Objective: This study aimed to assess the impact of a hydroethanolic extract of walnut green husks (WGH) on rumen fermentation and the diversity of bacteria, methanogenic archaea, and fungi in sheep fed a high-concentrate diet. Methods: Five healthy small-tailed Han ewes with permanent rumen fistula were selected and housed in individual pens. This study adopted a self-controlled and crossover design with a control period and an experimental period. During the control period, the animals were fed a basal diet (with a ratio of concentrate to roughage of 65:35), while during the treatment period, the animals were fed the basal diet supplemented with 0.5% hydroethanolic extract of WGH. Fermentation parameters, digestive enzyme activities, and microbial diversity in rumen fluid were analyzed. Results: Supplementation of hydroethanolic extract of WGH had no significant effect on feed intake, concentrations of total volatile fatty acids, isovalerate, ammonia nitrogen, and microbial protein (p>0.05). However, the ruminal pH, concentrations of acetate, butyrate and isobutyrate, the ratio of acetate to propionate, protozoa count, and the activities of filter paper cellulase and cellobiase were significantly increased (p<0.05), while concentrations of propionate and valerate were significantly decreased (p<0.05). Moreover, 16S rRNA gene sequencing revealed that the relative abundance of rumen bacteria Christensenellaceae R7 group, Saccharofermentans, and Ruminococcaceae NK4A214 group were significantly increased, while Ruminococcus gauvreauii group, Prevotella 7 were significantly decreased (p<0.05). The relative abundance of the fungus Pseudomonas significantly increased, while Basidiomycota, Fusarium, and Alternaria significantly decreased (p<0.05). However, there was no significant change in the community structure of methanogenic archaea. Conclusion: Supplementation of hydroethanolic extract of WGH to a high-concentrate diet improved the ruminal fermentation, altered the structure of ruminal bacterial and fungal communities, and exhibited beneficial effects in alleviating subacute rumen acidosis of sheep.
The effects of Lactobacillus mucosae (L. mucosae), a potential direct fed microbial previously isolated from the rumen of Korean native goat, on the rumen fermentation profile of brewers grain were evaluated. Fermentation was conducted in serum bottles each containing 1% dry matter (DM) of the test substrate and either no L. mucosae (control), 1% 24 h broth culture of L. mucosae (T1), or 1% inoculation with the cell-free culture supernatant (T2). Each serum bottle was filled anaerobically with 100 mL of buffered rumen fluid and sealed prior to incubation for 0, 6, 12, 24, and 48 h from which fermentation parameters were monitored and the microbial diversity was evaluated. The results revealed that T1 had higher total gas production (65.00 mL) than the control (61.33 mL) and T2 (62.00 mL) (p<0.05) at 48 h. Consequently, T1 had significantly lower pH values (p<0.05) than the other groups at 48 h. Ammonia nitrogen ($NH_3$-N), individual and total volatile fatty acids (VFA) concentration and acetate:propionate ratio were higher in T1 and T2 than the control, but T1 and T2 were comparable for these parameters. Total methane ($CH_4$) production and carbon dioxide ($CO_2$) were highest in T1. The percent DM and organic matter digestibilities were comparable between all groups at all times of incubation. The total bacterial population was significantly higher in T1 (p<0.05) at 24 h, but then decreased to levels comparable to the control and T2 at 48 h. The denaturing gradient gel electrophoresis profile of the total bacterial 16s rRNA showed higher similarity between T1 and T2 at 24 h and between the control and T1 at 48 h. Overall, these results suggest that addition of L. mucosae and cell-free supernatant during the in vitro fermentation of dried brewers grain increases the VFA production, but has no effect on digestibility. The addition of L. mucosae can also increase the total bacterial population, but has no significant effect on the total microbial diversity. However, inoculation of the bacterium may increase $CH_4$ and $CO_2$ in vitro.
The present study investigated the effects of processing parameters such as time (10, 20, 30, 40 min), pressure (25, 50, 75, 100 MPa), and the salinity of brine (0~10%(w/v)) on jacopever (Sebastes schlegeli Hilgendorf) in order to establish optimization of the three factors using a high hydrostatic pressure (HHP) machine. To do so, it analyzed the quality characteristics of volatile basic nitrogen (VBN), trimethylamine (TMA), total bacterial counts, dynamic viscoelasticities, and differential scanning calorimetry (DSC) properties. First, when the time increased to 40 mins, by 10 min intervals, the total bacterial counts in HHP groups under $25^{\circ}C$, 100 MPa, and 4%(w/v) brine were significantly decreased except for the first 10 min in comparison to the control group. In regards to DSC properties, the onset temperature ($T_O$) of the first endothermal curve was significantly reduced. Second, when the pressure level increased up to 100 MPa by 25 MPa increments, the total bacterial counts in the HHP samples significantly decreased for 20 min at 50 MPa or higher. As the pressure increased, G', G" and the slope of tan ${\delta}$ decreased (except for 50 MPa). Third, in regards to the salinities of brine, when the HHP processing was treated at 100 MPa, $25^{\circ}C$ for 20 min, the total bacterial counts of all the HHP groups significantly decreased in comparison to those of the control group. A significant difference was found in the enthalpy of the second endothermic curve in the 6~10%(w/v) (except 7%(w/v)) HHP groups. Therefore, the salinity of the immersion water under the HHP condition was appropriate when it was lower than 6%(w/v). The present study demonstrated that the optimum parameter condition according to/under the condition of the microbial inhibition and economic effects using an HHP would be the reaction time for 20 min, reaction pressure at 100 MPa, and the salinity of 4%(w/v) brine.
Two isolates of mucous bacteria, mc75 and pc78, were isolated from fungal culture plate as culture contaminants with an interesting swarming motility. Both isolates were identified as Pseudomonas fluorescens based on microscopy, biochemical analysis, Biolog test and DNA sequence analysis of the 16S rRNA gene. Both strains have the exactly the same 16S rRNA gene sequences, and yet their biological control activity were not identical each other. In vitro analysis of antagonistic activity of two isolates against several plant pathogenic fungi indicated that both produced diffusible and volatile antifungal compounds of unknown identities. Treatment of the bacterial culture of P. fluorescens pc78 and its culture filtrate exhibited a strong biological control activity against rice sheath blight in vivo among six plant diseases tested. More effective disease control activity was obtained from treatment of bacterial culture than that of culture filtrate. Therefore, in addition to antifungal compound and siderophore production, other traits such as biofilm formation and swarming motility on plant surface may contribute to the biological control activity of P.fluorescens pc78 and mc75.
This study examined changes of rumen fermentation, ruminal bacteria biodiversity and abundance caused by nitrate addition with Ion Torrent sequencing and real-time polymerase chain reaction. Three rumen-fistulated steers were fed diets supplemented with 0%, 1%, and 2% nitrate (dry matter %) in succession. Nitrate supplementation linearly increased total volatile fatty acids and acetate concentration obviously (p = 0.02; p = 0.02; p<0.01), butyrate and isovalerate concentration numerically (p = 0.07). The alpha (p>0.05) and beta biodiversityof ruminal bacteria were not affected by nitrate. Nitrate increased typical efficient cellulolytic bacteria species (Ruminococcus flavefaciens, Ruminococcus ablus, and Fibrobacter succinogenes) (p<0.01; p = 0.06; p = 0.02). Ruminobactr, Sphaerochaeta, CF231, and BF311 genus were increased by 1% nitrate. Campylobacter fetus, Selenomonas ruminantium, and Mannheimia succiniciproducens were core nitrate reducing bacteria in steers and their abundance increased linearly along with nitrate addition level (p<0.01; p = 0.02; p = 0.04). Potential nitrate reducers in the rumen, Campylobacter genus and Cyanobacteria phyla were significantly increased by nitrate (p<0.01; p = 0.01).To the best of our knowledge, this was the first detailed view of changes in ruminal microbiota by nitrate. This finding would provide useful information on nitrate utilization and nitrate reducer exploration in the rumen.
Background: The horse intestinal tract is sensitive and contains a highly complex microbial population. A shift in the microbial population can lead to various issues such as inflammation and colic. The use of nutraceuticals in the equine industry is on the rise and curcumin is thought to possess antimicrobial properties that may help to minimize the proliferation of opportunistic bacteria. Methods: Four cecally-cannulated horses were utilized to determine the optimal dose of liposomal-curcumin (LIPC) on reducing Streptococcus bovis/equinus complex (SBEC), Escherichia coli K-12, Escherichia coli general, Clostridium difficile, and Clostridium perfringens in the equine hindgut without adversely affecting cecal characteristics. In the first study cecal fluid was collected from each horse and composited for an in vitro, 24 h batch culture to examine LIPC at four different dosages (15, 20, 25, and 30 g) in a completely randomized design. A subsequent in vivo $4{\times}4$ Latin square design study was conducted to evaluate no LIPC (control, CON) or LIPC dosed at 15, 25, and 35 g per day (dosages determined from in vitro results) for 9 days on the efficacy of LIPC on selected bacterial strains, pH, and volatile fatty acids. Each period was 14 days with 9 d for acclimation and 5 d withdrawal period. Results: In the in vitro study dosage had no effect ($P{\geq}0.42$) on Clostridium strains, but as the dose increased SBEC concentrations increased (P = 0.001). Concentrations of the E. coli strain varied with dose. In vivo, LIPC's antimicrobial properties, at 15 g, significantly decreased (P = 0.02) SBEC when compared to 25 and 35 g dosages. C. perfringens decreased linearly (P = 0.03) as LIPC dose increased. Butyrate decreased linearly (P = 0.01) as LIPC dose increased. Conclusion: Further studies should be conducted with a longer dosing period to examine the antimicrobial properties of curcumin without adversely affecting cecal characteristics.
Four Luxi beef cattle ($400{\pm}10$ kg) fitted with ruminal, duodenal and ileal cannulas were used in a $4{\times}4$ Latin square to assess the effects of soybean small peptide (SSP) infusion on rumen fermentation, diet digestion and flow of nutrient in the gastrointestinal tract. The ruminal infusion of SSP was 0 (control), 100, 200 and 300 g/d. Ruminal SSP infusion linearly (p<0.01) and quadratically (p<0.01) increased microbial protein synthesis and rumen ammonia-N concentration. Concentrations of total volatile fatty acid were linearly increased (p = 0.029) by infusion SSP. Rumen samples were obtained for analysis of microbial ecology by real-time PCR. Populations of rumen Butyrivibrio fibrisolvens, Streptococcus bovis, Ciliate protozoa, Ruminococcus flavefaciens, and Prevotella ruminicola were expressed as a proportion of total Rumen bacterial 16S ribosomal deoxyribonucleic acid (rDNA). Butyrivibrio fibrisolvens populations which related to total bacterial 16S rDNA were increased (p<0.05), while Streptococcus bovis populations were linearly (p = 0.049) and quadratically (p = 0.020) decreased by infusion of SSP. Apparent rumen digestibility of DM and NDF were (Q, p<0.05; L, p<0.05) increased with infusion SSP. Total tract digestion of DM, OM and NDF were linearly (p<0.01) and quadratically (p<0.01) increased by infusing SSP. The flow of total amino acids (AA), essential amino acids (EAA) and individual amino acids were linearly (p<0.01) and quadratically (p<0.01) increased with infusion SSP. The digestibility of Lysine was quadratically (p = 0.033) increased and apparent degradability of Arginine was linearly (p = 0.032) and quadratically (p = 0.042) increased with infusion SSP. The results indicated that infusion SSP could improve nutrient digestion, ruminal fermentation and AA availability.
Effect of a surfactant Tween 80 on the bacterial growth in the rumen was examined on the in vitro pure cultures of Streptococcus bovis, Selenomonas ruminantium, Butyrivibrio fibrisolvens, Prevotella ruminicola, Megasphaera elsidenni, Fibrobacta succinogenes, Ruminanococcus albus and Ruminococcus flavefaciens. Dry matter degradability (DMD), concentrations and compositions of volatile fatty acids (VFA), and the most probable number (MPN) of cellulolytic bacteria and total number of bacteria in the presence of Tween 80 were also examined on the in vitro rumen mixed culture either with barley grain or orchardgrass hay. The growth of S. bovis, S. ruminantium, B. fibrisolvens, P. ruminicola, M. elsidenni and F. succinogenes were significantly higher (p<0.05) at over 0.05% concentrations of Tween 80 than those of the control cultures, while was not changed with R. albus and R. flavefaciens. With rumen mixed culture the DMD of barley grain and orchardgrass hay was significantly higher (p<0.05) at a 0.2% concentration of Tween 80 than the control, being reflected in the significantly higher (p<0.05) VFA production (mmol $g^{-1}$DDM) with orchardgrass hay. The higher (p<0.05) ratio of propionate to acetate at a 0.2% concentration of Tween 80 was also observed with orchardgrass hay, showing a similar trend with barley grain. No changes in the total bacterial number and MPN of cellulolytic bacteria were observed.
Seaweed Jellys(Muks) were prepared with sea mustard and sea tangle. Optimum storage condition was also investigated in terms of bacterial counts, pH, titratable acidity, gel strength and total volatile nitrogen(TVN) as soaking temperature and time in distilled water. Gel strength of Muk decreased, and TVN and baterial counts increased during storage in water. Seaweed Muk has a shelf life of 3 days at $32^{\circ}C$ in water and 15 days at $18^{\circ}C$. Shelf life of seaweed Muk with soy milk was 3 days at 18's and shorter than that of seaweed Muk without soy milk.
KIM, JEONG-DONG;JUNG-HOON YOON;YONG-HA PARK;DAE-WEON LEE;KYOU-SEUNG LEE;CHANG-HYUN CHOI;WON-YEOP PARK;KOOK-HEE KANG
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.13
no.2
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pp.207-216
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2003
A number of different sources, such as composts, leachates, and pig feces samples, were collected from different pig farms in Korea, and several microorganisms were screened for their ability to deodorize the malodorous gases. Consequently, a novel malodorous gases-deodorizing bacterial strain, KJ-108. was isolated, because it was highly abundant in nitrate-supplemented minimal medium ($MM-NO_3^-$) under anaerobic culture conditions. Airtight crimp-sealed serum bottles containing $MM-NO_3^-$ , medium were inoculated with KJ-108. Nitrate concentration was decreased rapidly after 20 h of incubation, and incubation was carried out until nitrite production reached almost zero. Taxonomic identification, including 16S rDNA base sequencing and phylogenetic analysis, indicated that the isolate had $100\%$ homology in its 165 rDNA base sequence with Lactobacillus pentosus. Among the volatile fatty acids, acetic acid contained in large amounts in fresh piggery slurry was decreased by about $40\%$ after 50 h incubation with strain KJ-108. n-Butyric acid, n-valeric acid, and isovaleric acid were gradually decreased, and isobutyric acid and capronic acid were dramatically eliminated at theinitial period with the treatment. Moreover, NH, removal efficiency reached a maximum of $98.5\%$ after 50 h of incubation, but the concentration of $H_2S$ was not changed.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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