Nine strains of Yersinia species isolated from pigs and dogs in Korea, comprising 5 strains of Yersinia enterocolitica, 2 strains of Y kristensenii and each strain of Y pseudotuberculosis and Y intermedia, were examined for the presence of virulence-associated plasmids, calcium dependency and provocation of guinea pig conjuntivitis($Ser{\acute{e}}ny$ test). Three strains of Y enterocolitica isolated from pigs were positive in calcium dependency and harbored one plasmid of about 45 megadalton, but negative in $Ser{\acute{e}}ny$ test.
세포내 칼슘은 다양한 세포에서 중요한 생리적 반응을 일으키며, ruthenium red와 ryanodine은 중요한 칼슘 조절자로 작용한다. Ruthenium red는 세포내 칼슘 저장고에서의 calcium induced calcium release(CICR)를 저해한다. Ryanodine은 ryanodine 통로를 통한 칼슘 방출을 촉진한다. 본 실험은 두 조절자가 생쥐 난자와 초기배아의 세포내 칼슘이온 농도에 영향을 미치는지 여부와 그 유효농도를 알아보고자 수행하였다 난자 및 초기배아내 칼슘이온 함량 변화는 Fluo-3/AM을 이용하여 공초점 레이저주사 현미경을 사용하여 실시간으로 측정하였다. Ruthenium red는 고농도(30$\mu$M, 300$\mu$M)에서 난자와 초기배아의 세포내 칼슘이온 농도를 저하시켰고, ryandoine은 저농도(0.01$\mu$M)에서 세포내 칼슘이온 농도를 증가시켰지만 고농도(10$\mu$M)에서는 세포내 칼슘이온 농도를 감소시켰다. 본 실험결과를 보면, ruthenium red와 ryanodine은 생쥐의 난자 및 초기배아에서도 세포내 칼슘이온 농도에 영향을 미쳤고, 그 유효농도는 근세포를 포함한 체세포와는 차이가 있었다.
한국에서 분리한 Yersinia enterocolitica의 병원성 여부를 조사하기 위하여 지가응집 시험, 칼슘 의존성 시험, HeLa 세포 침투시험, Sereny 시험, Crystal violet 결합시험과 plasmid의 전기영동을 실시하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 병원성 Y. enterocolitica는 자가응집, 칼슘 의존성, crystal violet 결합시험에서 양성반을을, 비병원성 균주는 음성반응을 각각 나타내었다. 그러나 양성반응은 $37^{\circ}C$에서만 나타나 병원성의 발현이 온도에 의존됨을 알 수 있었다. Sereny 시험에서 혈청형 0:8인 표준균주만이 양성반응을 보인 반면에 혈청형 0:3, 0:9인 실험균주들은 대부분 음성반응을 나타내어 Y. enterocolitica의 병원성은 혈청형에 따라 실험동물에서 다르게 발현됨을 알 수가 있었다. HeLa 세포 침투시험에서 실험균주 모두가 양성반응을 보여 병원성 균주를 구분하기에는 부적합하였다. 대부분의 병원성 균주는 36-38Mdal의 plasmid를 가지고 있었으나 비병원성 균주는 없었으며, plasmid가 자가응집 및 칼슘 의존성, crystal violet 결합에 관여함을 알 수가 있었다.
In the present study, we examined the changes of uptake and efflux of taurine under various conditions inducing oxidative stress using rat conditionally immortalized syncytiotrophoblast cell line, TR-TBT cell, as blood-placental barrier in vitro model. In addition, we identified the characteristics of taurine transport in TR-TBT cells including general features, besides effect of calcium ion on taurine transport. Taurine uptake showed time, $Na^+$ and $Cl^-$ dependency, and was decreased by PKC activator in TR-TBT cells. Also, calcium free condition decreased taurine uptake and evoked taurine efflux in the cells. Oxidative stress induced the change of taurine transport in TR-TBT cells, but the changes were different depending on the types of stimulation inducing oxidative stress. The taurine uptake was increased by TNF-$\alpha$, LPS and DEM stimulation but decreased by $H_2O_2$ and NO stimulation. Also, the taurine efflux was regulated by TNF-$\alpha$ stimulation. In conclusion, the taurine transport through the blood-placental barrier was regulated in oxidative stress conditions, and these results demonstrated that oxidative stress affected the taurine supplies to fetus and taurine level of fetus.
Barley ${\alpha}$-amylase genes, amy1 and amy2, were separately cloned into the expression vector of $pPICZ{\alpha}A$ and recombinant Pichia strains were established by homologous recombination. Both AMYs from Pichia shared almost identical hydrolysis patterns on short maltooligosaccharides to result in glucose, maltose, or maltotriose. Against insoluble blue starch, AMY1 showed the highest activity at 0.1-5 mM calcium concentration, whereas 15-20 mM was optimal for AMY2. On the hydrolysis of soluble starch, unexpectedly, there was no significant difference between AMYs with increase of calcium. However, the relative activity on various starch substrates was significantly different between AMYs, which supports that the isozymes are clearly distinguished from each other on the basis of their unique preferences for substrates.
The aim of this study was to assess the nutrient intakes from infant formula and supplemental foods of 246 healthy infants fed infant formula, aged from 5 to 18 months. Subjects were devided into two groups depending on supplemental food type for weaning, Domestic supplemental foods (mainly home-made, n = 129) and Delivery supplemental foods (mainly commercially-delivered, n = 117). Four subgroups were assigned to 5-6 months, 7-8 months, 9-11 months, and 12-18 months by ages, respectively. Dietary assessment was carried out using 24-hour-recall method. Formula intakes in the delivery group tended to decrease accordingly with the ages. However, in the domestic group, formula intakes up to 8 months were similar and decreased after 9 month. Energy, protein, calcium and iron intakes from infant formula and supplemental foods were assessed. Energy intake at 12-18 months were lower than the RDA in both groups. Daily intake of protein and calcium at all ages were much higher than the RDA in both groups. Therefore, protein and calcium overnutrition were elucidated. Especially, protein intake at 5-6 months, calcium intake at all ages from infant formula was higher than the RDA in both groups. Iron intake at 5-6 months from infant formula were higher than the RDA. Consequently, as for infant formula, it was suggested that not only formula intakes but also nutrient content in formula should be reconsidered. On the other hand, nutrient intakes from supplemental foods in the domestic group tended to be higher than that of the delivery group. Especially at 9-11 months, significant differences between the two groups were observed. This may be due to high dependency on commercial powdered baby food in the domestic group. This study revealed that daily nutrient intakes of formula-fed infants are desirable but nutrient intakes from infant formula are too high. Conclusively, this study suggests that as the age of infants increases, formula intakes should be controlled and various supplemental foods besides commercially powdered baby food should be appropriately provided.
Plants have been shown to contains $Ca^{2+}$/calmodulin-stimulated GAD and NAD kinase. To test how calmodulin and calmodulin methylation affect the activation of GAD and NAD kinase, GAD and NAD kinase were partially purified from tobacco plants. GAD was also partially purified from E. coli transformed with a plasmid carrying a cloned tobacco GAD gene. We find that GAD from the transformed E. coli showed 60-fold $Ca^{2+}$/calmodulin-dependent activation. However, GAD from tobacco plants was stimulated only about 3.8-fold by the addition of calmodulin in the presence of calcium, suggesting high background activity of the enzyme was possibly due to bound endogenous tobacco calmodulin. There were no significant differences in the tobacco GAD activator properties between calmodulins. A monoclonal antibody against petunia GAD interacted strongly with both GAD from tobacco plants and GAD from cloned gene. NAD kinase from tobacco plants showed a complete $Ca^{2+}$/calmodulin dependency for activity. Unmethylated calmodulins activated GAD in a manner similar to methylated calmodulin. However, the maximum level of NAD kinase activation obtained with unmethylated calmodulins is approximately 4-fold higher than methylated calmodutins. These data suggested that endogenous tobacco calmodulin may interact more tightly with GAD than NAD kinase and that calmodulin methylation affects the activator properties of calmodulins for tobacco NAD kinase but not for GAD.
한국분말야금학회 2006년도 Extended Abstracts of 2006 POWDER METALLURGY World Congress Part2
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pp.1082-1083
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2006
Carbon nanotube (CNT) reinforced hydroxyapatite (HAp) composites were fabricated by using the spark plasma sintering process with surfactant modified CNT and HAp nano powder. Without the dependency on sintering temperature, the main crystal phase existed with the HAp phase although a few contents of ${\beta}-TCP$ (Tri calcium phosphate) phase were detected. The maximum fracture toughness, $(1.27\;MPa.m^{1/2})$ was obtained in the sample sintered at $1100^{\circ}C$ and on the fracture surface a typical intergranular fracture mode, as well as the pull-out pmhenomenon of CNT, was observed.
보리 맥아로부터 발견된 서로 다른 알파아밀라제 동질효소(AMY1, AMY2)는 80%에 달하는 높은 아미노산 서열의 상동성을 보이지만, 두 효소의 특성은 서로 달라 AMY1 효소는 낮은 농도의 칼슘 조건에서 최대 활성을 보이는 반면, AMY2 효소는 높은 칼슘이온 농도에서 높은 활성을 나타낸다. 또한 BASI (Barley ${\alpha}$-Amylase/Subtilisin Inhibitor) 단백질은 AMY2 효소만을 특이적으로 저해한다. 따라서 본 연구에서는 AMY1과 AMY2 효소의 유전자를 I, II, III의 세 부위로 나눈 후, 제한효소 처리에 의해 일부 부위를 상호 치환한 4종의 chimera 효소를 추가로 제조하고, Pichia pastoris 균주에서 대량 발현하였다. 이들 효소의 특성을 비교한 결과, 제 I 부위만이 상호치환된 AMY211 및 AMY122 효소의 경우, AMY1과 AMY2의 중간적 칼슘 의존성을 나타내었으며, BASI에 의한 저해효과는 AMY2의 제 I, II 부위를 포함하는 AMY221 효소에서만 관찰되었다. 따라서 보리 아밀라제의 제 I 부위 및 제 II 부위에 존재하는 아미노산 잔기들이 칼슘 의존성 및 BASI와의 결합에 중요한 역할을 담당하는 반면 제 III 부위는 이들 효소의 활성 차이에 영향을 미치지 않음을 확인하였다.
Two hundred and eighty nine strains of Yersinia enterocolitica isolated from healthy pigs were tested for the presence of 40~50 Megadalton virulence-associated plasmids and plasmidmediated in vitro virulence-associated properties, i.e., congo red uptake, calcium dependency, autoagglutination, CRMOX reaction, crystal violet binding and pyrazinamidase reaction. The correlationships between in vitro virulence-associated properties and the presence of 220 Kdalton outer membrane protein(OMP) were examined in strains with or without virulence-associated plasmids. The correlationships between the presence of plasmids on the production of the OMP and the expression of in vitro virulence-associated properties were studied with $CRMOX^+$ strains and acridine orangecured $CRMOX^-$ mutants. The results were as follows : 1. Of the in vitro virulence-associated tests with 289 strains of Y enterocolitica, 275 strains (95.2%) were positive for pyrazinamidase test, and followed by in order of crystal violet binding test, 226 (79.2% ) ; CRMOX test, 190 (65.7%) ; autoagglutination test, 1.85(64.0%) : calcium dependency test, 86 (29.8%) and congo red uptake test, 47(16.3%). 2. The correlationship between autoagglutination and CRMOX test(r=0.90) was highly significant (p<0.01). 3. In 190 strains(65.7%) bearing the virulence-associated plasmids(MW 40~50 Mdalton), the correlation between the presence of plasmids and their in vitro virulence-associated properties were highest with CRMOX test(r=0.93) and followed by in orders of AAG test(0.81), CV test(0.46), PYZ test(0.37) and CD test(0.18), but no correlationship between the presence of plasmids and CR test(-0.11). 4. The $CRMOX^+$ strains produced the 220 Kdalton OMP when they were cultured at $37^{\circ}C$, but not at $26^{\circ}C$. The presence of 220 Kdalton OMP was correlated significantly with in vitro virulence properties and the presence of virulence-associated plasmid, respectively. 5. In the isogenic $CRMOX^-$ mutant strains, of which plasmid were cured by treatment with acridine orange not only in vitro virulence-associated properties(CR 100%, CD 100%, AAG 82.6%, CV 58.3%) disappeared but also 220 Kdalton OMP(100%) was not produced. These results indicate that the positive CRMOX reaction is plasmid-mediated and the CRMOX test is potential as an in vitro virulence tests with Y enterocolitica.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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