Trinexapac-ethyl[ 4-(cyclopropyl- $\alpha$ -hydroxy-methylene)-3,5-dioxocyclohexane carboxylic acid ethylester] is a growth-retardant for plants by inhibiting a key step in biosynthesis of GA. A treatment of trinexapacethyl generally induces a reduction in vegetative growth and also inhibits heading. In addition, the trinexapacethyl was known to enhance the freeze-tolerance in annual bluegrass, however, the mechanism is not known yet. One possible reason for the enhanced freeze-tolerance may be the antifreeze protein known to be accumulated in intercellular space of the leaf during cold acclimation. In order to see the possible in-duction of the synthesis of antifreeze proteins by trinexacpacethyl, the apoplastic proteins extracted from Kentucky bluegrass treated with trinexapacethyl were analyzed by SDS-PAGE and the presence of the antifreeze protein was observed. In addition, western analysis showed the identity of the protein induced by both a cold acclimation and a trinexapacethyl treatment. It appears that an enhanced freeze-tolerance of the turf grass by trinexapacethyl is due to the synthesis and/or accumulation of the antifreeze protein similar to the enhanced freeze tolerance induced by cold acclimation.
Boiling stable proteins of 53 kDa and 29 kDa existed natively in the cotyledons of Bak Kyoung, fall radish (Raphanus raphanistrodes L.) Boiling stable proteins of 36 kDa and 16.5 kDa were newly induced by cold stress and the proteins of 53 kDa and 29 kDa increased during the cold stress. The proteins of 53 kDa were denatured within 2 hrs after removing cotyledons from plants. Boiling stable proteins of 53 kDa existed natively in the hypocotyls as much as in the cotyledons whereas 24 kDa and 18 kDa proteins were increased by stress. Boiling stable proteins of 53 kDa were induced and those of the 25 kDa and 23 kDa were increased by cold treatment and ABA treatment in the cotyledons of Jangchundaehyung F1 spring white (Raphanus raphanistrodes L.). These results showed the differences of induced boiling stable proteins between fall radishes and spring radishes. Cycloheximide inhibited the induction of 25 kDa and 23 kDa proteins during stress. 22 kDa native protein disappeared during ABA treatment and reappeared by cycloheximide treatments. It may be explained that cycloheximide was responsible for the destruction process of proteins in the living organisms. The profile of boiling stable proteins in hypocotyls of spring radishes during stress was same as that of fall redishes.
High temperature stresses have caused growth inhibition and delayed heading in highland cultivation Chinese cabbage during summer in Korea. We have studied high temperature stress responses in the terms of changes of inorganic components and proteins by proteomic analyses. Insufficiencies of nitrogen and phosphorus have affected growth rate and calcium deficiency has caused blunted heading. Proteins extracted from Brassica seedling grown at the altitude of 600m and 900m in the Mount Jilun were extracted and analysed by 2-dimentional polyacrylamide gel electrophoresis. Profiles of protein expression was then analyzed by 2-dimentional gel analyses. Protein spots showing different expression level were picked using the spot handling workstation and subjected to MALDI-TOF MS. Total 48 protein spots were analyzed by MALDI-TOF MS and 30 proteins spots out of 48 were identified by peptide mass fingerprinting analyses. Fourteen proteins were up-regulated in extracts from the altitude of 900m and they were identified as oxygen-evolving proteins, rubisco activase and ATPase etc. Sixteen proteins were up-regulated in extracts from the altitude of 600m and they were identified as glutathione S-transferase(1, 28kD cold induced- and 24 kD auxin-binding proteins) and salt-stress induced protein etc. These stress-induced proteins were related to the mediated protective mechanism against oxidative damage during various stresses. The results indicated that physiological phenomenon in response to high temperature stresses might be resulted by complex and multiple array of responses with drought, heat, oxidative, salt, and cold by high temperature.
Cold shock proteins (Csps) are a subgroup of the cold-induced proteins on reduction of the growth temperature below the physiological temperature. They preferentially bind to single-stranded nucleic acids to translational regulation via RNA chaperoning. Csp plays important role in cold adaptations for the psychrophilic microorganism. Recently, Cold shock protein from psychrophilic bacteria, Colwellia psychrerythraea (CpCsp) has been identified. Three dimensional structures of a number of Csps from various microorganisms have been solved by NMR spectroscopy or X-ray crystallography, but structures of psychrophilic Csps were not studied yet. Therefore, cloning and purification protocols for further structural study of psychrophilic Csp have been optimized in this study. CpCsp was expressed in E. coli with pET-11a vector system and purified by ion exchange, size exclusion, and reverse phase chromatography. Expression and purification of CpCsp in M9 minimal media was carried out and $^{15}N$-labeled proteins with high purity over 90% was obtained. Further study will be carried out to investigate the tertiary structure and dynamics of CpCsp.
Supercooling points (SCP) and cold tolerance of the tobacco cutworm, Spodol~rera litura Fabricius. were measured in response to subzero temperatures. SCPs were varied among developmental stages. Eggs showed the lowest SCP (-27$^{\circ}$C). Pupae and adults had the intermediate SCP(- 18$^{\circ}$C). The SCPs (- I0 to - 16$^{\circ}$C) of larvae increased with their ages. Lethal low temperature of each stage was higher than its SCP. Preexposure of eggs and larvae to a sublethal low temperature increased their survival capacities under lethal low temperatures. The sublethal temperature also induced the fifth instar larvae to increase hemolymph osmolality and to produce cold-induced proteins of apparent molecular weights of 20 and 27 kD. These results indicate that this species is classified into a freeze-susceptible insect.
To treatment of Ricinus cotyledons with ABA, induced several proteins with molecular weights of 53, 54, 56, 58 and 73.5kD. 54 and 56kD among those proteins resulted in increased more when ABA concentrations in external media are increased. The molecular weight of 35, 49, 53, 54, 62, 65 and 79kD of proteins are induced by ABA treatment of roots. The induced proteins are not the same a those by cold treatment exception of 73.5kD of cotyledons and 62kD of roots. 49, 58 and 79kD of proteins are important to research in future because of the induction of proteins in the presence of cydoheximide(CH) which is blocked the synthesis of proteins.
Change of proteins was confirmed during low temperature acclimation of overwintering larva, and some biochemical characteristics of the induced antifreeze protein-1 (AFP-1) were investigated in Protaetia brevitarsis. As the freezing point depression by the action of induced AFPs, a considerable thermal hysteresis was observed in the haemolymph and in partially purified proteins. AFP-1 was purified from the cold acclimation larvae by ammonium sulfate precipitation ion exchange chromatography, gel permeation chromatography, and electroelution. The purified AFP-1 was determined to be a glycoprotein (approximately 320 kDa, pl 5.8) composed of a single type of subunit (80 kDa). The high contents of hydrophilic amino acids (Asp, Glu, Lys, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr) were also confirmed, showing similarity with antifreeze proteins from other insects.
The contents of sucrose and reducing sugars of cotyledons and hypocotyls of Ricinus communis L were increased slightly during cold treatment at $4^{\circ}C$. The concentration of total amino acids was increased continuosly during cold treatment. But the contents of hydrophilic amino acids, Asp/Asn, Glu/Gln, Thr, Ser, Ala and cationic amino acids, Arg and Lys were varied dramatically with the cold treated time. The cold treatment induced 24, 52, 54, 55, 56 and 73.5kD of proteins in cotyledons and 55, 56 and 73.5kD of proteins in hypocotyls. 24, 42, 49 and 52kD of proteins in cotyledons and hypocotyls were boiling stable. They were not denatrated by boiling at $100^{\circ}C$.
The sublethal temperature (5$^{\circ}$C for 2hr) led the fifth instar larvae of beet armyworm, Spodoprern exigucr (Hiibner), to increase cold tolerance to subzero lethal temperatures ( 'rapid cold hardening' ). The strength of rapid cold hardening was, however, varied among different populations which showed different cold tolerance in response to cold temperatures. To analyse the physiological factors affecting the rapid cold hardening, hernolymph osmolalities. supercooling points, glycerol contents, and cold stress proteins were measured by treating the fifth instar larvae with the sublethal low temperatures. The treated larvae showed increase of hemolymph osmolalities and glycerol contents. Changes of the osmolalities were greater in cold-hardy strains than in cold-susceptible strains. The sublethal temperature also induced them to express the cold-stress proteins (I0 - 20kD) in the hemolymph. but did not to change supercooling points.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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