• 한국식품위생안전성학회지
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• 제32권1호
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• pp.75-81
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• 2017

본 연구에서는 고등어 어육을 고감도로 보다 신속하게 검출하기 위하여 고등어 어육 중 TSSP를 이용해 단클론성 항체를 개발하고 이를 이용하여 간접 효소면역분석법(iELISA)과 western blot의 검출한계를 확인하였다. 먼저 비 열처리와 열처리를 한 고등어 어육 중 존재하는 TSSP를 확인하고, 단백질 추출에 주로 사용되는 버퍼의 종류에 따른 추출법 효율을 확인하기 위하여 전기영동과 단백질 정량을 실시하였다. 그 결과 열처리한 추출물은 비 열처리한 추출물보다 TSSP가 2배 정도 많이 추출되었으며, TSSP로 추측되는 37 kDa 부근에 형성된 밴드의 선명함과 굵기를 육안으로 비교한 결과 carbonate buffer로 추출하였을 때 밴드가 가장 두드러지게 형성되었고, 단백질 정량 결과에서도 carbonate buffer를 이용한 추출물의 단백질 농도가 가장 높은 것을 확인하였다. 이후, 생 고등어 어육을 열처리법으로 추출하여 항원을 준비하고 6주령 BALB/c mouse에 면역한 후 세포융합 및 클로닝을 통해 3A5-1번, 2번, 9번 및 16번 4종의 hybridoma cell을 확보하였다. 이렇게 개발된 항체는 수산물, 축산물, 농산물과의 교차반응성확인을 통하여 고등어 단백질에만 특이성을 가지는 것을 확인하였다. iELISA와 western blot법의 검출한계를 확인한 결과 고등어가 1% 첨가된 수준까지 검출할 수 있으며, 특히 3A5-2와 3A5-9번 항체는 1%에서도 높은 흡광도를 나타내어 민감도가 매우 높은 항체로 확인되었다. 따라서, 개발된 고등어 TSSP 특이항체를 이용한 iELISA법과 western blot법은 가공품에 혼입될 수 있는 식품 알레르겐인 고등어를 보다 신속하고 민감하게 분석할 수 있는 분석 도구로서 활용이 가능할 것으로 판단되며, 개발된 항체는 고감도 바이오센서 개발에 충분히 활용이 가능한 바이오인자로 확인되었다.

• Restorative Dentistry and Endodontics
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• 제28권1호
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• pp.11-22
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• 2003

This study compared the dentin adhesion to composite resin according to air-dry, blot dry, application of rewetting agent on air-dry or blot dry dentin surface by microleakag test and SEM observation. For microleakage test, class V cavity preparations with dentinal margins were prepared on both buccal and lingual surfaces of 40 extracted human molars. For SEM observation, occlusal dentin of 20 extracted human molars were exposed. After etched the dentin, prepared teeth were randomly divided into four groups; D group: air dry for 10-15 sec., B group: blot dry with moist cotton pellet, D-R group: air dry and rewet with Aqua-Prep F for 20 sec., B-R group: blot dry and rewet with Aqua-Prep F for 20 sec. Treated cavities and surfaces were filled or constructed using One-Step adhesives and Aelitefil composite resins. Specimens were stored in distilled water for 24 hours. For microleakage test, the specimens were thermocycled and soaked into 2% methylene blue. The specimens were sectioned longitudinally and evaluated for microleakage under steromicroscope. The data were statistically analysed by Kuskal-Wallis Test, Mann-Whitney and Wilcoxon signed ranked tests. For SEM observation, the specimens were bisectioned mesiodiatally. After decalcified and deproteinized, specimens were observed under SEM. The results of this study were as follows; 1. The microleakges on dentinal margin were the highest in D group compared with B group, D-R group, and B-R group(p<0.05). But there was no significant difference between B group, D-R group and B-R group. 2. D group showed gap and a few resin tags between dentin and composite resin. 3 B group, D-R group, and B-R groups showed close adaptation between dentin and composite resin. It showed that resin rags in B group were numerous and long, in D-R group were few and short, in B-R group were numerous and short or long. 4. Adhesive layer showed in D-R group ($10{\;}\mu\textrm{m}$) and B-R group ($3{\;}\mu\textrm{m}$) In conclusion, use of rewetting agent to dry dentin was efficient to dentin adhesion, also it did not provide reverse effect on blot dry dentin.

• 한국수산과학회지
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• 제30권3호
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• pp.480-487
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• 1997

범가자미, Verasper variegatus의 vitellogenin (Vg)을 분리하기 위하여 수컷에 $etradiol-17\beta(E_2) $를 처리하여 Vg의 합성을 유도하여 SDS-PAGE와 western blot으로 확인 하였다. 분리된 Vg의 분자량은 175 kD 이었으며 암컷 특이단백질이었다. $E_2$ 처리한 수컷 혈청을 찬 증류수로 침전시킨후 Sepharose CL-6B column chromatography에 의해 Vg을 분리하였다. 분리한 Vg에 대한 항혈청을 만들어 특이성을 western blot으로 확인하였고, 또한 Vg를 대한 단클론항체를 만들기 위하여 분리한 Vg을 Balb/c에 면역시켜 비장세포와 NS1 myeloma 세포를 세포융합하여 hybridoma를 만들었다. 세포융합된 18개 clone중 효소면역측정법에 의해 Vg과 가장 반응성이 높은 clone을 4D6으로 명명하였고, 이에 대한 특이성을 $E_2$가 처리되지 않은 수컷 혈청, $E_2$가 처리된 수컷혈청과 분리한 Vg를 사용하여 western blot으로 확인하였다.

• 대한소아치과학회지
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• 제29권3호
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• pp.354-361
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• 2002

본 연구는 어린이의 치아우식증을 야기하는 주된 원인균인 Streptococcus mutans에 대한 타액내 Immunoglobulin A의 양을 좀 더 쉽고 빠르며 정확하게 분석하는 방법을 개발하는데 일차적 목적을 두었고 이 방법을 사용하여 우식 경험군과 비경험군 간의 타액내 IgA 역가에 차이가 있는지 관찰하였다. 본 연구에서 사용한 immune-slot blot method에서 항체 역가 측정의 기본 개념은 Streptococcus mutans의 단백질을 1/2씩 희석하여 nitrocellulose membrane에 결합시킨 후 1/100으로 희석된 타액에 의해 검출될 수 없는 최대의 단백질 희석배수를 구하는 것이다. 연구 결과 우식 경험군과 비경험군의 희석배수 평균치는 우식 비경험군이 $2^{6.278{\pm}2.260}$, 우식 경험군이 $2^{5.730{\pm}0.499}$로 IgA의 농도가 우식 비경험군에서 약간 높게 나타났다. 그러나 우식 비경험군의 경우 표준편차가 매우 높아 양 군간에 유의한 차이는 없었다.

• 생명과학회지
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• 제17권10호
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• pp.1321-1329
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• 2007

사슴뿔은 동물세계에서 가장 빨리 성장하는 조직이다. 따라서 성장중인 사슴뿔은 뼈 성장을 촉진하는 인자가 풍부하게 포함된 것으로 생각된다. 이들 성장인자들 중 IGF-1은 뼈를 자라게 하는 조골세포의 대사에 중요한 역할을 한다고 알려져 있어 이를 정제하고자 하였다. IGF-1의 정제는 상대라고 불리는 신선한 사슴뿔을 유안침전, DEAE-Sepharose CL-6B 이온교환수지, CM-Sepharose CL-6B 양이온교환수지, Sephadex G-50의 순차적인 방법으로 할 수 있었다. 각 과정마다 IGF-1의 거동을 HPLC, SDS-PAGE, Dot blot, 그리고 western blot으로 분석하였다. IGF-1의 정량은 ELISA기술로 재조합 인간 IGF-1을 이용하여 계산되었으며, 최종 분별 액은 두 개의 단백질을 보였으나, Western-blot에서 작은 분자량인 12 kDa으로 최종 판명할 수 있었다. 정제된 단백질은 HPLC에서 retention 시간 8분만에 검출되었으며, 총 농도는 2910 ng/ml 이고 중량은 0.291 g 이었다.

• 생명과학회지
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• 제12권1호
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• pp.96-105
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• 2002

식물 단백질의 영양가 향상을 위한 일환으로 필수아미노산의 조성이 풍부한 인공단백질을 암호화하는 인공유전자를 담배 식물체에서 발현을 시도하기 위하여, 식물에서 외래유전자의 발현에 널리 사용되는 Cauliflower mosaic virus (CaMV)의 35S promoter를 이중으로 중첩되도록 하고, (Lys-Glu-Trp)이 64번 반복되는 인공유전자 및 nopaline synthase (nos) terminator를 갖고있는 binary vector pART4-4를 구성하였다. 이 재조합 플라스미드는 Agrobacterium tumefaciens를 이용한 형질전환에 의해 Nicotiann tabacum (Var. Xanthi)으로 도입되었다. Kanamycin이 포함된 신초 유도 배지 및 뿌리 유도배지를 이용하여 정상적으로 재생된 담배 식물체로부터 도입된 인공유전자의 발현을 분석하였다. 추출한 genomic DNA를 EcoRI으로 자른 다음 Southern blot 분석에 의하면, 효소 절단 시 예상되는 1.1 kb에서 band를 형성하였으며 각각의 형질전환 식물체에 인공유전자가 1 또는 3 개씩 도입되어 있음을 확인하였다. Northern blot 분석에 의하면 약 1.2 kb 전사체가 비교적 안정하게 발현되었으며, 잎, 줄기, 뿌리로부터 RNA를 분리하여 promoter의 조직 특이성 발현을 분석한 결과, 잎에서 생성되는 RNA가 줄기나 뿌리 조직보다 안정하게 발현되었다. 형질전환 식물체에서 Western blot에 의한 단백질 분석 결과, 잎에서 추출한 단백질로부터 원하는 크기인 33 kDa의 인공단백질이 생성됨을 확인하였으며 발현 수준은 전체 세포 단백질의 0.1%로서 낮은 수준이었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제39권2호
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• pp.171-176
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• 2001

Western blot analysis was performed to diagnose vivax malaria using stage-specific recombinant antigens. Genomic DNA from the whole blood of a malaria patient was used as templates to amplify the coding regions for the antigenic domains of circumsporozoite protein (CSP-1), meroxoite surface protein (MSP-1), apical merozoite antigen (AMA- 1), serine repeat antigen (SERA), and exported antigen (EXP- 1) of Plasmodium vivax. Each amplified DNA fragment was inserted into a pGEX-4T plasmid to induce the expression of GST fusion protein in Escherichia coli by IPTG. The bacterial cell extracts were separated on 10% SDS-PAGE followed by western blot analysis with patient sera which was confirmed by blood smear examination. When applied with patient sera, 147 (91.9%) out of 160 vivax malaria, 12 (92.3%) out of 13 falciparum malaria, and all 9 vivax/falciparum mixed malaria reacted with at least one antigen, while no reactions occurred with 20 normal uninfected sera. In the case of vivax malaria, CSP-1 reacted with 128 (80.0%) sera, MSP-1 with 102 (63.8%), AMA-1 with 128 (80.0%), SERA with 115 (71.9%), and EXP-1 with 89 (55.6%), respectively. We obtained higher detection rates when using S antigens (91.9%) rather than using each antigen solely (55.6 - 80%), a combination of 2 (76.3 - 87.5%), 3 (85.6 - 90.6%), or 4 antigens (89.4 - 91.3%). This method can be applied to serological diagnosis, mass screening in endemic regions, or safety test in transfusion of prevalent vivax malaria.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제30권4호
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• pp.323-328
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• 1992

질트리코모나스의 항원 분석을 시행하기 위하여 병원성이 화인된 질트리코모나스(Trichamonas vaginnlis) 6개주(HY-1,2,3,9,10,13)의 항일을 sodium dodecyl sulfate - polyacrlyamide gel electrophoresis(SDS-PAGE) 한 결과 Coomassie brilliant blue 염색상에서 peptide의 밀도 차이를 제외하고는 주간에 동일한 단백질 분포양상을 보였으며, 12kDa에서 170kDa까지 약 35개 정도의 분획이 관찰되었다. 또한 질트리코모나스 HY월주를 항원으로 하고 질트리코모나스 6개주에 대해 면역된 마우스의 항혈청을 이용하여 enzyme-linked immunoelectrotransfer blot(EITB)을 시행한 결과 각 주마다 서로 다른 반응양상을 보였으며, 51kDa과 96kDa에서 질트리코모나스의 특이한 공통 반응대가 관찰되었고, 각기 다른 6개주의 항원에 대해 HY-1주의 항혈청으로 ETTB한 결과 HY-1 함원(homologous antigen)과의 반응 양상과 타항친(heterologous antigen)과의 반응 양상간의 특이한 차이는 관찰할 수 없었다. 이상의 결과로 보아 질트리코모나스 각 주의 항원은 항인-항체 반응에서 주간에 이종(antigenic heterogeneity)을 형성하고 있는 것으로 보였으며, 41, 47, 55, 74 및 94kDa에서 질트리코모나스애 특이한 공통반응대를 보었으며, 이 부분이 숙주-기생충의 상 호관계에 있어서 중요한 의의를 내포하고 있을 것으로 생각된다.

• 한국동물학회지
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• 제39권3호
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• pp.248-256
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• 1996

본 연구의 목적은 인간의 Poly(ADP-ribose) synthetase (PARS)의 cDNA를 클로닝하여 발현시키기 위해 수행하였다. 먼저, 인간의 PARS cDNA 전체를 포함한 pPARS3.1을 pGEM-7Zf(+) 등의 발현 벡터 클로닝하였다. 이 결과로 생성된 재조합 플라스미드 pPARS6.1이 인간의 PARS cDNA 전체를 포함하고, 올바른 방향으로 삽입되었는지를 확인하기 위해 제한효소 지도를 작성하였고, random primed DNA probe을 이용한 Southern blot 분석에 의해서 PARS가 클로닝되었다는 것을 확인하였다. 또한, 염기서열 분석 결과, 단백질 합성이 시작되는 유전 암호가 정확한 순서로 위치하고 있음을 확인하였다. 재조합된 pPARS6.1의 발현을 위해 배양시 0.4 mM IPTG로 처리하여 만들어진 인간의 PARS 단백질이 10% SDS-PAGE에서 120 kDa 위치에 이동하였다는 것을 nick-translated된 DNA를 probe로 이용하여 확인하였고, Southwestern blot 실험 결과 120 kDa과 98kDa에 위치하는 단백질이 DNA와 결합함을 알 수 있었다.

• BMB Reports
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• 제28권3호
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• pp.243-248
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• 1995

Cholesteryl ester transfer protein (CETP), a hydrophobic glycoprotein promoting transfer of cholesteryl esters (CE) from high-density lipoproteins (HDL) to lower-density lipoproteins in the plasma, has been recognized a potent atherogenic factor during the development of coronary artery diseases. This study demonstrated a possible utilization of antisense RNA to inhibit expression of the CETP gene using vaccinia virus as an expression system. The CETP cDNA was inserted into a transfer vector (pSC11) in sense and antisense orientations and used to generate recombinant viruses. Recombinants containing sense or antisense orientations of the CETP cDNA were isolated by $TK^-$ selection and X-gal test. The inserted CETP cDNAs in the recombinants were identified by Southern blot analysis and allowed to transcribe in host cells (CV-1). Expressions of the exogenous CETP mRNA, extracted from the CV-1 cells coinfected with viruses containing sense and antisense DNAs, were monitored by Northern blot analysis using the CETP cDNA probe, by Western blot analysis using monoclonal antibody against the C-terminal active region of the CETP and by the CETP assay. Decreased expressions of the exogenous CETP cDNA were clearly evident in the Northern and Western blot analyses as the dose of antisense expression increased. In the CETP assay, the CETP activities decreased compared to the activity obtained from the cell extracts infected with sense construct only.