• Journal of Plant Biotechnology
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• 제31권1호
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• pp.79-82
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• 2004

산마늘의 다신초 덩어리로부터 인경형성을 위해 ABA와 MeJA가 첨가된 MS 배지에서 배양하였다. 저농도 (0.01mg/L)의 ABA처리구는 인경 형성보다 오히려 신초의 증식을 유도하였다. 인경은 MeJA처리구에서 배양 4∼6주 후 형성되기 시작하여 1.0mg/L MeJA 처리구에서 다신초 덩어리로부터 100% 인경형성이 이루어졌다. 조직학적 관찰 결과 생장조절제가 첨가되지 않은 배지의 인경과는 달리 MeJA처리구에서 비대된 인경의 외피세포는 크고 둥글며 단백질 등의 물질로 가득 차 있었다. 산마늘의 다신초 덩어리로부터 인경형성에 MeJA가 촉진적임을 알 수 있었다.

• Biomolecules & Therapeutics
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• 제31권1호
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• pp.116-126
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• 2023

Mainly due to the slanted focus on the mechanism and regulation of neuronal aging, research on astrocyte aging and its modulation during brain aging is scarce. In this study, we established aged astrocyte culture model by long-term culturing. Cellular senescence was confirmed through SA-β-gal staining as well as through the examination of morphological, molecular, and functional markers. RNA sequencing and functional analysis of astrocytes were performed to further investigate the detailed characteristics of the aged astrocyte model. Along with aged phenotypes, decreased astrocytic proliferation, migration, mitochondrial energetic function and support for neuronal survival and differentiation has been observed in aged astrocytes. In addition, increased expression of cytokines and chemokine-related factors including plasminogen activator inhibitor -1 (PAI-1) was observed in aged astrocytes. Using the RNA sequencing results, we searched potential drugs that can normalize the dysregulated gene expression pattern observed in long-term cultured aged astrocytes. Among several candidates, minoxidil, a pyrimidine-derived anti-hypertensive and anti-pattern hair loss drug, normalized the increased number of SA-β-gal positive cells and nuclear size in aged astrocytes. In addition, minoxidil restored up-regulated activity of PAI-1 and increased mitochondrial superoxide production in aged astrocytes. We concluded that long term culture of astrocytes can be used as a reliable model for the study of astrocyte senescence and minoxidil can be a plausible candidate for the regulation of brain aging.

• Molecules and Cells
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• 제24권1호
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• pp.76-82
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• 2007

By combining in situ hybridization (ISH) and immunocytochemistry (IC), microscopic topological localization of mRNAs and proteins can be determined. Although this technique can be applied to a variety of tissues, it is particularly important for use on neuronal cells which are morphologically complex and in which specific mRNAs and proteins are located in distinct subcellular domains such as dendrites and dendritic spines. One common technical problem for combined ISH and IC is that the signal for immunocytochemical localization of proteins often becomes much weaker after conducting ISH. In this manuscript, we report a simplified but robust protocol that allows immunocytochemical localization of proteins after ISH. In this protocol, we fix cultured cortical or hippocampal neurons with 4% paraformaldehyde (PFA), rinse briefly in PBS, and then further fix the cells with $-20^{\circ}C$ methanol. Our method has several major advantages over previously described ones in that (1) it is simple, as it is just consecutive routine fixation procedures, (2) it does not require any special alteration to the fixation procedures such as changes in salt concentration, and (3) it can be used with antibodies that are compatible with either methanol (MeOH-) or PFA-fixed target proteins. To our best knowledge, we are the first to employ this fixation method for fluorescence ISH + IC.

• 한국동물생명공학회지
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• 제36권1호
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• pp.51-58
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• 2021

Kisspeptin, a neuropeptide and the master controller of reproductive axis upstream to GnRH neurons, and its receptor are also expressed in extra-hypothalamic tissues, such as ovaries. As systemic kisspeptin has been shown to modulate follicular dynamics in cattle, we hypothesized that kisspeptin has direct actions on the ovarian follicular development. We also hypothesized that kisspeptin regulation of primordial follicle development is via modulation of VEGF expression. In order to test these hypotheses, we cultured caprine ovarian cortical strips in vitro for 7 days with supplementation of kisspeptin at 1, 10 and 100 µM concentration and observed the development of primordial follicles into intermediate, primary and secondary follicles. We also studied the alteration in the expression profile of VEGF and VEGF transcript variant 2 mRNA during follicular development in the presence of kisspeptin. We confirmed the presence of GPR54 in goat ovaries in our preliminary studies. Supplementation of kisspeptin at 1 and 10 µM concentration facilitated the development of primordial follicles into intermediate, primary and secondary follicles with less number of degenerated follicles while the same at 100 µM resulted in degeneration of follicles. We observed a drastic increase in the expression profile of VEGF and VEGF transcript variant 2 mRNA upon culture which was independent of kisspeptin treatment. In conclusion, our studies show that kisspeptin facilitates ovarian primordial development in vitro.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제53권2호
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• pp.222-227
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• 2010

목 적 : 본 연구는 소아 요로 감염증에서 치료 전 발열 기간과 치료 후 발열 기간 등의 임상변수와 혈액 및 소변 등의 검사 결과가 신 실질 병변 및 방광요관 역류 등을 예측하는 데 있어서 인자로 작용할 수 있는지를 평가해 보고자 하였다. 방 법 : 2005년 7월부터 2008년 7월까지 첫 번째 열성 요로 감염으로 본원 소아과에 입원한 1개월부터 만 17세까지의 환아 180명을 대상으로 하였다. 환아의 혈액 검사 소견 중 C-반응 단백, 백혈구수와 소변 검사 중 배양 검사 결과, 소변 질산염 및 치료전 발열기간, 치료 후 발열 기간 등을 변수로 하여 신장 초음파 배뇨 방광, 요도 조영술, 신 스캔 등의 영상 검사 결과와 비교하여 연관성을 평가하였다. 결 과 : C-반응 단백 수치가 높고 백혈구 증가증이 있으며 입원 치료 후 긴 발열 기간을 가진 경우 신 실질 병변이 유의하게 증가하였고 3단계 이상의 방광 요관 역류 발생도 높았다. 신 스캔 검사상 이상 소견을 보인 경우는 신 스캔 검사상 정상 소견을 가진 군과 비교하였을 때 3단계 이상의 방광 요관 역류가 더 증가되어 있었다. 결 론 : C-반응 단백 수치, 백혈구 증가증, 입원 치료 후 긴 발열기간 등의 임상 변수는 신 실질 병변과 3단계 이상의 방광 요관 역류의 예측 인자가 될 수 있을 것으로 사료된다.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제51권2호
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• pp.170-180
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• 2008

목 적 : 몇몇 항생제가 저산소성 허혈성 뇌 손상에서 뇌 보호 효과를 가진 것으로 밝혀졌지만 아직까지 그 기전에 대해 잘 알려지지 않고 있다. 최근 아미노글루코사이드 계열의 항생제인 G418(geneticin)이 항고사에 의한 암세포 생존을 증가 시키는 것으로 알려졌으며 본 연구는 G418이 주산기 저산소성 허혈성 뇌손상에서 세포 고사를 억제함으로서 뇌 보호 효과를 나타내는지를 알아보고자 하였다. 방 법 : 임신 18일된 백서의 대뇌피질 신경세포를 배양하여 정상산소 상태군와 저산소 상태군으로 나누고, 두 군을 각각 대조군과 G418 $10{\mu}g/mL$으로 처리한 군으로 나누어서 TUNEL 분석과 caspase 3에 대한 면역조직생화학검사를 하였고, 생후 7일된 신생 백서의 좌측 총경동맥을 결찰 후 절단하고 저산소 상태를 유도하여 G418을 저산소 상태 유도 전 30분과 유도 후 30분에 복강 내로 $0.1{\mu}g/kg$ 투여하고 7일 후에 희생시켜 H&E 염색과 caspase-3에 대해 Western blot과 real-time PCR를 하였다. 결 과 : TENEL 분석상 정상산소 상태군과 저산소 상태군 모두에서 대조군보다 G418 투여군에서 통계학적으로 유의하게 고사세포가 감소되었다(P<0.01). Caspase-3에 대한 면역조직화학검사에서 저산소 손상 전에 G418을 투여한 군에서 손상 후에 투여한 군보다 Caspase-3 발현이 적게 나타났다. 저산소 손상 7일 후에 얻은 신생 백서 뇌의 육안적 관찰과 H & E 염색에서 저산소 상태군의 뇌 용적이 정상산소 상태군의 경우보다 감소된 것을 알 수 있었고, 저산소 손상 전에 G418을 투여한 군에서 손상 후에 투여한 군보다 뇌 조직의 손상이 더 적은 것을 볼 수 있었다. Bax/Bcl-2, caspase-3에 대해 Western blot과 real-time PCR 한 경우에 G418 투여한 군에서 Bax/Bcl-2 비율과 caspase-3 발현이 감소되었다. 결 론 : 주산기 저산소성 허혈성 뇌 손상에서 G418는 뇌 조직의 고사를 억제함으로서 뇌보호 효과를 나타내었다.

• 한국동물번식학회:학술대회논문집
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• 한국동물번식학회 2001년도 춘계학술발표대회
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• pp.30-30
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• 2001

The culture of preantral follicles has important biotechnological implications through its potential to produce the large quantity of oocytes for embryo production, transgenesis research, conservation of rare breed, and a potential source of ovarian genetic material. The present study was conducted to establish the optimal conditions of in vitro culture for intact bovine preantral follicles; and to examine the developmental ability of oocytes derived from the in vitro-grown preantral follicles; and to investigate the effects of various concentrations of FSH and LH on these processes. Bovine preantral follicles (150 $\pm$ 1.2${\mu}{\textrm}{m}$), surrounded by theca cell, were isolated enzymetically and mechanically from ovarian cortical slides in Leibovitz L-15 medium containing 1 mg/$m\ell$ collagens and 0.2 mg/$m\ell$ DNase I and cultured for 25 days in the presence of different concentrations of bovine FSH and LH in $\alpha$MEM medium with insulin, transferrin, and selenite. The survival was tested by frypan Blue and Hematoxylin. The survival and growth rates of follicles were higher in FSH treatment groups than these in control (P<0.001), but there were no significant differences between the LH treatment groups and the control. In 25 days, the survival and growth rates of follicles in FSH and LH treatment group (50%, 300$\pm$1.0${\mu}{\textrm}{m}$) were higher than in FSH treatment group (40%, 244$\pm$0.5${\mu}{\textrm}{m}$) and the control group (25%, 160$\pm$ 1.0${\mu}{\textrm}{m}$). Fifty-five percent of healthy antral follicles were obtained, and 60% of the oocytes complete meiotic maturation to the metaphase II stage. Twenty-two percent of the mature oocytes underwent cleavage, and 9% developed to the blastocyst stage. In this study, in vitro-grown oocytes (111 $\pm$ $1.5mutextrm{m}$), under our culture conditions, were not equivalent in size to the in vivo-grown oocytes (130$\pm$1.3${\mu}{\textrm}{m}$). Therefore, these results suggest that bovine preantral follicles with intact theca cell can grow to the antral stage in 25days, and that oocytes from those follicles can acquire the meiotic competence and normally undergo fertilization and development to the blastocyst stage. However, the developmental capacity of in vitro-grown oocytes is presumably not comparable to those of the in vivo counterparts.

• Pediatric Infection and Vaccine
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• 제11권1호
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• pp.90-100
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• 2004

목 적 : 최근 요배양이 음성이거나 기준이하의 세균 집락이 있었던 경우에서도 신피질 손상이나 요역류가 있음이 보고되고 있으며, 실제 소변 배양검사에서 낮은 세균 집락을 보인 경우에도 요로 감염이 확인된 연구 보고들이 있다. 이에 저자들은 발열과 농뇨가 있는 영아에서 전형적인 요로 감염의 특성을 분석하고, 요로 감염이 의심되나 소변 배양 검사가 음성인 경우에도 영상 및 기능 검사상 이상 여부를 파악하여 관련 인자를 확인하고자 하였다. 방 법 : 2001년 1월부터 2003년 2월까지 가톨릭대학교 의과대학 성모자애병원 소아과에 발열을 주소로 내원하여 일반 요 검사상 농뇨 소견을 보여 입원한 12개월 이하의 환아 136명을 대상으로 소변 배양 검사를 실시하고, 배양 검사 결과와 상관없이 요로 감염 의심 시 신장의 급성 감염 상태를 방영하는 DMSA scan과 요 역류 검사를 시행하여 이상 여부와 관련 인자를 분석하였고, 동시에 임상특성과 원인균도 분석하였다. 결 과 : 136명 중 53명의 환아에서 소변 배양 검사에서 세균이 배양되었으며 57균주가 동정되었다. 단일 균주에 의한 감염 빈도가 92.5%(49/53)이었고, E. coli가 49주(86%)로 가장 많았으며 E. faecalis, M. morganii, Proteus, P. aeruginosa, S. aureus, E. fergusonii 순으로 분리되었다. 이들 균주는 대체적으로 cephalosporins 및 aminoglycosides에 감수성이 높았으나, aminopenicillins에는 감수성이 낮았다. DMSA scan과 요 역류 검사는 배양검사 양성인 경우와 음성인 경우에서 유사한 비율로 이상 소견을 보였다. 소변 배양 검사 양성 유무와 상관없이 농뇨를 보인 영아에서 발열 기간이 48시간 이상인 경우, 연령이 증가할수록, CRP가 높을수록 급성기에 시행한 DMSA scan 검사 이상 유무에 유의성이 있음을 확인하였다. 결 론 : 요로 감염 균주에 대해 1세대, 3세대 cephalosporins와 amikacin에 감수성이 높아 요로 감염 영아에서 이들 항생제의 병합요법이 고려될 수 있다. 또한 발열과 농뇨가 있는 영아에서, 소변 배양 검사가 음성이더라도 나이가 3개월 이상이고 48시간 이상의 발열을 보인 경우, C-반응 단백 수치가 높은 경우에는 급성기의 DMSA scan 검사와 요역류 검사를 시행하여 신장 이상 유무를 확인하고 조기 치료 방침을 결정하는 것이 이후에 신장실질 질환으로의 이환을 막는데 도움을 줄 수 있을 것이다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제16권1호
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• pp.37-45
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• 2006

Treatment with exopolymers of Aureobasidium pullulans SM-2001 containing $\beta-1,3/1,6-glucan$ inhibited osteoclastogenesis of bone marrow stem cells in a co-culture system with calvariae osteoblastic cells. In addition, the treatment increased mineral deposition in osteoblastic cells. These two observations prompted us to evaluate whether the exopolymers could be used as an anti-osteoporotic agent, and efficacy of the exopolymers to prevent bone loss was compared with alendronate, a bisphosphonate, in ovariectomized mice prone to osteoporosis. Administration of the exopolymers to the ovariectomized mice resulted in improved effects on femur weight and histomorphometric changes of femur such as trabecular bone volume (TBV), trabecular bone thickness (TBT), and cortical bone thickness (CBT). In conclusion, the exopolymers treatment inhibited bone loss from osteoporosis induced by ovariectomy, and the effect was comparable to alendronate administration.

• BMB Reports
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• 제45권4호
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• pp.227-232
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• 2012

In vertebrates, there are two variants of eukaryotic peptide elongation factor 1A (eEF1A; formerly eEF-$1{\alpha}$), eEF1A1 and eEF1A2, which have three well-conserved domains ($D_I$, $D_{II}$, and $D_{III}$). In neurons, eEF1A1 is the embryonic type, which is expressed during embryonic development as well as the first two postnatal weeks. In the present study, EGFP-tagged eEF1A1 truncates were expressed in cortical neurons isolated from rat embryo (E18-19). Live cell images of transfected neurons showed that $D_{III}$-containing EGFP-fusion proteins (EGFP-$D_{III}$, -$D_{II-III}$, -$D_{I-III}$) formed clusters that were confined within somatodendritic domains, while $D_{III}$-missing ones (EGFP-$D_I$, -$D_{II}$, -$D_{I-II}$) and control EGFP were homogeneously dispersed throughout the neuron including axons. In dendrites, EGFP-$D_{III}$ was targeted to the heads of spine- and filopodia-like protrusions, where it was colocalized with $SynGAP{\alpha}$, a postsynaptic marker. Our data indicate that $D_{III}$ of eEF1A1 mediates formation of clusters and localization to spines.