• 대한본초학회지
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• 제38권5호
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• pp.49-60
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• 2023

Objectives : In this study, it was investigated the anti-inflammatory, anticancer, and antioxidant effects of Jayangdaebo-tang (JDT) consisting of twelve herbs before and after fermentation. Methods : JDT extract was fermented using the Lactoplantibacillus plantanum (JDT-L), Bacillus subtilis (JDT-B), and L. plantanum plus B. subtilis (JDT-L+B). The effects of each extract were measured in LPS-stimulated RAW264.7 cells, MCF-7 breast cancer and A549 lung cancer cells, and H₂O₂-stimulated HepG2 cells. Results : The extracts of JDT-L, JDT-B and JDT-L+B at 1 ㎎/㎖ decreased significantly the levels of nitric oxide (NO) in LPS-treated RAW264.7 cells and also inhibited the expression of iNOS and COX-2, and the phosphorylation of ERK and NF-κB. The JDT-L+B extract decreased significantly the expression of apoptotic proteins, Bax, cleaved caspase-3, and PARP in MCF-7 and A549 cancer cells. The JDT-L, JDT-B and JDT-L+B extracts increased significantly the cell viability in H₂O₂-stimulated HepG2 cells and the JDT-L+B extract decreased significantly the expression of SOD, catalase, HO-1, and NRF-2. Among fermented JDT extracts, JDT-L+B was the best effective on response of macrophage inflammation, cancer cell apoptosis, and liver cell damage. Conclusions : Our results were suggested that the fermentation can be used as a useful way to enhance the biological activity of JDT.

• 대한본초학회지
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• 제24권4호
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• pp.77-86
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• 2009

Objectives : The proliferation and migration of human aortic smooth muscle cells (HASMC) in response to activation by various stimuli plays a critical role in the initiation and development of atherosclerosis. This study was conducted to examine the effects of Nelumbo nucifera leaves (NNL) on the proliferation and migration of HASMC. Additionally, the mechanisms involved in any observed effects were also evaluated. Methods : Apoptotic cells were measured by staining with FITC-labeled annexin V, followed by flow cytometric analysis. The expression level of apoptosis related proteins was confirmed by western blot. And MMP-9 activity was measured by gelatin zymography and MMP-9 expression was measured by ELISA Results : NNL completely inhibited the proliferation of HASMC via induction of the expression of apoptotic proteins including annexin V, cleaved poly ADP-ribose polymerase (PARP), and caspase-3 and -8. NNL treatment resulted in the release of cytochrome c into cytosol, a loss of mitochondrial membrane potential, a decrease in Bcl-2 and Bcl-xL and an increase in Bax expression. NNL also blocked HASMC migration via suppression of MMP-9. Conclusions : Taken together, these results indicate that NNL has the potential for use as an anti-artherosclerosis agent.

• 생명과학회지
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• 제27권9호
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• pp.1020-1030
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• 2017

대장암은 미국 등 서양 국가뿐만 아니라 국내에서도 2번째로 많이 발병이 되는 암으로 알려져 있다. 역학조사에 의하면 오메가-3를 많이 섭취한 인종에서 대장암 발생빈도가 감소하고 최근 오메가-3는 수종의 암에 대해 항암작용을 나타낸다고 한다. 이에 본 연구에서는 대장암에서 DHA의 항침윤, 항혈관 신생 및 항종양 형성능 억제의 기전을 규명하여 다음과 같은 결과를 얻었다. DHA는 인체 대장암 세포주 HT29 의 증식을 농도 의존적으로 억제하였으나 AA는 거의 영향이 없었다. FACS 분석에서 DHA 처리했을 때 Sub G1 phase의 세포가 DHA의 농도 의존적으로 증가 하였다. DHA 처리 후 cleaved PARP가 증가하고, uncelaved caspase-3가 감소 하였다. HT29 세포의 침윤능은 DHA 처리에 의해 억제 되었다. DHA 처리 후 MMP-9 및 MMP-2 mRNA양이 감소 되었을 뿐만 아니라 그 promoter의 reporter 활성도 억제하였으며 VEGF promoter 활성도 DHA에 의해 억제 되었다. NF-kB promoter 활성 및 핵으로의 이동도 DHA에 의해 억제 되었다. In vivo 동물실험에서 생쥐 대장암 세포주인 MCA38에 대한 Fat-1 transgenic mice에서의 종양 형성능은 현저히 억제 되었다. 면역형광염색법을 이용한 Fat-1 transgenic mice의 종양 조직에서의 TUNEL 양성세포는 wild type mice에 비해 현저히 증가하였으나 CD31의 형광강도는 감소 되었다. 이상의 결과로 오메가-3는 대장암 세포에서 NF-kB 억제에 따른 COX-2, MMP-2 및 MMP-9 등 matrix matalloproteinase의 억제를 통한 침윤능의 억제, VEGF 억제를 통한 혈관신생의 억제등 복합적 기전에 의해 항암작용을 나타내리라 생각되며, 따라서 오메가-3는 대장암의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있으리라 생각된다.

• 생명과학회지
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• 제31권9호
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• pp.827-833
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• 2021

황칠나무 잎 추출물(DPL)은 염증, 당뇨병, 암 등 다양한 질병에 예로부터 약으로 사용되어 왔다. 특히 여러 종류의 암세포에 세포사멸 효과가 있는 것으로 밝혀졌지만 유방암 세포 SK-BR-3에 대한 세포사멸 효과는 아직 밝혀지지 않았다. 따라서 본 연구에서는 in vitro 실험을 통해 DPL이 유방암 세포 SK-BR-3에서의 증식 억제와 apoptosis를 통한 세포사멸 효과를 확인하였다. DPL이 세포 생존율에 미치는 영향을 조사하기 위해 MTT 분석을 수행했고 세포 생존율이 농도의존적으로 감소하는 것을 확인했다. DAPI 염색은 DPL에 의해 발생한 세포 형태학적 변화와 apoptotic body의 증가에 미치는 영향을 조사하기 위해 수행되었다. 이를 보완하기 위해 annexin V/PI 염색 후 유세포 분석을 통해 세포 apoptosis 비율의 증가를 확인했다. Apoptosis 관련 단백질들을 확인하기 위해 Western blot을 수행하였으며, cleaved-PARP과 pro-apoptosis 단백질인 Bax의 증가와 anti-apoptosis 단백질인 Bcl-2의 감소를 확인하였다. MAPK 경로 단백질 p-ERK1/2, p-JNK 및 p-p38의 발현 수준의 변화도 확인하였으며 p-p38의 유의미한 증가가 관찰되었다. 본 연구 결과에 따르면 DPL은 유방암 세포 SK-BR-3에서 p-p38 MAPK 경로 조절을 통해 세포사멸 효과를 유도하는 것으로 사료된다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제34권2호
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• pp.183-190
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• 2019

우르솔릭산은 항암, 항산화, 항염증 작용과 같은 다양한 효과를 지니고 있다. 본 연구에서는 우르솔릭산이 인간 흑색종 암세포인 A375SM과 A375P 세포에 항암효과가 있는지 확인하였다. 두 세포의 생존율은 MTT assay를 통하여 확인하였으며 증식률은 Wound healing assay로 확인하였다. 두 세포의 apoptotic body와 apoptosis 비율의 확인을 위한 DAPI 염색과 유세포 분석을 진행하였다. 그리고 웨스턴 블로팅을 통하여 흑색종 세포의 우르솔릭산의 농도에 따른 apoptosis 단백질의 유도를 조사하였다. 우르솔릭산의 처리 농도에 따라 흑색종 세포의 생존율 감소와 증식률 감소를 확인하였다. DAPI 염색을 통하여 우르솔릭산의 농도가 증가함에 따라 흑색종 세포의 염색체 응축이 농도 의존적으로 증가하였고, 유세포 분석을 통하여 우르솔릭산에 대하여 농도 의존적으로 흑색종 세포의 apoptosis 비율의 증가를 확인하였다. 그리고 웨스턴 블로팅을 통해 흑색종 세포 A375SM과 A375P의 우르솔릭산 $12{\mu}M$ 농도에서 cleaved-PARP와 Bax의 증가와 Bcl-2의 감소를 확인하였다. 본 연구는 우르솔릭산의 농도를 0 에서 $20{\mu}M$ 수준의 저농도에서 진행하였으며, 물질 처리 후 24 시간 뒤 결과를 가지고 분석하였다. 본 연구의 결과로 보아 우르솔릭산은 흑색종 세포 A375SM과 A375P에서 apoptosis 관련 단백질들의 조절을 통해 항암효과를 일으키는 것으로 사료된다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제45권5호
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• pp.671-679
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• 2016

본 연구에서는 메탄올로 추출한 시금치, 양배추, 양파 추출물의 인간 위암세포 AGS와 인간 유방암세포 MDA-MB-231, SK-BR-3 암세포에서의 세포 증식 억제 효과와 apoptosis 유도 효과에 대하여 비교 조사하였다. AGS, MDA-MB-231, SK-BR-3 암세포에 시금치, 양배추, 양파 추출물을 0, 50, 100, $200{\mu}g/mL$로 24시간 동안 처리한 뒤 MTT assay를 통하여 세포 생존율을 측정한 결과 암세포 생존율이 농도 의존적으로 감소하였다. 이러한 시금치, 양배추, 양파 추출물의 암세포 증식 억제 효과가 apoptosis에 의해 유도되는지 확인하기 위해 AGS, MDA-MB-231, SK-BR-3 암세포에 각 추출물을 0, $200{\mu}g/mL$로 24시간 동안 처리한 후 DAPI staining을 수행한 결과 apoptotic body와 염색질 응축이 추출물 처리군에서 증가하였다. MTT assay와 DAPI staining 결과 암세포 증식 억제 효과 및 apoptosis 유도효과가 가장 우수했던 양파 추출물에 의한 apoptosis 관련 단백질들의 변화 양상을 확인하기 위해 western blotting을 수행하였다. AGS, MDA-MB-231, SK-BR-3 암세포에 양파 추출물을 0, $200{\mu}g/mL$로 24시간 동안 처리한 뒤 western blotting을 수행한 결과 pro-apoptotic 인자인 Bax 발현은 증가하였으며 PARP 단백질의 분절 또한 증가한 것을 확인하였다. 반면 anti-apoptotic 인자인 Bcl-2의 발현은 감소하였다. 이러한 결과들을 종합하였을 때 시금치, 양배추, 양파 추출물은 인간 위암세포인 AGS, 인간 유방암세포인 MDA-MB-231, SK-BR-3에서 apoptosis 유도를 통해 암세포 성장을 억제하는 것으로 생각한다. 그중 양파 추출물의 효과가 가장 우수했으며 유방암세포보다 위암세포에서의 apoptosis 유도 효과가 뛰어났다. 따라서 양파의 섭취는 위암의 예방 및 치료를 위한 치료제로의 개발 가능성이 우수함을 제시하며 추후 지속적인 연구를 통하여 in vivo에서의 양파 추출물의 항암 효과에 대한 연구가 이루어져야 할 것으로 생각한다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제36권4호
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• pp.431-438
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• 2007

해조류는 다양한 생리 활성을 나타내는 성분들을 함유하고 있어 항산화효과 등 다양한 생리활성 효과를 나타내는 것으로 보고되고 있다. 본 연구에서는 식용 가능한 28종의 해조류 메탄올추출물 중 보라우무 메탄올추출물이 인간의 대장에서 유래한 암세포인 HT-29세포의 세포증식을 억제함을 밝혔고, 가장 강한 HT-29 세포 증식 억제 효과를 나타낸 보라우무 메탄올추출물의 대장암세포 증식억제 기전을 밝히고자 하였다. 보라우무 메탄올추출물을 HT-29 세포 배양액에 여러 농도$(0{\sim}20{\mu}g/mL)$로 첨가하여 세포를 배양한 경우 보라우무 메탄올추출물 처리 농도가 증가할수록 세포증식이 현저히 감소하였고, apoptotic cell수는 현저히 증가하였다. Apoptosis의 주요한 조절인자인 Bcl-2 family 단백질 중 Bcl-2는 보라우무 메탄올추출물에 의해 변화가 없었고 Bax는 고농도에서만 소폭 감소하였다. 반면, t-Bid 단백질 수준은 보라우무 메탄올추출물의 처리에 의해 현저하게 증가하였다 Bcl-2 family Protein과 더불어 apoptosis의 조절에 주요한 역할을 하는 caspase 단백질의 경우 보라우무메탄올추출물 처리에 의해 cleaved caspase-8, -9, -7, -3 단백질 수준이 현저히 증가하였고, cleaved PARP 단백질수준도 현저히 증가하였다. 또한, caspase-8의 활성화를 유도하는 Fas 단백질 수준도 보라우무 메탄올추출물에 의해 현저하게 증가하였다. 이 결과로부터 보라우무 메탄올추출물은 caspase-8의 활성 증가에 의한 미토콘드리아 막 투과성 변화와 caspase-7/-3 활성의 증가를 통해 apoptosis를 유도함으로써 암세포의 증식을 억제한다는 결론을 내릴 수 있다. 본 연구는 보라우무를 항암효과를 지니는 기능성식품이나 항암제로 개발할 수 있는 가능성을 제시하고 있으며 향후 보라우무를 이용한 제품의 개발을 위해서는 유효성분의 동정 및 그 성분의 작용 기전에 대한 면밀한 추가 연구가 필요할 것으로 보인다.

• 동의생리병리학회지
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• 제31권2호
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• pp.111-117
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• 2017

The anti-cancer effects of Astragalus membranaceus (AM) and Adenophora triphylla var. japonica (AT) have been described. Each of their effects mainly focused on the immunopotentiating and apoptosis inducing-ability in several cancer cell lines. Although the combination of AM and AT is occasionally used in Chinese medicine to treat lung cancers, their synergistic effect has not been proved yet. This study was designed to verify whether AM combined with AT exhibits a synergistic anti-cancer effect in H1299 human lung carcinoma cells. The ethanol extracts of AM (EAM) and AT (EAT) showed only slight cytotoxicity in H1299 cells when treated alone. However, the combination of EAM and EAT markedly suppressed the cell growth measured by MTT assay and trypan blue counting assay. In addition, co-treatment of EAM with EAT significantly reduced the colony-forming ability compared with single treatment of EAM or EAT in H1299 cells. We demonstrated that the synergistic effect of AM and AT was related with apoptosis induction proved by an accumulation of chromatin condensation, annexin V-positive cells, sub-G1 phase population, and cleaved-PARP expression, which were not observed by single treatment of EAM or EAT. In conclusion, the combination of EAM and EAT exhibited superior anti-cancer activity in H1299 cells than single treatment of EAM or EAT. We suggest that EAM combined with EAT might be a novel therapeutic option for lung cancer patients, and provide a reference for the development of more effective combination of Chinese herbs to treat lung cancer.

• 한국식품영양과학회지
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• 제35권5호
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• pp.516-523
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• 2006

차가버섯(Inonotus obliquus)은 한랭한 삼림지대에서 자라는 자작나무에 자생하는 버섯으로, 항종양 및 항돌연변이 활성이 있는 것으로 보고되고 있으나, 차가버섯의 항암기전에 대해 밝혀진 바가 없어, 본 연구에서는 인체의 대장암에서 유래한 HT-29 세포를 사용하여 차가버섯 물추출물의 대장암세포 증식 억제기전을 밝히고자 하였다. 차가버섯을 열수추출하여 냉동 건조하여 얻은 물추출물을 HT-29 세포 배양액에 여러 농도($0{\sim}100{\mu}g/mL$)로 첨가하여 세포의 증식에 미치는 영향을 조사하였다. 세포의 증식은 차가버섯 추출물 농도가 증가할수록 현저히 감소하였다. 차가버섯 물추출물 처리 농도에 비례하여 세포의 DNA합성은 감소하였고, apoptotic cell의 수는 현저히 증가하였다. Apoptosis의 주요한 조절 인자인 Bcl-2 family 단백질 수준은 차가버섯에 의해 변화하지 않았으나, cleaved caspase-8, -9, -3의 단백질 수준은 차가버섯에 의해 증가하였다. Caspase-8, -9, -3의 활성도 모두 차가버섯에 의해 유의적으로 증가하였다. Caspase-3의 표적 단백질로 세포의 생존에 결정적인 역할을 하는 PARP단백질의 분해도 차가버섯에 의해 현저히 증가하였다. 이 결과로부터 차가버섯 물추출물이 DNA합성을 억제하고 apoptosis를 유도하여 대장암 세포의 증식을 억제하고, caspase 경로의 활성을 증가하므로써 apoptosis를 유도한다는 결론을 내릴 수 있다. 또한 이 결과는 차가버섯 물추출물을 대장암의 예방이나 치료에 사용할 수 있는 가능성을 제시한다.

• Biomolecules & Therapeutics
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• 제28권2호
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• pp.202-210
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• 2020

Fluoxetine is used widely as an antidepressant for the treatment of cancer-related depression, but has been reported to also have anti-cancer activity. In this study, we investigated the cytotoxicity of fluoxetine to human gastric adenocarcinoma cells; as shown by the MTT assay, fluoxetine induced cell death. Subsequently, cells were treated with 10 or 20 µM fluoxetine for 24 h and analyzed. Apoptosis was confirmed by the increased number of early apoptotic cells, shown by Annexin V- propidium iodide staining. Nuclear condensation was visualized by DAPI staining. A significant increase in the expression of cleaved PARP was observed by western blotting. The pan-caspase inhibitor Z-VAD-FMK was used to detect the extent of caspase-dependent cell death. The induction of autophagy was determined by the formation of acidic vesicular organelles (AVOs), which was visualized by acridine orange staining, and the increased expression of autophagy markers, such as LC3B, Beclin 1, and p62/SQSTM 1, observed by western blotting. The expression of upstream proteins, such as p-Akt and p-mTOR, were decreased. Autophagic degradation was evaluated by using bafilomycin, an inhibitor of late-stage autophagy. Bafilomycin did not significantly enhance LC3B expression induced by fluoxetine, which suggested autophagic degradation was impaired. In addition, the co-administration of the autophagy inhibitor 3-methyladenine and fluoxetine significantly increased fluoxetine-induced apoptosis, with decreased p-Akt and markedly increased death receptor 4 and 5 expression. Our results suggested that fluoxetine simultaneously induced both protective autophagy and apoptosis and that the inhibition of autophagy enhanced fluoxetine-induced apoptosis through increased death receptor expression.