Objectives : From this study, we sight to identify chondro-protective and anti-inflammatory effects of Sorbi Commixtae Fructus extract and its compound, chlorogenic acid. Methods : Sorbi Commixtae Fructus were extracted by 50% ethanol. And chlorogenic acid in Sorbi Commixtae Fructus 50% extract was quantified by high performance liquid chromatography (HPLC). To investigate chondro-protective effects, we treated Sorbi Commixtae Fructus 50% ethanol extract and chlorogenic acid in TNF𝛼-activated ATDC5 murine chondrogenic cells. After 24 hours, protein level of matrix metalloproteinase-3 (MMP3) and mRNA level of matrix metalloproteinase-13 (MMP13) were measured by using ELISA or reverse transcription PCR, respectively. To examine anti-inflammatory effects, we treated Sorbi Commixtae Fructus 50% ethanol extract and chlorogenic acid in LPS-induced RAW 264.7 murine macrophages. We measured the level of inflammatory mediators, such as Prostaglandin E2 (PGE2), Interleukin-6 (IL6) by ELISA and nitric oxide (NO) by Griess reagent assay. Results : A concentration of chlorogenic acid in Sorbi Commixtae Fructus 50% ethanol extract was 3.9 mg/g. Sorbi Commixtae Fructus 50% ethanol extract and chlorogenic acid attenuated protein level of MMP3 and mRNA level of MMP13 in TNF𝛼-activated ATDC5 cells. Sorbi commixtae Fructus 50% ethanol extract inhibited the level of PGE2, IL6 and NO in LPS-activated RAW 264.7 cells in dose dependent manner, but chlorogenic acid has no anti-inflammatory effects. Conclusions : These findings demonstrated that Sorbi Commixtae Fructus 50% ethanol extract has chondro-protective and anti-inflammatory effects showing possible therapeutics to ease the symptoms related with osteoarthritis.
The scavenging effects of two hyaroxycinnamic acids such as caffeic acid and chlorogenic acid on paraquat induced pulmonary toxicity were investigated. The results are summerized as follows: 1. In the 5-lipoxygenase assay, caffeic acid and chlorogenic acid inhibited the enzyme activities whose inhibition concentration (IC$\_$50/) were 4.1 and 9.6 ${\mu}$M respectively. 2. To evaluate the antiinflammatory effects on mediator related to the mechanism of inflammation, ADP-induced platelet aggregation assay and histamine degranulation assay were used. Caffeic acid and chlorogenic acid inhibited on ADP-induced platelet aggregation and histamine release at a concentration dependent manners. 3. Arachidonic acid-induced ear edema were inhibited by administration of caffeic acid and chlorogenic acid. 4. Cytologicad analysis of branchoalveolar lavage fluid (BALF) which was the useful tool for detection of an inflammatory response in the lungs of animals intoxicated with chemicals were used. Alveolar macrophages and neutrophils in BALF, as well as the protein content and the LDH activity in BALF supernatant increased by intoxication of paraquat, but decreased by administration of caffeic acid and chlorogenic acid. Therefore, two hydroxyeinnamic acids tested were the useful candidates for scavenger and antiinflammatory agents on paraquat induced pulmonary toxicity.
가시오갈피나무의 약효성분에 대한 기초자료를 제공하고자 자생지 및 재배지간, 산지별, 직경별, 부위별 eleutheroside E 및 chlorogenic acid는 함량을 HPLC로 분석하였다. Eleutheroside E 및 chlorogenic acid의 함량을 분석한 결과 자생지와 재배지간에 함량차이가 나타났다. 뿌리의 chlorogenic acid 함량은 덕유산(0.863%), 대암산(0.667%) 및 치악산(0.630%)의 재배지에서 채취한 시료에서 가장 높았고, eleutheroside E의 함량은 오대산(0.086%) 및 응봉산(0.074%) 자생지에서 채취한 시료에서 가장 높았다. 줄기에서의 두 성분 함량은 모두 재배종 보다 자생종에서 높았으며, chlorogenic acid 함량은 오대산(0.882%)과 연엽산(0.664%), eleutheroside E 성분은 계방산(0.141%) 및 가마봉(0.125%) 산지에서 가장 높았다. 잎에서 eleutheroside E 맞 chlorogenic acid 함량은 산지간에 차이를 보였으며, 뿌리나 줄기의 함량에 비하여 낮았다. 뿌리와 줄기의 직경에 따른 eleutheroside E함량은 직경 크기가 클수록 함량이 높았다.
본 연구진은 배박 추출물이 지방세포 대사를 저해함을 확인 하였으며, 배박을 건강기능식품 개별 인정형 소재로 개발하고자 하였다. 소재 개발에 앞서 배박 분석방법을 확립하고자 하였으며, 본 연구에서는 배박에서 확인된 성분인 caffeic acid 및 chlorogenic acid를 HPLC/UV system을 이용해 분석방법을 최적화하였다. 분석법이 타당한지를 검토하기 위하여 분석법 벨리데이션을 수행하였으며, 직선성, 일간 일내 정확성, 정밀성 검출한계 및 검량한계를 확인하였다. 본 시험분석법으로 배박 추출물 분석 시 지표물질이 다른 물질의 간섭 없이 안정되게 분석되는 것을 확인하였다. 따라서 본 분석방법은 배박 추출물 기능성 원료 표준화를 위한 시험법으로 적합한 것으로 판단되었다. 본 시험법에 따라 에탄올 투입량에 따른 배박 추출물 내의 caffeic acid 및 chlorogenic acid의 함량을 분석하였으며, 에탄올 투입에 따른 대상 성분의 추출율을 조절할 수 있음을 보여주었다. 따라서 본 연구를 통하여 확립된 분석법이 배박 추출물 개별 인정형 건강기능식품 기능성 원료 개발을 위한 기초 자료로 활용될 것으로 사료된다.
Objective : Lonicera japonica contains anti complementary polysaccharides and polyphenolic compound. Among these polyphenolic substances, chlorogenic acid is the major active component of this plant. However, the immunological mechanisms for these activities, have not been elucidated, nor the active components. To clarify immunomodulatory effects of those we examined the relationship between the activity of CD8+ T cell-mediated lysis and the frequency of cytokine profiles in spleen, thymus (especially IFN-${\gamma}$, IL-4, GM-CSF etc.) expressing CD8+ T cells activated by IL-2. Methods : To study immunomodulatory effects ethyl acetate fraction from Lonicera japonica, chlorogenic acid on cytokine gene expression from spleen, thymus cells, RT-PCR was performed after quantitative normalization for each gene by a densitometry using ${\beta}$-actin gene expression. A modified standard $^{51}Cr$-release assay was used to measure cytotoxic activities of cytotoxic T cells. Spleen, thymus cells from NOD mice were stained with CD3, CD4, CD44, CD69 in staining buffer and analyzed by two color flow cytometry. Results : We showed that ethyl acetate fraction from Lonicera japonica in combination with IL-2 resulted in a significant enhancement of PCR products for IFN-${\gamma}$, IL-4, IL-10, GM-CSF, IL-6 and cytotoxtic CD8+ T cell proportion in spleen and thymus T cells in NOD mice. This suggests that IFN-${\gamma}$, IL-6 like IL-4 may be acting as a regulatory rather than proinflammatory cytokine. Conclusions : In conclusion, based on the results of the present study which showed that ethyl acetate fraction from Lonicera japonica and chlorogenic acid upregulating cytokine gene expression in spleen and thymus, we are tempted to speculate that some of the therapeutic efficacies such as anti-diabetic activity of Lonicera japonica are due to the immunomodulatory its ethylacetate fraction and chlorogenic acid.
콜레스테롤을 0.5% 수준으로 첨가하여 고콜레스테롤혈증을 유발시킨 상태에서 0.2% 클로로겐산을 병합 투여한 식이를 흰쥐에게 2주간 자유 급여시켜 혈청과 간장의 지질농도, 혈당치 및 뇨 단백질량에 미치는 영향을 검토하였다. 동물 실험군은 콜레스테롤과 클로로겐산을 무첨가한 정상 식이군, 콜레스테롤을 0.5% 수준으로 첨가한 콜레스테롤 식이군 및 콜레스테롤 식이군에 클로로겐산을 0.2% 수준으로 첨가한 클로로겐산 병합투여군으로 나누었다. 정상 식이군에 비해 콜레스레롤 식이군에서 혈청 총 콜레스테롤 농도의 유의적 증가는 클로로겐산 병합투여군에서 유의적으로 감소되었으며, 동시에 동맥경화 지수도 감소되었다. 간장의 지질 농도는 각 식이군에 의한 유의적인 차이는 없었다. 혈당치는 정상 식이군에 비해 콜레스테롤 식이군 및 클로로겐산 병합투여군에서 증가되었다. 뇨 단백질양은 정상 식이군과 콜레스테롤 식이군 간에는 유의적인 차이가 없었으나, 클로로겐산 병합 투여군에서는 유의적으로 증가하였다 이상의 결과로부터, 클로로겐산은 콜레스테롤 식이에 의한 고콜레스테롤혈증을 개선시키고 동맥경화 지수도 감소시켰다.
본 연구에서 사용한 coffee에 다량 함유된 caffeic acid와 chlorogenic acid, 녹차에 함유된 EGCG 성분은 암세포의 증식을 억제하는데 중요한 기능을 담당하는 세포주기 조절인자인 p16 유전자의 DNA methylation 패턴을 유방암 T-47D 세포에서 유의하게 변화시켰다. MSP를 이용하여 p16 유전자의 promoter 지역에서의 methylation상태의 변화를 살펴본 결과 caffeic acid, chlorogenic acid, EGCG는 유전자의 hypermethylation을 감소시켰으며, 이로 인해 demethylation된 p16 유전자가 증가하는 경향을 보였다. 이러한 연구 결과는 coffee 폴리페놀인 caffeic acid, chlorogenic acid와 녹차 폴리페놀인 EGCG는 세포내의 DNA methylation을 억제하는 기능을 가지는데, 이는 coffee폴리페놀과 같이 COMT 효소에 의한 methylation 부산물인 SAH의 증가에 의한 DNMT의 억제이거나, EGCG와 같이 DNMT와 직접적으로 결합하여 methylation 반응을 억제하는 mechanism에 의한 것으로 사료된다. 따라서 앞으로 이미 개발된 항암제뿐만 아니라, 부작용과 독성이 적은 식이성분에 대한 연구가 좀 더 심도 있게 이루어 져야 할 것이며, 이러한 연구들은 암이 발생되고 난 후 치료 요법으로 사용됨은 물론, 암이 발생하기 전에 사전 예방법으로도 널리 적용하는데 있어 중요한 이론적 토대를 마련할 것으로 사료된다.
In Peucedanum japonicum and Aster tataricus L. chlorogenic acid was identified by methods of P.P.C. and T.L.C. $L-Phenylalanine-U-^{14}C\;and\;sodium\;acetate-2-^{14}C$ were administered to Peucedanum japonicum, $L-Tyrosine-U-^{14}C$ to Aster tataricus and $caffeic\;acid-carboxyl-^{14}C\;and\;L-tyrosine-U-^{14}C$ to Fagopyrum esculentum $M_{OENCH}$. The incorporation of each compound into chlorogenic acid was compared. $L-Phenylalanine-U-^{14}C$ showed higher incorporation to chlorogenic acid than sodium $acetate-2-^{14}C$ in Peucedanum japonicum. $Caffeic{\;}acid-carboxyl-^{14}C$ was higher to chlorogenic acid than $L-tyrosine-U-^{14}C$ in Fagopyrum esculentum. $L-Tyrosine-U-^{14}C$ was comparatively low in Aster tataricus.
This study was carried out to analyze the organic acids, polyphenols, pigments and fiber materials concentration with a different stalk position and grade of korean leaf tobaccos. Eight kinds of flue-cured leaf tobaccos which were different stalk position and grade were used for this study. Three kinds of major organic acids(citric, malic and oxalic), 2 kinds of polyphenols(chlorogenic acid and rutin), 3 kinds of pigments($\beta$-carotene, chlorophyll-a and chlorophyll-b), and 2 kinds of fiber components(pectin and lignin) were analyzed. All of these chemical components were changed with a different stalk position. When the citric acid, malic acid, $\beta-carotene$, chlorophyll-a, and lignin concentration were low in the middle stalk position and high in both bottom and upper position, oxalic acid and chlorogenic acid show the highest concentration in the middle stalk position. All of these chemical components also changed with a different grade of leaf tobaccos. As the citric acid, malic acid, $\beta-carotene$, chlorophyll-b, and lignin concentration decreased as the grade ascended, the oxalic acid and chlorogenic acid concentration increased as the grade ascended. This results assumed that the quality of korean leaf tobacco was directly proportional to oxalic acid and chlorogenic acid concentration but it was inversely proportional to citric acid, malic acid, $\beta-carotene$, chlorophyll-b and lignin concentration.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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