CSF is a major concern for the swine industry, representing currently the most epizootically dangerous disease to the species. Numerous CSFV isolates with various degrees of virulence have already been isolated worldwide, ranging from low virulent strains that do not result in any apparent clinical signs to highly virulent strains that cause a severe per acute hemorrhagic fever with very high mortality. The molecular epidemiology of CSFVs has proven to be an essential tool for effective disease control and the development of safe and effective vaccines. Therefore, this study cloned and sequenced local CSFV isolates, and conducted a phylogenetic analysis based on the E2 glycoprotein encoding sequences.The RNA was extracted from PK15 cell culture passaged CSFV isolates, the cDNA prepared, and the complete E2 gene amplified with a product size of 1186 bp. The gelpurified PCR product was cloned into a pGEMT easy vector and the positive clone commercially sequenced. Aligning the nucleotide (1119 bp) and amino acid (373) sequences with 29 reference strains revealed nucleotide and amino acid sequence identities of 82.60-97.80% and 88.70-98.70%, respectively, indicating a higher mutation rate of the field CSFV strains. The phylogenetic analysis based on the complete E2 amino acid sequences also revealed a reliable differentiation of all the analyzed strains into specific genetic groups and subgroups, plus the local isolate (CSFV-E2) was found to cluster with the CSFV subgroup 2.2. Thus, the full-length E2 cds proved to be most suitable for a reliable and statistically significant phylogenetic analysis of CSFV isolates.
The risk of an outbreak of classical swine fever (CSF) was evaluated in relation to the vaccination and seroprevalence of antibodies. Blood samples were collected from 60 piggeries throughout Korea and information regarding CSF vaccination habits was also obtained via in-person interviews with pig farmers. The results of the survey indicated that 51 out of 60 farms were regularly performing CSF vaccinations in reproductive herds. Farmers preferred to vaccinate their reproductive pigs before weaning (41 farms) than on (9 farms) or after weaning (1 farm). In growing herds, however, double vaccinations as recommended were implemented for only 40 farms (66.7%) and vaccine schedules were identified as being frequently ignored. Moreover, many farms (18/40) were found to vaccinate earlier or later than the recommended time. According to antibody seroprevalence levels, only 36 farms (60%) were considered to be safe regarding potential risk for a CSF outbreak. Among the remaining pig farms, 6 were at low-risk (10%), 12 were at medium-risk (20%), and another 6 were at high-risk (10%). Antibody levels were found to be consistent with vaccination status obtained from personal interview surveys. Our findings demonstrate the importance of vaccinations regarding the prevention of a CSF outbreak, suggesting that vaccinations must be promoted toward pig raisers and practitioners.
Bae, Sung Min;Lee, Seung Hee;Kwak, Won Suk;Ahn, Yong Oh;Shin, Tae Young;Woo, Soo Dong
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제29권2호
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pp.207-213
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2014
The structural proteins of classical swine fever virus (CSFV) consist of nucleocapsid protein C and envelope glycoprotein $E^{rns}$ (E0), E1 and E2. Among them, E2, the most immunogenic of the CSFV glycoproteins, induces a protective immune response in swine. In this study, to determine the optimal expression conditions of glycoprotein E2 using baculovirus system, we investigated the influence of insect cells and media to the expression of recombinant E2. Recombinant virus containing glycoprotein E2 coding gene was constructed with bApGOZA DNA. Expression of the glycoprotein E2 was analyzed by SDS-PAGE and Western blot analysis using anti-CSFV E2 monoclonal antibodies. Expression of glycoprotein E2 in Sf21 cells was first observed after 3 days and reached a maximum on the 5th day after infection. Furthermore, the highest levels of glycoprotein E2 expression were observed at multiplicity of infection (MOI) of 5. When three different insect cell lines (Sf21, High-Five and Se301) were tested, High-Five cells showed the highest production. In addition, four different serum-free and serum-supplemented media, respectively, were tested for the expression of glycoprotein E2 and the budded virus (BV) titers. As a result, serum-supplemented medium provided the best conditions for protein production and the BV yield.
This study was conducted to survey the farm which suffered from disease similar to classical swine fever(CSF) in Gyeongbuk province. Clinical signs appeared first in a few number of growing pigs which showed specific signs of diarrhea, depression, sleepiness, and reluctance to get up or to eat. Younger piglets may have appeared chilled, shiver and huddle together. As the disease progresses the affected pig's skin went red and purple. In histopathological signs, there were many haemorrhages throughout the body and larger haemorrhages in some organs such as lymph nodes. And there is a precipitous fall in the number of circulating leukocytes in the blood. In spite of insisting of farmer which did not vaccinate to classical swine fever, significant antibody production was detected in these affected pigs at enzyme-linked immuonsorbent assay. According to the above results at first glance, these affected pig suspected with CSF in clinical signs and histopathological lesions only. Because the symptoms and post-mortem picture were very similar to CSF, these false positive results would have been dangerous to diagnostician. But by reverse transcriptase polymerase chain reaction(RT-PCR) and comparative nucleotide sequence analysis, the disease was correctly diagnosed with post-weaning multisystemic wasting syndrome(PMWS) and porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS) compoundly. And the antigen which were detected the lesion similar to CSF virus, was confirmed with LOM vaccine strain of CSF. In most national CSF eradication program and in countries which are free of the CSF virus, vaccination against CSF is not practiced and generally is not allowed. But now in Korea, routine vaccination is practiced because of outbreaking the CSF repeatedly. When CSF is diagnosed the whole herd and other in contact animal are slaughtered continuously.
Classical swine fever (CSF) is a highly contagious disease of pigs caused by CSF virus (CSFV). E2 is the major viral envelope protein of immune dominance that induces neutralizing antibodies and confers protection against CSFV infection. The B/C domains of E2 are variable among CSFV isolates, which could affect immunogenicity and binding to antibodies. We attempted to characterize the epitope recognized by a monoclonal antibody 2B6 (mAb-2B6) raised against the E2 B/C domains of the vaccine C-strain and to examine if mutations in the epitope region would affect antibody binding and viral neutralization. The epitope specific for mAb-2B6 recognition is linear, spanning five residues 774DGXNP778 in the B/C domains. The residue N777 is indispensable for the specificity. The epitope exists only in group 1 strains, but not in those of group 2. The recombinant viruses containing individual mutations on the epitope region lost the reactivity to mAb-2B6. The mutant virus RecC-N777S had low replication potential, about 10-fold decrease in the yield of progeny virus particles, whereas the mutant virus RecC-P778A reverted to proline upon continuous passaging. The mutations on the mAb-2B6 epitope region did not affect neutralization by anti-C-strain polyclonal sera from pigs. Deletion from aa774 covering the mAb-2B6 epitope, but not that from aa781, also affected binding with the polyclonal antibodies from vaccinated pigs, although the major binding region for the vaccinated antibodies is aa690-773.
Prevalence of major legal communicable diseases in bovine and swine had been monitored in Jeonbuk province from year 2004 to 2008. At least 1 communicable disease had been reported in 687 heads from 68 bovine farms and 17 farms (25.0%) of the 68 positive farms had 1~2 additional outbreaks during the surveillance. By disease, enzootic bovine leukosis, Johne's disease and Akabane disease were occurred in 53 farms (582 heads), 14 farms (100 heads) and 1 farm (5 heads), respectively. Swine communicable diseases were occurred in 4,466 heads from 63 swine farms and 18 farms (28.6%) of the 63 positive farms had 1~2 additional outbreaks during the surveillance. By disease, Aujeszky's disease (AD), porcine epidemic diarrhea (PED), classical swine fever (CSF), porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS), porcine transmissible gastroenteritis (TGE), atrophic rhinitis (AR) and Japanese encephalitis in swine (JE) were occurred in 20 farms (70 heads), 20 farms (2,817 heads), 12 farms (258 heads), 6 farms (1,257 heads), 1 farm (50 heads), 1 farm (2 heads) and 1 farm (10 heads), respectively. In total, 10 communicable diseases (1 species of first-class, 3 species of second-class, and 6 species of third-class) were reported. The first-class diseases were CSF. Johne's disease, and Aujeszky's disease. JE was the second-class and Akabane disease, enzootic bovine leukosis (EBL), PED, PRRS, TGE and AR were third-class diseases.
Wild boar is closely related to domestic pigs in terms of genetic homogeneity and the possibility of a source of infection by contact. This study investigated the prevalence of viral diseases from wild boars inhabiting Gyeongsangnam-do, South Korea. A total of 374 blood samples were collected and subjected to antigen tests to detect African swine fever virus (ASFV), Porcine circovirus type-2 (PCV2), Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV). For seroprevalence, PCV2, PRRS, classical swine fever virus (CSFV), Aujezsky's disease (ADV), and foot and mouth disease virus (FMDV) were investigated. The antigenic analysis revealed 73 positive cases (19.5%) for PCV2, while no positive cases for ASFV and PRRSV. For the antibody test, 225 (60.2%), 2 (0.5%), and 48 (12.8%) cases were detected against PCV2, PRRSV, and CSFV, respectively. There were no antibodies detected against both ADV and FMDV. Our results suggest that the viruses infecting both wild boar and domestic pig, mainly PCV2, are circulating in the wild boar population thus, the consistent monitoring of prevalence in wild boar will be needed for transboundary spillover to the domestic pig.
Neonatal Fc receptor (FcRn) gene encodes a receptor that binds the Fc region of monomeric immunoglobulin G (IgG) and is responsible for IgG transport and stabilization. In this report, the 8,900 bp porcine FcRn genomic DNA structure was identified and putative FcRn protein included 356 amino acids. Alignment and phylogenetic analysis of the porcine FcRn amino acid sequences with their homologies of other species showed high identity. Tissues expression of FcRn mRNA was detected by real time quantitative polymerase chain reaction (Q-PCR), the results revealed FcRn expressed widely in ten analyzed tissues. One single nucleotide polymorphism (SNP) (HQ026019:g.8526 C>T) in exon6 region of porcine FcRn gene was demonstrated by DNA sequencing analysis. A further analysis of SNP genotypes associated with serum Classical Swine Fever Virus antibody (anti-CSFV) concentration was performed in three pig populations including Large White, Landrace and Songliao Black pig (a Chinese indigenous breed). Our results of statistical analysis showed that the SNP had a highly significant association with the level of anti-CSFV antibody (At d 20; At d 35) in serum (p = 0.008; p = 0.0001). Investigation of expression and polymorphisms of the porcine FcRn gene will help us in further understanding the molecular basis of the antibody regulation pathway in the porcine immune response. All these results indicate that FcRn gene might be regarded as a molecular marker for genetic selection of anti-CSFV antibody level in pig disease resistance breeding programmes.
Artificial insemination (AI) of swine is a very useful reproductive tool and that offers convenience in the Korean swine industry. Since many viruses have been reported to be excreted through boar semen, we investigated the presence of antibodies and antigens against viruses causing reproductive failure in semen of boar in 349 semen samples collected from six Korean AI centers. Viral antigens were detected by polymerase chain reaction (PCR) or reverse transcription-PCR predominantly. The results was as follows. The major reproductive failure causing factor was porcine circovirus type 2 (PCV2), followed by porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) ($X^2$=166.64, P<0.001). PCV2 and PRRSV, Japanese encephalitis virus (JEV), encephalomyocarditis virus (EMCV) was detected in 73 samples (20.9%), 44 samples (12.6%), 4 samples (1.1%), 3 samples (0.9%), respectively and porcine parvovirus in one sample (0.3%) Classical swine fever virus (CSFV), bovine viral diarrhea virus and Aujeszky's disease virus (ADV) were not detected. Enzyme-linked immunosorbent assay was carried out in 111 serum samples from three AI centers. In most pigs, antibodies response was showed prominently in CSFV (105 sera, 94.6%) ($X^2$=82.580, P<0.001), followed by, in PRRSV (100 sera, 90.1%), PCV2 (92 sera, 90.1%), and PPV (8 sera, 82.9%). ADV antibody was not detected. Thus, the experimental results will be used for the base data, with respect to the state of viral stillbirth in general pig farms, as well as AI centers and breeding farms in Korea.
This study was conducted to investigate the infection of livestock diseases using 500 blood samples from wild boars captured in six cities and one county in northern Gyeonggi province, South Korea. We examined 239 cases of classical swine fever virus (CSFV), and each of 500 cases of foot and mouth disease virus (FMDV), porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), porcine circovirus type 2 (PCV2), Mycoplasma hyopneumoniae (MH), Actinobacillus pleuropneumoniae (APP), Pasteurella multocida type A (PMA), Hemophilus parasuis (HP), Salmonella (Sal.) spp. infections. Antibodies were detected against CSFV (23.4%), PRRSV (4.0%), PCV2 (60.4%), MH (3.0%), APP (69.2%), PMA (52.8%), HP (11.8%), and Sal. spp. infections (37.2%). No antibodies were detected against FMDV. As a result of antigenic analysis of 68 positive cases (13.6%) out of 500 PRRS antigen tests, 61 North American cases, 6 European cases, 1 North American-European complex case. PCV2 has 158 positive cases (31.6%) out of 500 antigen tests, and the results indicate that a considerable number of individuals are infected. To our knowledge, this is the first seroprevalence report of MH, APP, PMA, HP, and Sal. spp. infections in wild boars in South Korea.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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