoma shoots가 형성되는데 외부에서 인위적으로 식물호르몬인 IAA와 GA, 그리고 active carbon을 첨가하여 완전한 식물체를 생산하는 데는 실패하였다. 그러나 간혹 식물호르몬 무첨가배지에서 뿌리를 갖는 정상식물체로 생장하는 shoot가 형성되었는데 이런 식물체에서도 생장하면서 줄기부분에서 다시 genetic tumor가 형성되었으며, 잎절편을 다시 식물호르몬 무첨가배지에 접종할 경우에도 teratoma shoots를 형성하였다.
This study was carried out to obtain the information for growth characteristics of crown gall tumor and hairy root transformed by Agrobacterium spp,. on the media with phytohormones, casein hydrolysate and activated charoal. Crown gall tumors and hairly roots were formed respectively on potato tuber discs infected by tumerfaciens A ch 5 and A.rhizogenes ATCC15834. These tumors and roots could be grown on the phytohormone free media. PCR analysis of Rol C and Vir C gene fragments confirmed that crown gall root was prompted on the medium containing 2,4-D 2mg/l with casein hydrolysate lg/l. The survival ration of crown gall tumor callus derived from potato increased on medium containing the activated charcoal 0.5∼0.2mg/l because of the prevention, on the other hand, hairly roots were necrosis on the same medium. Callus derived from hairly root were excellently grown for a short time by suspension culture on liquid medium containing 2.4-d 2mg/L and casein hydrolysate lg/l.
This study was carried out to obtain the information for growth characteristics of crown gall tumor and hairy root transformed by Agrobacterium spp,. on the media with phytohormones, casein hydrolysate and activated charoal. Crown gall tumors and hairly roots were formed respectively on potato tuber discs infected by tumerfaciens A ch 5 and A.rhizogenes ATCC15834. These tumors and roots could be grown on the phytohormone free media. PCR analysis of Rol C and Vir C gene fragments confirmed that crown gall root was prompted on the medium containing 2,4-D 2mg/l with casein hydrolysate lg/l. The survival ration of crown gall tumor callus derived from potato increased on medium containing the activated charcoal 0.5∼0.2mg/l because of the prevention, on the other hand, hairly roots were necrosis on the same medium. Callus derived from hairly root were excellently grown for a short time by suspension culture on liquid medium containing 2.4-d 2mg/L and casein hydrolysate lg/l.
Rose crown gall caused by Agrobacterium tumefaciens is a major disease that damages the production of cutroses in Korea. The effective prevention methods for this disease include the use of resistant varieties. This study was conducted to evaluate the resistance of 58 Korean cultivars and six foreign cultivars to crown gall disease with nodal explants in vitro. Among 180 A. tumefaciens strains, pathogenic strain RC12 was selected as an inoculant strain. The strain RC12 was identified based on characteristics of some selective media, pathogenicity test, and polymerase chain reaction analysis. Forty rose cultivars formed tumors on explants inoculated with A. tumefaciens RC12. However, 24 cultivars, including 22 Korean cultivars and 2 foreign cultivars, showed resistance to A. tumefaciens RC12 without forming any tumors. Six cultivars with tumor formation rates of over 30% formed initial tumors within 23 days after inoculation. Six cultivars with low tumor formation rates of around 5% formed initial tumors after 28 days of inoculation. It was found that gall formation rate was highly correlated with the initial gall formation period. Thus, the relationship between the period of gall formation and the rate of gall formation could be useful for assessing resistance to crown gall disease. In vitro inoculation methods could be used to evaluate resistance of cut-rose cultivars to crown gall diseases.
인삼 crown gall tumor callus의 특성을 구명하기 위하여 Agrobacterium tumefaciens C58을 감염시켜서 얻어진 crown gall tumor를 phytohormone 무첨가 배지에서 배양하여 생육이 왕성한 tumor callus를 유기하였다. 이들 tumor callus는 정상조직에서 유기한 callus에 비해 외관상으로는 friable한 형태의 덩어리로 자라면서도 매우 단단한 양상을 보였으며, callus증식에 적합한 phytohormone 농도에서는 tumor callus의 생육이 오히려 억제되는 현상을 보였다. Tumor callus의 생육은 고체배양시 암배양이 광배양보다 생체중의 경우에는 2.4배, 건물중은 1.9배 가량이 더 많으며, 2,4-D가 함유된 최적조건에서 배양한 정상 callus의 생체중과는 비슷한 경향을 보였으나, 건물중은 tumor callus가 더 높았다. 그리고 현탁배양시에는 tumor callus가 정상 callus보다 생장속도가 2배 이상 빠른 경향이었다.
The relationships between tumor score and peroxidase activities of tomato stems infected with Agrobacterium tumefaciens strain A6Kl, B6, T372 11BNV6, 11BV7 and wounded stem as a control were examined in relation to crown gall tumor development on purpose to study the lignification of tumor tissue which is affected to the development of crown gall tumor. As the previous paper has been mentioned the fact that the induction of tumor tissues were inhibited or limited in the lignified stem of host plant. It was presumed that the activities of peroxidase related to the development of lignification were decreased during the period of tumor development. But the experimental result in this experiment shows that the peroxidase activities of crown gall tumor-tissues infected with the A. tumefaciens strains which are already known as virulent are increasing during four weeks, however, in the strain 11BNV6 and wound the peroxidase activities are decreasing on the second week after the inoculation of the bacteria strains. These results could be explained on the basis of that possible regulatory agents of lignification which were accumulated in tumor tissues, IAA, ascorbic acid, glutathion(GSH) and caffeic acid esters, were postulated to act as antioxidants which has been suggested by Stafford. Total nitrogen contents in relation to crown gall tumor development were determined for the detection of protein synthesis related to the enzyme activities which are increasing in the time of plant growth. Generally six groups are contained the largest amount of nitrogen on the second week after the inoculation of the bacterium. Comparing to the tumor score, it is presumed that the all of enzyme activities including peroxidase in tumor tissues are increasing from the second week through the third week after the inoculation of bacterium and the protein synthesis is stimulated under the most appropriated temperature during the above periods.
The resistance to crown gall in grape rootstocks was evaluated by inoculating cuttings from 27 grape rootstock varieties with Agrobacterium vitis strain Cheonan 493. Thmors were formed in all varieties of grape rootstocks tested in this study. The symptoms were observed in the stems of all plants tested including '196-17' and '41B'. Based on the measurement of tumor weight on the stems of grape rootstocks, '779P' was found to be higbly susceptible to crown gall. While some varieties such as 'Gloire', '140R', '101-14M', '3309C', and '333EM' were found to be relatively resistance to crown gall. Varieties such as '99R', '1447P', 'Rupestris du lot', 'll0R', 'Freedom', and '41B' were also found to be susceptibl~ to crown gall. Other~ varieties including 'l103P', 'Teleki. 5C', '420A', 'Golia', and '5BB' were found to be moderately susceptible.
한국형 Agrobacterium tumefaciens의 분리 및 tumor inducing ($T_1$) plasmid의 유전적 특성을 비교 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다. Agrobacterium군은 사과나무($A_1-A_3$), 미류나무($W_1{\sim}W_6$), 은사씨나무($P_1-P_3$) 및 장미($R_1$)의 crown gall tumor에서 도합 13종을 분리하였으며 각 군의 plasmid를 관찰한 결과 ATCC 15955보다 $P_1$ 및 $A_2$가 크기가 컸으며 $W_2$, $W_3$, $W_6$ 및 $P_3$는 작았으며 각균의 tumor 유도는 해바라기에 ATCC 15955와 Korean type $W_2$ ($KW_2$)을 접종한 것에서만 각각 접종 4주 및 6주만에 crown gall을 관찰하였다. 아울러 두균종의 $T_1$ plasmid($pT_1$)를 정제하여 몇종의 게한효소를 처리 하였으며 $pT_i$ ATCC 15955와 $pT_1KW_2$는 EcoR I 처리로 25개 및 27개의 band를, Hind III로 23개와 21개, BamH I으로 각각 20개 및 Hpa I으로 12개 및 27개의 band를 관찰하였으며 크기는 $pT_i$ ATCC 15955가 200 kbases(kb)로 $pT_1KW_2$가 87 kb로 관찰 되었다. 아울러 cctopine은 $W_1-W_6$ 및 $P_1-P_3$균에 의한 tumor조직에서 관찰 되었고 이들균을 octopine type균으로 사료 되었다.
2003 년부터 2005 년까지 장미 주요 재배단지를 중심으로 뿌리혹병 발생을 조사한 결과 전지역에서 발생이 확인되었으며, 주로 토양재배보다는 양액재배되는 장미에서 발생이 더 심하였다. 뿌리혹병에 감염된 장미는 주로 지제부에 발생이 많았으며, 뿌리에 발생하여 생육이 부진해지는 피해를 나타내었다. 저항성 품종 선발에서는 '리틀 실버' 등 10 품종만이 저항성 품종으로 검정되었을 뿐 대부분이 감수성이었다. 특히 '골든게이트', '리틀마블', '로사로제티' 등은 매우 감수성이 높았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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