Park, Byoung Kwon;Maharjan, Sony;Lee, Su In;Kim, Jinsoo;Bae, Joon-Yong;Park, Man-Seong;Kwon, Hyung-Joo
BMB Reports
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제52권6호
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pp.397-402
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2019
Middle East respiratory syndrome coronavirus (MERS-CoV) uses the spike (S) glycoprotein to recognize and enter target cells. In this study, we selected two epitope peptide sequences within the receptor binding domain (RBD) of the MERS-CoV S protein. We used a complex consisting of the epitope peptide of the MERS-CoV S protein and CpG-DNA encapsulated in liposome complex to immunize mice, and produced the monoclonal antibodies 506-2G10G5 and 492-1G10E4E2. The western blotting data showed that both monoclonal antibodies detected the S protein and immunoprecipitated the native form of the S protein. Indirect immunofluorescence and confocal analysis suggested strong reactivity of the antibodies towards the S protein of MERS-CoV virus infected Vero cells. Furthermore, the 506-2G10G5 monoclonal antibody significantly reduced plaque formation in MERS-CoV infected Vero cells compared to normal mouse IgG and 492-1G10E4E2. Thus, we successfully produced a monoclonal antibody directed against the RBD domain of the S protein which could be used in the development of diagnostics and therapeutic applications in the future.
고사리 수추출물에서 분리된 단백다당획분(Pteridium aquilinum glycoprotein, PAG)이 마우스 면역계에 미치는 영향을 알아보기 위하여 BALB/C 마우스의 복강내에 14일간 반복 투여한 후 마우스의 체중 및 면역장기의 무게변화를 관찰하면서 마우스 항체생성능과 비장세포 증식능에 대하여 조사하였다. PAG를 용량별$(0{\sim}500{\;}{\mu}g/kg)$로 투여한 결과 마우스 체중변화와 면역장기에는 커다란 효과를 관찰할 수 없었으나, HEL에 대한 항체생성능에 있어서는 $500{\;}{\mu}g/kg$ 투여시 뚜렷한 증가를 보였다. 시험물질을 투여한 마우스로부터 비장세포를 분리하여 phytohemagglutinin (PHA) 혹은 lipopolysaccharide (LPS)에 대한 비장세포 증식능을 측정한 결과, PAG 투여군에 있어서는 PHA와 LPS유도 비장세포 증식능이 용량 의존적으로 증가되었음이 관찰되었다. 비장세포 증식능에 대한 in vitro 시험결과 LPS에 대한 반응증가는 단백다당획분(PAG)의 세포에 대한 직접적인 작용에 의하며, PHA에 대한 반응증가는 세포에 대한 직접적인 작용은 아님을 알 수 있었다. PAG의 항체생성능 증가에 기여하는 활성부위를 규명하기 위하여 periodate산화 및 pronase소화를 실시하여 얻어진 각각의 조단백, 조다당분들과 고사리 수추출물에서 정제된 정제다당획분이 항체생성능에 미치는 영향에 대하여 시험하였다. 시험결과 조다당투여군과 정제다당 투여군에서는 항체생성능 증가가 관찰되지 않았으나 periodate 산화물인 조단백 투여군에서 뚜렷한 항체생성능을 확인할 수 있었으며, 이와 같은 실험결과 PAG의 단백성분이 항체생성능 증가에 있어서 주요 활성 본체임을 알 수 있었다., 660 mmHg 및 560 mmHg 압력 중 560 mmHg의 감압 하에서 5회 반복 수세하는 것이었다. 분자구조 변형에 의한 것이라 사료된다./TEX>일 경에 점질물과 산패취가 발생하여 상품으로서의 가치를 상실하였고, $-20^{\circ}C$ 저장구는 저장 100일 까지 상품으로서 가치를 유지하였다.등의 네 가지 요인으로 나누어서 각각의 효과를 요인간으로 비교하면 한일 양국이 함께 가격의 효과가 가장 작다. 그러나 그 이외 요인별 효과의 상대적 중요성은 양국간에 다른데 한국은 소비지출의 효과가 출생연도나 연령 효과보다 크지만 일본은 경제적 요인인 소비지출보다 세대주의 출생연도나 연령 등의 비경제적 요인의 효과가 크다.가능한 전분으로, 완전한 결정성구조를 가진 전분이 아닌 것으로 사료된다.147.33 peak area%인 것과 유사(類似)하게 높았다.tarrow}6$보다 $4{\beta}{\rightarrow}8$의 결합방식이, 그리고 procyanidin 류에서는 gallate를 갖는 물질이 이를 함유하지 많은 물질보다 더욱 높은 ACE의 저해효과를 나타내었으며, 또한 hydroxyl 기가 많을수록 효소 저해효과도 증가하는 것으로 나타났다. 이와 같은 결과는 chocolate의 주원료인 cacao bean의 polyphenol 성분 또한 녹차 등에서 볼 수 있는 생리활성효과에 손색없는 것으로 판단되고, 이러한 기능성에 기초하여 chocolate, 음료 등의 식품이나 의약품의 기능성 소재로서의 산업적 응용 가능성이 높은 것으로 사료된다.대장균군이 역시 난각에서 가장 높은 빈도로 분리되었고, 난황(Yolk)에서는 극히 낮은 수준의 세균오염도를 보였다. 다양한 동물종유래 S. aureus 균주들의 유전학적 분석목적에 가장 신뢰도 높고 감별능력이
Changwoo Nahm;Yoonhoi Koo;Taesik Yun;Hakhyun Kim;Byeong-Teck Kang;Mhan-Pyo Yang
한국임상수의학회지
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제40권3호
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pp.175-181
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2023
Fucoidan extracted from brown seaweed has a variety of biological activities. Neutrophil extracellular traps (NETs) formation is an immune response for the invasion of pathogens. Neutrophils release granule protein and chromatin that form extracellular fibers that bind microbes. These NETs degrade virulence factors and kill bacteria. The aim of this study was to investigate the effect of fucoidan on NET formation of porcine peripheral blood polymorphonuclear cells (PMNs). The NET formation was determined by fluorescence emission of propidium iodide (PI) in PMNs by a fluorescence microplate reader. The production of tumor necrosis factor (TNF)-α from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) was measured by ELISA method. Fucoidan itself did not show any direct effect on NET formation. However, NET formation of PMNs was increased by the culture supernatant from PBMCs treated with fucoidan. The NET formation of PMNs were also enhanced by treatment with recombinant porcine (rp) TNF-α. The ability of culture supernatant from PBMCs treated with fucoidan to increase the NET formation of PMNs was inhibited by addition of goat anti-rp TNF-α polyclonal antibody (pAb) (IgG) prior to the culture. The increase of NET formation by rp TNF-α was also inhibited by goat anti-rp TNF-α pAb (IgG). The level of TNF-α in culture supernatant from PBMCs was increased by treatment with fucoidan. These results suggest that fucoidan increases porcine NET formation, which is mediated by TNF-α produced from PBMCs.
Previously, we identified the 20S proteasome ${\alpha}$-subunit of Magnaporthe oryzae (M. oryzae) induced during appressorium formation, and detected an increase in multiple protein ubiquitination during the early appressorium formation process (Kim et al., 2004). In this study, we further attempted to determine whether the proteasome is involved in the appressorium formation of M. oryzae both in vitro and in planta, using proteasome inhibitors. A significant increase in 20S proteasome during fungal germination and appressorium formation was observed using Western blot analysis with 20S proteasome antibody, demonstrating that proteasome-mediated protein degradation was involved in appressorium formation. Pharmacological analysis using proteasome inhibitors, MG-132, proteasome inhibitor I (PI) and proteasome inhibitor II (PII) revealed that germination and appressorium formation were delayed for 4 to 6 h on rice leaf wax-coated plates. Similarly, the treatment of proteasome inhibitors with fungal conidia on the rice leaf surface delayed appressorium formation and host infection processes as well. Additionally, fungal pathogenicity was strongly reduced at 4 days' postfungal infection. These data indicated that the fungal 20S proteasome might be involved in the pathogenicity of M. oryzae by the suppression of germination and appressorium formation.
Neutrophil extracellular trap (NET) formation is an immune response for the invasion of microbes. The purpose of this study is to examine the effect of zinc on NET formation of porcine peripheral blood polymorphonuclear cells (PMNs). The NET formation of PMNs was measured by fluorescence microplate reader. The production of tumor necrosis factor (TNF)-α in the culture supernatants from zinc-treated peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Zinc itself did not have no effect on NET formation. However, the NET formation of PMNs was increased by culture supernatants from PBMCs treated with zinc. Also, the NET formation of PMNs was increased by recombinant porcine (rp) TNF-α. The production of TNF-α in PBMCs culture supernatants was shown to increase upon zinc treatments. These NET formations of PMNs increased by either culture supernatant from PBMCs treated with zinc or rpTNF-α were inhibited by treatment of anti-rpTNF-α polyclonal antibody (pAb). These results suggested that zinc has an immunostimulating effect on the NET formation of PMNs, which is mediated by TNF-α released from zinc-treated PBMCs. Therefore, zinc may play an important role for NET formation in the defense of porcine inflammatory diseases.
지방산 식이가 항체 생성력에 미치는 영향을 알아보기 위하여 ICR계 마우스를 기본사료만 투여한 대조군, 돈유 투여군, 그리고 정어리유 투여군으로 나눈 다음, 추출한 지방산을 8주동안 경구 투여한 후, 마우스 간조직 중의 지방산 조성 변화, Salmonella typhi에 대한 항체 역가, 복강내 대식세포의 탐식능 및 비장세포의 증식능을 비교 관찰한 결과는 다음과 같다. 대조군에 비하여 돈유 투여군에서는 $C_{18:3}$, $C_{20:3}$, $C_{20:4}$ 등의 지방산이 감소하였고, 정어리 투여군에서는 $C_{18:1}$, $C_{18:2}$, $C_{18:0}$를 제외한 주요 불포화 지방산 성분이 감소되었다. 대식세포의 탐식능에서는 대조군에 비하여 실험군의 대식세포 탐식능이 저하되었고, 마우스 생체 항체 생성력은 돈유 투여군이 대조군 및 정어리유 투여군보다 높은 역가를 나타내었으며, 마우스 비장세포 배양 상층액 중의 항체 역가는 마우스 생체 역가와는 다르게 정어리유 투여군이 더 높은 역가는 나타내었다. 또한 비장세포 증식능은 증시능을 나타내었다. 이러한 차이는 포화, 불포화 지방산 균형 증가에 의하여 면역 억제력이 높아진 결과로 생각되며, 포화 지방산의 투여는 항체 생성력을 현저하게 증가시킬 수는 있으나 면역 억제력은 타나내지 못함을 알 수 있었다.
In order to demonstrate the effect of specific serum IgG antibody on the adherence of Streptococcus mutans to smooth surface and the mechanism of effective adherence inhibition by IgG antibody, in the present study authors obtained purified IgG from different immunogen preparations of S. mutans NCTC 10449(serotype c) and observed the effect of each IgG preparation on the adherence of each S. mutans strain cultured in different conditions. In addition, the present study was undertaken to observe the cross-reactivity of IgG and the effect of sucrose concentration on the adherence of S. mutans in vitro non-growth condition. The adherence of S. mutans to glass surface was effectively inhibited by serum IgG antibody. At the same IgG concentrations, anti-2% fructose grown/1N NaCl washed S. mutans NCTC 10449 cell showed greater adherence inhibitory effect to S. mutans strains than anti-2% sucrose grown and anti-S. mutans NCTC 10449 cell wall, and the greater inhibitory effects of IgG preparations were observed in assay using 2% fructose grown S. mutans cell preparations than using 0.1% sucrose grown cell preparations. These results suggest that the more effective adherence inhibition by serum IgG antibody is due to the reaction with S. mutans cell surface antigens rather than glucan and cell-associated glucosyltransferase. The greatest adherence inhibitory effect of IgG to S. mutans strains was observed on homologous NCTC 10449 strain and the inhibition cross-reactivities were observed between serotype c, e, and f strains. More pronounced cross-reactivity of adherence inhibition of IgG to S. mutans was observed in assay using anti-2% fructose grown/1N NaCl washed cell than using other IgG preparations, and observed in assay using 2% fructose grown S. mutans cell preparations than 0.1% sucrose grown cell preparations. It was interested that low, but adequate concentration of reactive IgG antibody significantly increased the adherence ability of S. mutans. This result may be due to the formation of small cell aggregates resulted in a increase in the numbers of organisms which adhered to glass surface. The adherence of S. mutans to glass surface was possible in the absence of glucan-synthetic activity. Low level of sucrose significantly increased the adherence ability of S. mutans to glass surface, but excessive amount of sucrose induced large cell aggregates resulted in a decrease in the numbers of organism which adhered.
단백질의 Maillard 반응의 최종산물의 하나인 $N^{\varepsilon}$-car-boxy methyl lysine(CML)의 형성에 미치는 reactive oxygen species(ROS)의 영향을 살펴보았다. Glucose와 fructose는 자동산화과정을 통하여 CML 형성의 주된 propagator인 $\alpha$-dicarbonyl 화합물은 물론 glyoxal을 생성시키는 것이 확인되었다. 또한 이 과정은 ROS를 형성하는 천이금속이온에 의해 촉진되는 산화과정임을 알 수 있었다. 반응성이 높은 fructose에 비해 glucose의 경우가 ROS의 영향이 더욱 현저하게 나타났다. 불포화 지방산도 glyoxal을 형성하고 있었으며, 불포화도가 클수록 glyoxal 생성량이 빠르게 나타났으나 ROS의 영향은 비교적 작게 나타났다. Ascorbic acid 역시 ROS와는 무관하게 glyoxal을 생성하였다. 이는 ROS의 영향이전에 이들 물질들의 반응성이 매우 높다는 것을 의미하고 있다. Hippury lysine을 이용한 model system에서도 glucose로부터의 $N^{\varepsilon}$-carboxymethyl hipuryllysine(CMHL) 형성에서는 ROS의 영향이 높게 나타났으나, 반응성이 매우 높은 glyoxal에 의한 CMHL 생성에는 ROS의 영향이 거의 나타나지 않았다. CML에 특이적으로 결합하는 monoclonal antibody(6D12)를 이용한 antigen coated noncompetitive indirect ELISA 분석을 통해서 CML생성에 미치는 ROS의 영향을 살펴본 결과 대체로 위의 결과와 비슷한 경향을 나타내었다. 따라서 반응성이 높은 물질일수록 CML 형성에 ROS의 영향이 작게 나타남을 알 수 있었다.
목적: 베타입자 방출 핵종을 표지한 항체를 임상적으로 이용하기 위해서는 높은 비방사능을 가지는 것이 중요하다. $^{188}W/^{188}Re$ 발생기를 사용하여 쉽게 얻을 수 있는 무담체 $^{188}Re$은 이런 목적에 이상적인 방사성 핵종이다. 하지만 높은 비방사능의 $^{188}Re$이 표지된 항체는 높은 베타 에너지(2.1 MeV)로 인한 불안정성이 문제가 된다. 우리는 $^{188}Re$이 표지된 항체의 안정성을 확보하기 위해 몇 가지 안정제가 미치는 영향에 대해서 조사하였다. 대상 및 방법: 환원시킨 단일클론항체(CEA79.4)에 stannous tartrate와 발생기에서 용출한 $^{188}Re-perrhenate$를 넣어 실온에서 2시간 반응시켰다. 각각의 방사화학적순도는 크로마토그라피를 써서 확인하였다. 표지된 항체에 사람 혈청 알부민(HSA)을 첨가(최종농도 2%)하고 ascorbic acid, ethanol, Tween 80 존재 하에서의 안정성을 각각 조사하였다. 결과: 표지된 항체의 비방사능은 $1.25{\sim}4.77MBq/{\mu}g$, 표지 효율은 $88{\pm}4%\;(n=12)$였다. 안정제로 ascorbic acid, ethanol, Tween 80을 첨가하였을 때 $N_2$ 존재 하에서 모든 경우에 10시간까지 안정하였으나, 공기와 접촉 시 10시간 후에 방사화학적순도는 각각 처음의 100, 45, 36%가 되었다. 과산화레늄(perrhenate)과 $^{188}Re-tartrate$의 증가가 주된 요인이었으며 콜로이드 형성은 모든 경우에 큰 영향을 끼치지 않았다. Ascorbic acid 첨가는 공기 중에서 perrhenate의 형성을 줄임으로서 항체의 안정성에 가장 많이 기여하였다. 결론: 높은 비방사능의 $^{188}Re$이 표지된 항체는 공기 중에 노출되었을 때 불안정하였으며, ascorbic acid 첨가시 안정성을 향상시킬 수 있었다.
Glutamate dehydrogenase (GDH) is one of the main enzymes involved in the formation and metabolism of the neurotransmitter glutamate. In the present study, we investigated the distribution of the GDH-immunoreactive cells in the rat brain using monoclonal antibodies against bovine brain GDH isoprotein. GDH-immunoreactive cell were distributed in the basal ganglia, thalamus and the nuclei belong to substantia innominata, and its connecting area, subthalamic nucleus, zona incerta, and substantia niqra. We could see GDH-immunoreactive cells in the hippocampus, septal nuclei associated with the limbic system, the anterior thalamic nuclei connecting between the hypothalamus and limbic system, and its associated structures, amygdaloid nuclear complex, the dorsal raphe and median raphe nuclei and the reticular formation of the midbrain. The GDH-immunoreactive cells were shown in the pyramidal neurons of the cerebral cortex, the Purkinie cells of the cerebella cortex, their associated structures, ventral thalamic nuclei and the reticular thalamic nuclei that seem to function as neural conduction in the thalamus.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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