The present study was undertaken to elucidate the antibacterial spectrum of L. casei phage type $J_1$ strain isolated from a fermented milk product against pathogenic enteric bacteria. Growth inhibitory effects and minimum inhibitory concentration(MIC) of culture supernatants of L. casei grown in MRS broth were measured by both plate culture method and microplate broth dilution technique against Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Shigella dysenteriae, enterpathogenic E. coli, Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa. The results are summarized as follows: 1. The MRS broth culture of L. casei gave a similar extent of growth inhibitory effects against S. typhi, S. typhimurium, S. flexneri, S. dysenteriae, E. coli, K. pneumoniae and P. aeruginosa, respectively. 2. The inhibitory effects of L. casei culture were observed either in whole broth culture or in culture supernatant, but neither the bacterial suspension nor the neutralized culture supernatant showed such as antibacterial activities. 3. The MIC titres of the culture supernatants were ${\log_2}5$ to ${\log_2}6$, whereas those of the neutralized culture supernatant dropped markdely to ${\log_2}2$ to ${\log_2}3$. These results indicated that major portion of growth inhibitory effects of MRS broth culture of L. casei against enteric bacterial pathogens was possibly due to the acids produced, and minor portion to other antibacterial substances.
The volatile components of Eutrema wasabi were prepared by distillation and ether extraction. The extracts were similar in the color, the odor, and the antimicrobial activity to allylisothiocyanate, the main ingredient of wasabi essential oil. The antimicdrobial activity of the extracts was evaluated and it was found that these had the antibacterial effect against a broad spectrum of pathogenic bacterial such as Staphylococcus, Escherichia, Pseudomonas and Salmonella.
This study was aimed to examine the antibacterial and antioxidative properties of seven edible plants from Thailand to develop alternative antibiotics as feed additives. The plants include Citrus aurantifolia Swingle (Lime) fruits and its leaves, Sesbania grandiflora L. (Agati sesbania) leaves, Piper sarmentosum Roxb (Wild betal) leaves, Curcuma domestica Valeton (Turmeric) roots, Morinda citrifolia L. (Beach mulberry) leaves, Cassia siamea britt (Siamea cassia) leaves, and Cocos nucifera L. (Coconut) peels. The plants were extracted by methanol, n-hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol and water. Antibacterial activities with minimum inhibitory concentration (MIC) were determined by agar diffusion assay against Escherichia coli, Burkholderia sp., Haemopilus somnus, Haemopilus parasuis, and Clostridium perfringens that were considered pathogenic strains in livestock infection. Methanol extracts of C. aurantifolia Swingle fruits and leaves showed the broadest spectrum of antibacterial activities except for C. perfringens. Butanol extract of S. grandiflora L. leaves showed the strongest activity against Burkholderia sp. with MIC, $135{\mu}g/mL$. P. sarmentosum Roxb leaves showed antibacterial activities against E. coli, Burkholderia sp. and H. parasuis. Ethyl acetate and water extracts from C. domesitca Valeton roots showed MIC of $306{\mu}g/mL$ and $183{\mu}g/mL$, respectively against only C. perfringens. Antioxidative activity was determined by 2-diphenyl-2-picryl hydrazyl photometric assay. The methanol extracts of C. aurantifolia Swingle fruits and P. sarmentosum Roxb leaves showed the highest antioxidant activity among all the extracts with 3.46 mg/mL and 2.70 mg/mL effective concentration 50% ($EC_{50}$) values, respectively. Total contents of phenolics and flavonoids were measured from the plant extracts. Methanol extracts of S. grandiflora L. and chloroform extracts of C. domestica Valeton were found to have the highest amount of total phenolics, 41.7 and $47.8{\mu}g/mL$, respectively. Flavonoid content of methanol extracts in S. grandiflora L. T was $22.5{\mu}g/mL$ and the highest among plant extracts tested. These results indicated that C. aurantifolia Swingle, S. grandiflora L., P. sarmentosum Roxb, and C. domestica Valeton have antibacterial and antioxidant activities and can be used as alternative antibiotics or potential feed additives for the control of animal pathogenic bacteria.
B. subtilis MJP1이 생산하는 항균물질을 분리 정제하기 위하여 SPE, IEC, GFC를 통한 정제를 수행하였다. 정제된 항세균 물질은 tricine SDS-PAGE에서 하나의 band임을 확인 한 후 N-말단 아미노산 서열분석을 하였으나 N-말단이 blocking 되어 그 서열을 분석할 수 없였다. 이에 그 내부서열을 알아보기 위한 LC를 이용한 ESI-MS/MS를 시행하였으나 내부서열도 확인할 수 없었고, UPLC를 이용한 ESI-MS/MS를 시행한 결과 항세균 활성 물질은 분자량이 매우 유사한 2개의 peptide(3356.54 Da, 3400.5244 Da)가 존재함을 확인하였다. 정제된 항세균 물질의 항균 spectrum을 조사한 결과, L. monocytogenes에 가장 강한 항균활성을 나타내며 이외에 B. subtilis, S. aureus subsp. aureus, E. faecalis 등의 Gram 양성균에서 항균활성을 나타내였다. 정제된 B. subtilis 항세균 물질은 pH 3.0부터 pH 9.0 범위에서는 안정하였으며 $4^{\circ}C$, $30^{\circ}C$, $50^{\circ}C$에서 24시간, $100^{\circ}C$에서 5분 동안 매우 안정하였고, $70^{\circ}C$에서 24 시간, $100^{\circ}C$에서 30분 동안 처리한 구간부터 역가가 감소하여 $121^{\circ}C$에서 15분 동안 처리한 구간에서는 역가가 완전히 소실되었다. 효소 안정성 실험에서 정제된 항세균 물질은 일부 단백분해효소에 의해 분해되어 역가를 상실하였으며, lipase나 $\alpha$-amylase에서는 안정함을 나타냈다. 이로부터 정제된 항세균 물질이 넓은 pH 범위에서 안정하고, 비교적 높은 온도에서도 활성을 유지한다는 점을 관찰할 수 있었으며, 단백분해효소에 의해 분해되므로 bacteriocin임을 확인하였다. 본 연구를 통하여 B. subtilis MJP1으로부터 분리 정제된 bacteriocin은 class IIa군의 특성과 유사하며, B. subtilis MJP1은 본 분리 bacteriocin 이외에도 다른 항세균 물질과 항진균 물질을 생산하는 균주임을 알 수 있었다.
토양에서 분리한 Streptomyces nigrifaciens GMT-497호무터 G(+) bacteria에만 강한 항균활성을 갖는 항생물질 MT-497을 용매추출, silica column chromatography와 재결정화를 통하여 분리 정제하였다. MT-497의 UV, 융점, 원소분석, IR spectrum, $^1H-NMR$과 구성아미노산 분석을 통해 actinocin chromophore와 threonine, proline, methyl valine, sarcosine, aspartic acid로 구성된 peptide을 갖는 actinomvcin계열의 항생물질로 동정하였다.
This study looks into the dyeing properties and functionality of cotton fabrics dyed in both the Spirodela polyrhiza extract and the extract resulting from the mixture of Salvia plebeia R. Br. and Spirodela polyrhiza. Since the UV-Vis Spectrum of the methanol extract of Spirodela polyrhiza shows absorption peaks at 256, 268nm, and 345nm, it can be inferred that the compound that Spirodela polyrhiza contains is a flavonoid. In addition, it can also be presumed that, by analyzing the infrared absorption spectrum of Spirodela polyrhiza, the plant contains flavonoid compounds, just like Salvia plebeia R. Br.. The UV protection factors of the cotton fabrics dyed in both the Spirodela polyrhiza extract and the extract from the mixture of Salvia plebeia R. Br. and Spirodela polyrhiza were 50+, presenting outstanding UV protection factors. The deodorization rate of the cotton dyed in the Spirodela polyrhiza extract was between 30 and 120 minutes, and the rate rose from 92% to 97% as time passed. The deodorization rate of the cotton dyed in the extract from the mixture of Salvia plebeia R. Br. and Spirodela polyrhiza increased from 88% to more than 91%. The result also revealed that overall the fastness of color, including color fastness to washing related to change in color, as well as the color fastness to light of the fabric dyed in the extract from the mixture of the two plants improved, compared to the cloth dyed only in Spirodela polyrhiza extract. Furthermore, the antibacterial activity was also strengthened.
곤충 유전자를 이용한 항세균성 펩타이드 생산 및 응용에 관한 기초 연구로서 비병원성 세균(Escherichia coli K12)으로 면역 반응을 유도한 누에로부터 발현량이 증가하는 유전자 중 Hyalophora cecropia의 attacin과 cDNA 상동성을 나타내는 BmInc6 클론을 분리하고 그 특성을 조사하였다. BmInc6 cDNA의 전체염기서열을 분석한 결과 그 크기는 852 bp이고, 35번째 염기에서 변역이 개시되어 679 bp 위치에서 종결되는 open reading frame을 가지며 812번째 위치에 잠정 전사 종결 신호의 존재가 확인되었다(GenBank, AF005384). BmInc6에 의해 coding되는 아미노산은 214개이며, hydropathy 분석 결과 친수성을 나타내는 단백질이었다. 그리고 BmInc6 유전자에 의해 연역되는 펩타이드를 nuecin으로 명명하였다. Nuecin 유전자를 baculovirus 발현 백터계를 이용하여 곤충세포주에서 발현시킨 결과 전사체의 크기는 약 950 bp였고, 세포내 벌현 펩타이드의 분자량은 약 23 kDa이었다. 세포내에서 발현된 nuecin 전구체로 추정되는 23 kDa 펩타이드는 세포외로 분비되는 과정에서 약 3 kDa의 signal 펩타이드가 제거됨으로서 약 20 kDa의 성숙 nuecin으로 된다는 사실을 단백질 전기영동상으로 확인하였다. Nuecin 단백질의 항세균 활성을 수종의 그람 음성 및 양성 세균에 대해 검정한 결과, 특히 E. coli와 Bacillus subtilis에 높은 활성을 나타내었으며, attacin이 한정된 그람 음성 세균에만 항세균 활성을 나타내는데 비해 nuecin은 그람 음성은 물론 그람 양성에도 항세균 활성을 나타내어, 보다 넓은 항세균 스펙트럼을 가지는 것을 알 수 있었다.
개불 라이소자임(Uu-ilys)은 개불(Urechis unicinctus)로부터 정제된 무척추형 라이소자임으로 병원균에 대한 방어에 주요하게 작용하는 선천성 면역 물질이며, 비효소적 항균 활성을 가지고 있어 항균 활성을 지닌 유도체의 개발 가능성을 가지고 있다. 본 논문은 개불 라이소자임에서 유래된 항균 활성을 가지는 유도체의 디자인과 생산을 기술하고 있다. 여러 항균성 펩타이드(antimicrobial peptide, AMP) 데이터베이스에서 제공하는 항균성 펩타이드 예측 도구를 사용하여 개불 라이소자임에서 항균 활성을 가지는 부위를 예측하였다. 개불 라이소자임 C-말단의 절편이 항균 활성을 나타낼 것으로 예측되었으며, 이 펩타이드는 C-말단 절편, Uu-ilys-CF라 명명하였다. Uu-ilys-CF은 이형 발현 시스템인 TrxA-Uu-ilys-CF 퓨전 단백질을 사용하여 생산하였다. 만들어진 퓨전 단백질은 브롬화시안을 사용하여 메티오닌 잔기를 절단하였으며, 절단된 Uu-ilys-CF은 고성능액체크로마토그래피와 역상 컬럼인 CapCell-Pak C18을 사용하여 분리되었다. Uu-ilys-CF의 항균 활성을 조사하기 위해서 여러 균주(그람양성균 4개, 그람음성균7개, 진균 1개)를 사용하였다. Uu-ilys-CF의 항균 활성은 살모넬라에서 가장 높은 반응을 보였다. 비록 Uu-ilys-CF는 진균에 활성을 나타내지 않았지만, 사용한 균주들에서 넓은 범위의 항균 활성을 나타내었다.
본 연구에서는 인체에 보다 안전한 천연 화장품보존제 발굴을 목표로 하여 인간유래 항균펩타이드 LL-37의 짧은 유사체인 FK-13을 화장품보존제로 사용하고자 연구를 진행하였다. 이를 위해 13개의 아미노산으로 구성된 FK-13 펩타이드를 고상 펩타이드 합성법로 합성하였고 reversed phase-high performance liquid chromatography (RP-HPLC)로 정제 후 liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS)를 이용하여 순도와 분자량을 확인하였다. 합성된 FK-13을 이용하여 미생물에 대한 방부력을 검정하였고 화장품에 적용 가능성을 살펴보았다. FK-13은 3개의 그람-양성균 (Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Staphylococcus epidermidis)과 3개의 그람-음성균 (Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Pseudomonas aeruginosa), 그리고 진균인 Candida glabrata 에서도 높은 항균 활성을 보였으며 넓은 항균활성 스펙트럼을 나타내었다. 이를 바탕으로 화장품보존제로서의 적합성을 확인하였다. 또한 FK-13은 고온에서 분자의 열안정성을 보였으며 기존의 천연 한방화장품 방부제 및 화학보존제들과의 항균활성 비교 실험에서도 보다 월등한 항균활성 효능을 나타내었다. 따라서 FK-13 펩타이드는 인체 친화적이고 효과적인 항균활성을 나타내므로, 기존 화학보존제를 대체할 새로운 천연 화장품보존제로 적용이 가능할 것으로 판단된다.
Berberis is an important medicinal plant, of the family Berberidaceae. Different Berberis species and their parts are very common in herbal drug markets of India and world over as an adulterant/substitute to 'Daruharidra' i.e. B. aristata DC. Antimicrobial activity of 50% hydroalcoholic extracts of stem of four Berberis species viz. B. aristata DC., B. asiatica Roxb. ex DC., B. chitria Lindl. and B. lycium Royle and the isolated alkaloid berberine were tested against eleven bacterial and eight fungal strains. The extracts with the strongest antibacterial activity was obtained from B. lycium followed by B. aristata, B. asiatica and B. chitria. Based on these results it is possible to conclude that the hydroalcoholic extract and alkaloid (berberine) has stronger and broader spectrum against bacterial strains as compared to fungal strains. The result obtained in the present study authenticates and support the use of these plants in folklore medicine for treatment of various infectious diseases caused by the bacterial pathogens. However, an attempt has been made to explore the possibilities of utilizing stem part rather than roots of these species with the aim to conserve this species which is over exploited due to diverse use of its root. These findings will stimulate the search for novel, natural products as new antibacterial/antifungal agents which may be useful to pharmaceutical industries.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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