For commercial production of Korean fermented anchovy sauce through rapid fermentation, a bacterial strain which showed the high protease activity was isolated from a commercially fermented anchovy sauce. The isolate was Bacillus amyloliquefaciens, and named as B. amyloliquefaciens HTP-8. The incubation temperature, initial pH, and cultivation time for optimal production of protease by B. amyloliquefaciens HTP-8 were $30^{\circ}C$, 7.0, and 3 days, respectively. In jar fermenter, B. amyloliquefaciens HTP-8 showed higher protease activity when grown at pH 7.0. The protease was partially purified by 80% ammonium sulfate precipitation and CM-Sephadex C-50 ion exchange chromatography. The partially purified enzyme had specific activity of 103.3 units/mg, yield of 0.4%, and purification fold of 43.0. The optimal pH and temperature for the protease activity were 10.0 and $50^{\circ}C$, respectively. The protease was relatively stable at the pH range of 7.0~12.0 and at the temperatures below 4$0^{\circ}C$. The activity of the enzyme was inhibited by $Ag^{+}$ /, $Ba^{2+}$ and selectively inhibited by PMSF, suggesting that it is a serine protease.
Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society
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v.17
no.7
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pp.442-450
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2016
This study aims to determine the antimicrobial activity of fermented Cheonggukjang extract using the new Strain, Bacillus amyloliquefaciens NBF11-1, which was first found on the surface of the node part of bamboo stems, but has been studied very little so far. Bacillus subtilis NG24, which is the traditional fermented strain of Cheonggukjang, was selected as the control group and a comparative analysis was performed. The experimental method included measurements of the antimicrobial activity, minimum inhibitory concentration (MIC) and heat and pH stability. B. amyloliquefaciens NBF11-1 had stronger antimicrobial activity than B. subtilis NG24 against the gram-positive bacteria, C. perfringens and S. aureus and the gram-negative bacteria, A. faecalis and E. coli among the six species of pathogenic bacteria studied. When the minimum inhibitory concentration was measured, B. amyloliquefaciens NBF11-1 in C. perfringens, S. aureus, A. faecalis, and E. coli had an inhibitory effect at concentrations of 0.01 %, 0.21 %, 0.45 % and 0.29 %, respectively, compared to B. subtilis NG24. When the heat and pH stability was measured, B. subtilis NG24 and B. amyloliquefaciens NBF11-1 Cheonggukjang extract did not show any decrease in activity when held at a temperature of $121^{\circ}C$ for 15 minutes and at pH values ranging from 2 to 10 and were therefore considered to be relatively stable against heat and pH changes.
Rhizobacteria are actively sought for the substitution of chemical fertilizers and pathogen control agents in environment-friendly sustainable agriculture. To be successfully commercialized in the current Korean market as agriculture biomaterials, microbial agents should exhibit both properties of plant growth promotion and pathogen control. That is, the organism must be a phytostimulator as well as a biocontrol agent. These criteria and the survival rate of a rhizobacterium, Bacillus amyloliquefaciens 7079, in the soil system were investigated to evaluate the suitability for future commercialization. B. amyloliquefaciens 7079-treated seedlings showed $22.8\%$ maximum increase in leaf-length growth, compared with water-treated controls, showing the phytostimulating property. The disease suppression rates of Phytophthora-blight of peppers and Fusarium-wilt of tomatoes by B. amyloliquefaciens 7079 were 1.5 and 2.2 times better, respectively, than by three popular chemical fungicides used in actual agricultural practices to control the respective pathogens. Survival of B. amyloliquefaciens 7079 on the rhizoplane and in the rhizosphere was favorable up to 50 days in the soil system employed. These positive properties show that B. amyloliquefaciens 7079 is likely to be a suitable candidate for commercialization to market as agricultural biomaterials.
An extracellular protease of Bacillus amyloliquefaciens S94 was purified to apparent homogeneity. The enzyme activity was strongly inhibited by general inhibitor for serine protease, PMSF, suggesting that the enzyme is a serine protease. The purified enzyme activity was inhibited by leucine peptidase inhibitor, bestatin, suggesting that the enzyme is a leucine endopeptidase. When the enzyme was chemically modified with PMSF, which specifically reacted with serine residue on the enzyme, the activity was eliminated. The endopeptidase activity was inhibited by the modifier which chemically modified carboxyl group of aspartate and glutamate. PLP, which would modify lysine residue, did not affect the endopepetidase activity to a greater extent. This demonstrates that serine and aspartate (or glutamate) residues of enzyme would participate in a important function of the endopeptidase activity.
The effect of useful rhizobacterium added in bed soil on the early growth promotion of red pepper plug seedlings was investigated. Total 540 colonies of rhizobacteria from 385 samples of eggplant family roots were isolated. Among these, 5 isolates were selected for antifungal activity against pathogenic fungi such as Alternaria solani, Botrytis cinerea, Fusarium oxysporium, Phytophthora capsici, and Sclerotia sclerotiorum. Of all the isolates, MJ-3 having the most pronounced growth-promoting ability for red pepper was finally selected and identified as Bacillus amyloliquefaciens through characterization of biochemical and bacteriological aspects and 16S rDNA sequence. The plant height, stem diameter, root length and fresh weight of red pepper plants which were grown with inoculation of B. amyloliquefaciens MJ-3 were higher than those without inoculation. Especially the root weight of the inoculated red pepper plant increased by 44.3%, the content of endogenous plant hormone (CA$_1$) being 0.556 ng/g (dry weight).
For prevention of atrophic rhinitis of swine by Bordetella bronchiseptica and fowl typhoid by Salmonella gallinarum, bacterial strains showing antimicrobial activity against those pathogenic bacteria were isolated from various samples collected at animal farms. Among 372 bacterial isolates strain TK3 showed the highest antibacterial activity against both pathogens, and was identified as Bacillus amyloliquefaciens by 16S rRNA gene sequence analysis. B. amyloliquefaciens TK3 could inhibit growth of both pathogens by secretion of antibacterial compounds such as siderophore, rhamnolipid and antimicrobial peptide. Production radius of siderophore on Chrome azurol S agar plate by strain TK3 was 0.53 cm after 14 days of incubation, and concentration of siderophore in King's B medium was 1.06 mmol/ml. It also secreted 82.4 mg/L of rhamnolipid, and antimicrobial peptide that completely inhibited growth of both pathogens at concentration of $30{\mu}l/ml$ in LB medium.
Pressure inactivation behavior of Bacillus amyloliquefaciens spores was investigated in deionized water. The spores of B. amyloliquefaciens were subjected to $105^{\circ}C$ and 700 MPa. The magnitude of the decrease in viability after pressure treatment was similar to that after pressure treatment followed by heat shock. The increase of dipicolinic acid (DPA) release was correlated with the spore inactivation, and the hydrophobicity did not significantly change during the pressure-assisted thermal processing (PATP). Lag phase duration increased with increasing pressure process time. The mechanisms of spore germination and inactivation during the PATP were related to a complex physiological process.
A new rod-shaped endospore-forming bacterium isolated from the hindgut flora of the termite, Reticulitermes speratus kyushuenesis Morimoto is described. The isolate stained Gram positive, but the KOH test and the test for L-alanine aminopeptidase were negative. The length of a single cell varies from 2.5-9.0 $\mu $m, and the cell is about 0.5-0.7$\mu $m thick. The isolate had a high cellulolytic ability and was identified as Bacillus amyloliquefaciens.
An indigenous antagonistic bacterium Bacillus sp. 7079 was isolated from a local soil sampled at Kyongju area in Korea . The strain has strong antagonistic ability which was originated from multifunctional mechanisms of chitinase and antibiotic and is a powerful antagonistic biocontrol agent against red-pepper rotting fungus Phytophthora capsici and Wilt fungus Fusarium oxysporum. The chitinase might degrade the cell wasll for Fusarium species. The selected Bacilus sp. 7079 was identified as a Bacillus amyloliquefaciens 7079. The maximal production of the chitinase from B, amyloliquefaciens 7079 were obtained in chitin-yeast extract medium containing 0.7%, $K_2$$HPO_4$, $0.2KH_2$$PO_4$, 0.1% ($NH_4$)$_2$$SO_4$, 0.05% sodium cirate, 0.01% $MgSO_4$$7H_2$O, 0.1% yeast extract and 0.1% colloidal chitin after cultivation of 3 days at pH 7.0 and $30^{\circ}C$. The best carbon and nitrogen sources for the production of the chitinase from B amyloliquefaciens 7079 were determined to be 0.1% colloi- dal chitin and 0.15% proteose peptone NO 3 respectively, The antagonistic activity of B amyloliquefaciens 7079 was confirmed using P. capsici by in vivo pot test with red-pepper plant.
In this study, functionality of products of silkworm hemolymph fermented by Bacillus species was studied such as cell viability, antioxidant effect, and inhibitory effect on tyrosinase activities. A matured silkworm hemolymph was degraded by fermentation with Bacillus subtilis 10854 and Bacillus amyloliquefaciens M27. Especially, proteins of matured silkworm hemolymph were degraded to 3,000 Da by fermentation with B. amyloliquefaciens M27. Cell viability for MTT assay was higher than PBS in hemolymph and fermented hemolymph. A DPPH free radical scavenging activity of fermented hemolymph was as higher as Vitamin C and dependent on sample concentrations. Thus, these results suggest that degraded hemolymph fermented by B. amyloliquefaciens M27 may have antioxidant properties as a material for cosmetics.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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