간편하고 효율적이며 친환경적인 시료전처리 방법인 3-상 속빈 섬유 액체상 미량추출법(3-phase HF-LPME) 및 HPLC-UV/Vis를 이용하여 소변 중에 존재하는 테트라사이클린류 항생제 3종(tetracycline, oxytetracycline, chlortetracycline)을 동시에 분석하는 방법을 개발하였다. 분석 물질은 $C_8$ 컬럼($150{\times}3.0mm$, $3{\mu}m$)을 사용하여 기울기 용리법으로 분리되었으며 높은 선택성과 감도를 나타내었다. 시료 전처리를 위한 최적의 실험조건을 확립하였는데, 추출용매로는 heptanal, 추출시간은 60분, 주개 상의 pH는 9.0, 받개 상의 pH는 1.0, 시료의 교반속도는 700 rpm, 추출 시간은 60분이었으며 농축인자는 5.6~22.3이었다. 검출한계와 정량한계는 각각 $0.08{\sim}0.8{\mu}g/mL$와 $0.4{\sim}1.6{\mu}g/mL$이었으며, $0.1{\sim}32{\mu}g/mL$ 농도범위의 검정곡선은 좋은 직선성($R^2$ >0.995)과 정밀도(1.3~9.1 RSD %) 및 정확도(84~118%)를 나타냈다.
HPLC를 이용한 분석은 항균, 항생제의 정량분석에 있어 가장 널리 이용되고 있으며, 최근에 개발된 MSPD방법은 고정상을 직접 갈아서 추출, 정제하는 방법으로 전처리 시 그조작이 간단하며, 유기용매가 적게 들고 전처리 시간이 짧다는 장점이 있다. 본 연구는 HPLC와 MSPD방법을 이용하여 가축 중 소비량이 가장 많은 돼지고기와 생선 중 회로 가장 많이 소비되는 광어에 대하여, 식품 중 잔류 가능성이 높은 tetracycline계 항생제 3종(oxytetracycline, tetracycline, chlortetracycline)과 sulfonamide(sulfadimethoxine, sulfamerazine, sulfamethazine, slfaquinoxaline, sulfamonomethoxine) 5종의 동시분석방법을 개발코자 하였다. HPLC의 최적 분석조건으로 파장은 tetracycline계 항생물질은 360 nm에서 sulfonamide는 270 nm였으며, 이동상은 TC와 SMR이 분리되는 시점인 15분까지는 pH 4.5, oxalic acid : acetonitrile (78.5 : 21.5, v/v)로 분석하고 이후 30분까지는 pH 6.1, oxalic acid : acetonitrile (78.5 : 21.5, v/v)로 분석을 실시하였을 때 기존의 실험방법보다 피크의 분리도와 검출한계의 개선이 이루어졌으며 이를 토대로 8가지 성분의 MRLs인 $0.1{\sim}0.2mg{\cdot}kg^{-1}$까지 충분히 분석이 가능하였다. MSPD 적용을 위한 시료의 전처리 방법개선은 기존의 0.5 g으로 제한된 시료량을 3 g으로 늘릴 수 있었고 dichloromethane 20 mL와 methanol 20 mL로 연속적으로 8가지 성분을 동시에 용출시켜 sulfonamide는 $80.25{\sim}101.25%$, tetracycline계 항생물질은 $85.77{\sim}121.42%$의 회수율을 얻을 수 있었다.
본 연구는 오배자(Galla Rhois, GR)가 이유자돈의 성장과 설사발생에 미치는 영향을 조사하였다. 100두의 28일령 이유자돈을 무작위적으로 5개의 실험군(NC, 대조군; PC, chlortetracycline 0.3 g/kg feed; GR 1, GR 1.0 g/kg feed; GR 2, GR 2.0 g/kg feed; GR 3, GR 4.0 g/kg feed3)으로 나누어 실험을 수행하였다. 28일 동안 실험군별로 처리한 후, PC, GR 2 그리고 GR 3의 최종 체중과 사료요구율은 NC와 비교하여 통계적으로 유의성 있게 증가하였다(p < 0.05). 또한, PC와 GR를 급여한 모든 군의 일평균증체량과 일평균사료섭취량도 NC와 비교하여 통계적으로 유의한 차이를 보였다(p < 0.05). 특히, GR 2와 GR 3의 최종 체중, 일일평균증체량, 일평균사료섭취량 그리고 사료요구율은 PC와 비교하여 유의한 차이를 보이지 않았다. 분변지수와 설사지속시간에 있어서, PC와 GR를 급여한 모든 군이 NC와 비교하여 통계적으로 유의한 차이를 나타내었다(p < 0.05). 혈액학적 그리고 혈액생화학적 분석 결과, NC와 GR를 급여한 모든 군들 사이에서 혈액학적 그리고 혈액생화학적 지표값들의 통계학적 유의한 차이가 보이지 않았다. 본 연구결과로부터, GR은 자돈에 있어서 설사발생과 성장증체를 개선시키기 위한 강력한 사료첨가제로 사료된다.
Han, X.;Piao, X.S.;Zhang, H.Y.;Li, P.F.;Yi, J.Q.;Zhang, Q.;Li, P.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제25권4호
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pp.569-576
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2012
Two experiments were conducted to investigate the potential for Forsythia suspensa extract (FSE) to substitute for antibiotic in broiler chicken. First, a well-diffusion assay procedure and a 2-fold dilution method were used to determine the bacteriostatic activity of FSE on Escherichia coli K88, staphylococcus aureus, and salmonella was assayed. An inhibitory effect of FSE was observed on the growth of these bacteria. This effect seems to be dose depended, which disappeared after 25.00, 12.50, 1.56 mg/ml. Second, a 42-d trial with 252 broiler chickens (d 1, $38.7{\pm}1.1$ g BW) was conducted to evaluate the effect of dietary supplementation of FSE in broiler chicken. The feeding program consisted of a starter diet from d 1 to 21 and a finisher diet from d 22 to 42. Dietary treatments included were: i) NC: negative control fed a corn-soybean meal based diet; ii) PC: positive control group fed based diet with chlortetracycline; and iii) FC: a test group fed with 100 mg FSE/kg diet. In this study growth performance did not differ among treatments during the starter period. However, dietary supplemental chlortetracycline and FSE increased (p<0.05) average daily gain (ADG), average daily feed intake (ADFI) compared with NC during the finisher and overall phase. Apparent digestibility of calcium on d 21, digestibility of energy and calcium on d 42 of FC was greater (p<0.05) than NC. Moreover, cecal Escherichia coli counts for birds from FC were lower (p<0.05) than NC. Dietary FSE supplementation also improved (p<0.05) villus height and villus height to crypt depth ratios in both duodenum and ileum and decreased (p<0.05) crypt depth in the duodenum. Duodenum villus height and villus height to crypt depth ratio in both duodenum and ileum from the FC group were also greater (p<0.05). Serum growth hormone and IGF-1 were not influenced by different treatments. Apparently, FSE has the potential to substitute for antibiotic in broiler chicken.
고속액체크로마토그라피를 이용하여 동물성 식품 중 테트라싸이클린계 항생물질의 동시분석을 시도하였다. 대상물질은 동물의 질병치료.예방, 성장촉진 및 사료효율 개선에 널리 사용되는 클로르테트라싸이클린, 독시싸이클린, 옥시테트라싸이클린 및 테트라싸이클린이었으며, 대상식품은 쇠고기, 돼지고기, 닭고기, 우유, 계란, 넙치, 우럭, 참돔, 뱀장어 및 바다가재이었다. 시료를 McIlvaine 완충액 및 20% 삼염화초산으로 추출한 후 $C_18$ 카트리지로 정제하여 고속액체크로마토그라피로 분석하였다. 이동상으로는 0.01M 수산과 아세토니트릴의 혼합용액을 85:15에서 60:40까지 기울기로 사용하였으며 UV의 검출파장은 365 nm 이었다. 평균 회수율은 71-98% 이었으며, 검출한계는 신호대 잡음비 3 이상에서 클로르테트라싸이클린은 0.022, 독시싸이클린은 0.012, 옥시테트라싸이클린은 0.012 및 테트라싸이클린은 0.009 mg/kg이었다. 대부분의 시료에서 클로르테트라싸이클린, 독시싸이클린 및 테트라싸이클린은 검출되지 않았으나, 돼지고기, 넙치 및 참돔(2시료)에서 옥시테트라싸이클린이 각각 0.04, 0.17, 0.05 및 0.08 mg/kg로 모두 잔류허용기준을 초과하지 않은 수준으로 검출되었다.
3원 교잡종 (Landrace$\times$Yorkshire$\times$Duroc) 육성돈 72두를 공시하였으며, 시험 개시시 체중은 24.64$\pm$2.46kg이었다. 시험설계는 1)NC(basal diet; antibiotics free diet), 2) PC (NC diet + 0.1% antibiotics; chlortetracycline 0.05% + neomycin 0.05%), 3)DFM0.1(NC diet + 0.1% DFM)와 4)DFM0.3(NC diet + 0.3% DFM)의 4개 처리를 하여 처리당 6 반복, 반복당 3마리씩 완전임의 배치하였다. 총 사양시험 기간 동안, 일당증체량은 PC, DFM0.3, DFM0.1과 NC의 순으로 각각 806g, 781g, 774g및 753g으로 나타났으나, 유의적인 차이는 보이지 않았다(P>0.05). 사료효율에 있어서는 처리구간 유의적인 차이가 없었다(P>0.05). 혈액 내 IgG(Immunoglobulin G), WBC(White blood cell)함량에 있어서는 생균제를 0.3%첨가한 처리구에서 가장 높은 경향을 보였으나 유의적인 차이는 없었으며(P>0.05), RBC(Red blood cell)함량에 있어서는 처리구간 유의적인 차이를 보이지 않았다(P>0.05). 결론적으로 육성돈에 있어서 Lactic acid bacteria를 기초로한 복합생균제의 첨가, 급여 수준의 증가에 따라 성장 능력과 혈액성상이 개선시키는 영향을 주지 못하였다.
가축 질병의 예방 및 치료뿐만 아니라 사료 이용효율 증대와 생장 촉진을 위하여 축산용 항생제가 쓰여져 왔으며, 이 항생제는 가축분뇨를 통해 배출되어 농경지에 유입될 가능성이 있다. 나아가 용탈과 표면 유거를 거쳐 수계에 도달할 수 있으나, 모든 항생제의 환경 유출 가능성을 검토하는 데에는 많은 시간과 노동력, 예산이 필요하다. 본 연구는 축산용 항생제의 사용량과 잠재적 환경 유출 가능성을 기준으로 우선 순위를 결정하고자 수행되었다. 2004년에 우리 나라에서 판매된 항생제는 83종으로 약 1,400 톤에 달하였으며, 이 가운데 25 톤 이상 사용된 항생제는 10종이었다. 3 톤 이상 쓰인 36 종의 항생제를 대상으로, 가축의 배출율과 토양 흡착 정도를 가지고 잠재적 환경 유출 가능성을 판단하여 17 종을 선발하였다. 축산용 항생제의 사용량과 잠재적 환경 유출 가능성을 종합하여 검토한 결과, amoxicillin과 carbadox, chlortetracycline, neomycin, oxytetracycline, sulfamethazine, sulfathiazole, tylosin 등 8종이 상대적으로 환경으로의 유출 가능성이 높아 금후 정밀한 평가가 요구되었다. 비록 항생제의 가축분뇨로의 배출율과 토양내 동태에 대한 정보가 제한적일지라도, 본 연구에서는 한국에서 쓰이고 있는 축산용 항생제의 사용량과 알려진 항생제의 배출율과 토양 흡착 정도를 바탕으로 환경으로의 유출 가능성이 큰 항생제를 결정하였다.
Pharmaceuticals and personal care products (PPCPs) are emerging contaminants in the aquatic environment. Many pharmaceuticals are not completely removed during wastewater treatment, leading to their presence in wastewater treatment effluents, rivers, lakes, and ground water. Here, we developed analytical methods for monitoring ten pharmaceuticals from surface water by LC/ESI-MS/MS. For sample clean-up and extraction, MCX (mixed cation exchange) and HLB (hydrophilic-lipophilic balance) solid-phase extraction (SPE) cartridges were used. The limits of detection (LOD) in distilled water and the blank surface water were in the range of 0.006 - 0.65 and 1.66 - 45.05 pg/mL, respectively. The limits of quantitation (LOQ) for the distilled water and the blank surface water were in the range of 0.02 - 2.17 and 5.52 - 150.15 pg/mL, respectively. The absolute recoveries for fortified water samples were between 62.1% and 125.4%. Intra-day precision and accuracy for the blank surface water were 2.9% - 24.1% (R.S.D.) and -16.3% - 16.3% (bias), respectively. In surface wastewater near rivers, chlortetracycline and acetylsalicylic acid were detected frequently in the range of 0.017 - 5.404 and 0.029 - 0.269 ng/mL, respectively. Surface water near rivers had higher levels than surface water of domestic treatment plants.
A simple, rapid and simultaneous analytical method is described for the detection of Sulfonamide and Tetracycline residues, i.e., Sulfamerazine (SMR), Sulfamethazine (SMT), Sulfamonomethoxine (SMM), Sulfadimethoxine (SDM), Sulfaquinoxaline (SQN), Oxytetracycline (OXY), Tetracycline (TC), Chlortetracycline (CTC). Blank control and sulfonamide and tetracycline fortified fish muscle samples (0.5 f) were blended with octadecylsilyl (C18, 40 ${\mu}{\textrm}{m}$, 21% load, 60$\AA$) derivatized silica packing material (2 g). Blended fish samples were washed with hexane, then, benzene and dichloromethace were used for the elution of tetracycline and sulfonamide were analyzed by HPLC. Correlation coefficients of standard curves for individual sulfonamide and tetracycline isolated from fortified samples were linear (0.9993$\pm$0.0003~0.9997$\pm$0.0003, 0.9493$\pm$0.078~0.9753$\pm$0.036), respectively. The average percentage recoveries of sulfonamide and tetracycline ranged as 80.86~96.52% to 85.88~92.23%, and 30.01~37.12% to 65.89~73.40%, for the concentration range (0.1~1.0 ppm) examined, respectively. Limit of detection for sulfonamide was 0.0012 ppm for SMR in Paralichthys Olivacleus and 0.0020 ppm for SMR, 0.015 ppm for SMM in Cyprinus Carpio. The applicability of this procedure is demonstrated by separation and detection of incurred tetracycline and sulfonamide residues in fish muscle tissue.
Overuse of veterinary antibiotics threats public health and surrounding environment due to the occurrence of antibiotic resistant bacteria. The objective of this study was to evaluate the antibiotic's concentrations of tetracycline (TC), chlortetracycline (CTC), and oxytetracycline (OTC) in a tetracycline group (TCs), sulfamethazine (SMT), sulfamethoxazole (SMX), and sulfathiazole (STZ) in a sulfonamide group, lasalocid (LSL), monensin (MNS), and salinomycin (SLM) in a ionophore (IPs), and tylosin (TYL) in a macrolide (MLs) group from soil, water, and sediment samples adjacent to a cattle manure composting facility. For all samples of soil, water, and sediment, the highest concentrations were detected in TCs among the tested antibiotics because of its higher annual consumption in veterinary farms, Korea and its higher cohesiveness with divalent or trivalent cations in soil. Moreover, the concentrations of residual antibiotics in September were generally higher than in June because of heavier rainfall in June. We suggest that continual monitoring and developing guideline of antibiotics are needed to control residual antibiotics in the environment.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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