대표적인 치주질환인 치주염은 출혈, 통증 및 치아 손실을 초래하며, 산화적 스트레스는 치주염의 주요 원인으로 알려져 있다. 본 연구는 지방조직 유래 무막줄기세포추출물의 $H_2O_2$ 유도 산화적 손상에 대한 치주염 보호 효과를 확인하고자, 치주인대 섬유모세포(human periodontal ligament fibroblasts; HPLF)를 이용하여 세포 생존율, 염증 및 세포 사멸 관련 단백질 발현을 측정하였다. $H_2O_2$로 산화적 스트레스를 유도한 HPLF 세포에 무막줄기세포추출물 처리 시, $H_2O_2$만을 처리한 control군에 비해 유의적으로 세포 생존율이 증가함을 통해 산화적 손상에 대한 세포 보호 효과를 확인하였다. 또한, 무막줄기세포추출물은 nuclear factor kappa light chain enhancer of activated B cells, inducible nitric oxide synthase 및 interleukin-6와 같은 염증 관련 단백질 발현을 감소시켜 $H_2O_2$로 유도된 염증반응 보호 효과를 확인할 수 있었다. 뿐만 아니라, 무막줄기세포추출물 처리 군은 caspase-9, -3, poly (ADP-ribose) polymerase 단백질 발현 감소와 B-cell lymphoma 2 (Bcl-2)-associated X protein/Bcl-2 비율을 저하시켜 $H_2O_2$ 유도 산화적 손상에 대한 세포사멸 보호 효과를 보였다. 따라서 지방조직 유래 무막줄기세포추출물은 $H_2O_2$ 유도 산화적 손상에 대한 HPLF 세포의 염증반응 및 세포사멸을 저해함으로써 치주염으로부터 보호 효과가 있어, 치주질환 치료용 소재로써의 활용 가능성이 있을 것으로 기대된다.
여러 가지 생리랴 활성기능을 가지고 있다고 알려진 유산균에 대해 활성산소 소거효과 및 면역 증강 효과 를 검토하여 보았다. 유산균 배양액 및 파쇄액의 활성산소 소거효과를 각각 다른 검색방법에 의해 살펴 본 결과, 유산균 배 양액 및 Mn-complex는 XOD assay와 paraquat에 대한 반응에서 활성 산소 소거 효과가 뛰어나 superoxide anion radical 소거와 관련이 있는 것으로 나타났고, 배양액 중에서 $Mn^{2+}$와 결합하는 성분은 누로 peptide나 amino acid인 것으로 추정된다. 한편 cell free extract는 광용혈 시험에서 좋은 효과를 나타내어 singlet oxygen 소거와 관련이 있는 것으로 생각되며, 또한 cell free extract 는 T세포를 자극하여 생성된 액성인자에 의해 B세포에 항체 생성능을 증가시키는 것으로 나타났다.
Objectives : This study was designed to investigate the effect on lipoapoptosis of Alisma orientale extract against free fatty acid-induced cellular injury. Methods : HepG2 cells were used in an vitro model. HepG2 cells were treated with free fatty acids to generate a cellular model of nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). Using this cellular model, the anti-apoptotic effect and reducing steatosis of Alisma orientale extract against free fatty acid-induced cellular injury was evaluated by measuring steatosis and apoptosis. Results : Alisma orientale extract significantly attenuated free fatty acid-induced intracellular steatosis. Alisma orientale extract inhibited free fatty acid-mediated activation of pJNK, PUMA, BAX, caspase-3, and -9, and apoptotic kinases that are correlated with NAFLD. Alisma orientale extract also promoted Bcl-2, a anti-apoptotic protein. Conclusions : From the above, the Alisma orientale extract decreased the hepatocyte steatosis and showed the hepatocelluar protective effect by the regulation of apoptosis-related protein. It proposes the possibility of Alisma orientale extract to the treatment of nonalcoholic fatty liver disease in clinics.
Objectives : This experiment was designed to investigate the effect of the BSGE hot water extract on serotonin biosynthesis of depression model. Methods : The cytotoxicity of the BSGE hot water extract was analyzed by MTT assay on P815 cell. The antioxidant activity was measured by DPPH free radical-scavenging activity and SOD activity on P815 cell. The quantity of 5-HT and expression of TPH-1, AAADC and MAOa mRNA was measured by of HPLC profle Analysis on P815 cell. Results : 1. The BSGE hot water extract increased DPPH free radical-scavenging activity and SOD activity on P815 cell. 2. The BSGE hot water extract increased significantly the quantity of 5-HT. 3. The BSGE hot water extract increased the expression of TPH-1 mRNA. Conclusions : This experiment shows that the BSGE hot water extract might be effective for the prevention and treatment of depression. Investigation into the clinical use of the BSGE hot water extract for depression is suggested for future research.
The protective effect of Acanthopanax senticosus (AS) extract on alloxan-induced pancreatic β-cell damage was investigated in HIT T-15 cells, a Syrian hamster pancreatic β-cell line. Alloxan caused the pancreatic β-cell damage through the generation of reactive oxygen free radicals, increased DNA fragmentation, and decreased cellular NAD/sup +/ levels. The β-cell damage was significantly prevented by the pretreatment with water soluble extract of AS roots. These results suggest that the protective effect of AS extract, on alloxan-induced β-cell damage, is primarily due to the inhibition of the generation of reactive oxygen free radical species (ROS) by alloxan.
Using cell-free extract of Lysobacter lactamgenus, enzymatic conversion of $\delta$-L-($\alpha$-aminoadiphyl)-L-cysteinyl-D-valine (ACV) the first substrate of $\beta$-lactam biosynthesis, into antibiotic compounds was attempted. In high performance liquid chromatographic (HPLC) analysis, the biosynthetic intermediates for cephalosporin antibiotics including isopenicillin N, deacetoxycephalosporin C, deacetylcephalosporin C and unknown cephem compound were detected in reaction mixtures. It implies that cephabacin compounds from L lactamgenus could be produced by biosynthetic routes through penicillin ring formation and its expansion to cephalosporin ring, likely as cephalosporin C from Cephalosporium or cephamycin C from Streptomyces. Among biosynthetic enzyme in cell-free extract, the ring formation activity (isopenicillin N synthetase activity) was separated in 50-60% of ammonium sulfate fraction, and ring expansion activity (deacetoxycephalosporin C synthetase activity) was found to be in 40-50% fraction. The partially purified isopenicillin N synthetase could convert as much as 90% ACV to isopenicillin N during 6-hour reaction.
In a microbial cell-free extract system, side chain cleavage on various sterols and steroids was tested. The cell-free extracts of Mycobacterium sp. NRRL B-3805 showed the side chain cleavage activity on lithocholic acid to form 5$\beta$-androstan-3.17-dione. The properties of the activity were examined.
By spectrophotometric assay method, the following enzymes could be detected in Dunaliella tertiolecta and Chlorella pyrenoidosa cell-free extracts: Hexokinase; Glucose-6-phosphate, 6-Phosphogluconate and Triosephosphate dehydrogenase; Transketolase; Phosphogluco and Ribosephosphate isomerase; Phosphoglucomutase; Phosphofructokinase; Fructosediphosphate aldorase and Ribulosephosphate 3-epimerase. Such enzymes are in accordance with the proposed pathway of glucose catabolism by D. tertiolecta as well as C. pyrenoidosa. Also, it could be estimated, under the presence of NADP, that pentose phosphate pathway were more active than glycolytic pathway in D. tertiolecta cell-free systems.
무세포 단백질 합성 시스템은 세포를 파쇄한 후 파쇄액 내의 단백질 합성기구들을 이용하여 단백질을 발현하는 시스템으로 기존의 세포 기반 재조합 단백질 발현 기법들과 달리 세포의 생장조건에 영향을 받지 않으면서 발현 조절에 관한 다양한 인자들을 인위적으로 조절 할 수 있는 장점이 있다. 그러나, 단백질 합성 과정 중 소모되는 ATP의 연속적 재생을 위해 사용되는 에너지원의 높은 비용과 낮은 안정성은 재조합 단백질 대량생산에의 적용을 제약하는 요인으로 작용하여 왔다. 이러한 문제를 해결하기 위한 대안들 중의 하나로 포도당을 에너지원으로 사용하여 세포 파쇄액내 대사과정을 통해 ATP를 재생하는 방법이 있다. 본 연구에서는 포도당을 에너지원으로 이용한 무세포 합성 시스템에서의 단백질 합성 효율 향상을 위하여 대장균 파쇄액으로부터 회수된 지질을 추가적으로 첨가함으로써 산화적 인산화 과정에서의 ATP재생을 증진시키고자 하였다. 그 결과, 지질이 추가된 무세포 단백질 합성 시스템은 지질이 추가되지 않은 대조군에 비하여 6배 이상 향상된 단백질 생산성을 나타내었다.
The amino acid threonine was produced from glycine and ethanol in a reaction mixture using cell free extract of the methylotrophic bacterium isolated from soil and identified as mellthylo-bacterium sp. KJ29. Although the isolate could grow on carbon source other than methanol, only the cell free extract from the cells grown on methanol produced threonine. Methanol dehydrogenase (MDH) activity was present only in the cells grown on methanol when compared to the cells grown on heterotrophic substrates.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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