• 제목/요약/키워드: agarose

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쾌속 조형 기술을 이용한 바이오리액티의 개발 (Development of Bioreactor by Rapid Prototyping Technology)

  • 박정훈;이승재;이인환;조동우;이종원
    • 한국정밀공학회지
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    • 제26권3호
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    • pp.137-143
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    • 2009
  • It has been reported that mechanical stimulation takes a role in improving eel/ growth in skeletal system. Various research groups have been showed their own bioreactors which stimulate cell-seed three-dimensional scaffold. In this study, we hypothesized that the various conditions of mechanical stimulation would affect cell growth and proliferation. To prove our hypothesis, we designed a custom-made bioreactor capable of applying controlled compression to cell-encapsulated scaffolds. This device consisted of a circulation system and a compression system. Each parts of the bioreactor was fabricated using the rapid prototyping technology By using the rapid prototyping technology, we can modify and improve the bioreactor very rapidly For dynamic cell-culture, cell-encapsulated agarose gel was fabricated in 2% concentration. We performed dynamic cell-culture using this agarose gel and developed bioreactor in 3 days.

A Method for Direct Application of Human Plasmin on a Dithiothreitol-containing Agarose Stacking Gel System

  • Choi, Nack-Shick;Chung, Dong-Min;Yoon, Kab-Seog;Maeng, Pil-Jae;Kim, Seung-Ho
    • BMB Reports
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    • 제38권6호
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    • pp.763-765
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    • 2005
  • A new simplified procedure for identifying human plasmin was developed using a DTT copolymerized agarose stacking gel (ASG) system. Agarose (1%) was used for the stacking gel because DTT inhibits the polymerization of acrylamide. Human plasmin showed the lowest activity at pH 9.0. There was a similar catalytically active pattern observed under acidic conditions (pH 3.0) to that observed under alkaline conditions (pH 10.0 or 11.0). Using the ASG system, the primary structure of the heavy chain could be established at pH 3.0. This protein was found to consist of three fragments, 45 kDa, 23 kDa, and 13 kDa. These results showed that the heavy chain has a similar structure to the autolysed plasmin (Wu et al., 1987b) but there is a different start amino acid sequence of the N-termini.

RAPD를 이용한 Pecan 품종의 유전적 관계 분석 (Analysis of Genetic Relatedness by Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) in Pecan Taxa)

  • 신동영;김회택;박종인;노일섭
    • 한국자원식물학회지
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    • 제13권1호
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    • pp.1-10
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    • 2000
  • 재배되고 있는 22 페칸종간의 RAPD분석을 한 결과, Agarose gel상에서 primer당 평균 6개의 DNA단편이 증폭되었다. 증폭된 DNA 단편의 크기 는 100bp에서 1500bp의 범위에 위치하였다. 페칸종간의 유연 관계를 분석하기에 적합한 primer를 선발한 결과 OPA-02, OPA-10, OPA-12, OPB-01이 최적이었다. 4종의 primer를 이용하여 증폭한 PCR산물을 1.5% Agarose gel상에 분획하여 단편의 종류를 분석한 결과 22의 페칸종은 5개의 그룹으로 구분 할 수 있었다. 40종 primer로부터 증폭된 466 DNA단편을 기초로하여 유전적 근연계수를 계산하였던 결과 유사도 값이 가장큰 것은 C. flacra와 Black walnut로 0.90를 나타났으며, Kiowa와 Red hickory, C. tomentosa, C. flacra, Black walnut간에는 유사도 값이 0.31로 가장 작았다. 선발된 4종의 primer를 이용하여 증폭시킨 PCR산물을 Polyacrylamide gel상에 분획한 후 검출된 DNA단편을 분석하였다. 유사도 값이 가장 큰 것은 그룹 V의 Red hickory, C. tomentosa, C. flacra, Black walnut간으로 1.0이었고, Farley와 Pawnee간과 Sturya와 Clarke간은 공히 0.98를 나타내었다. Polyacrylamide gel분획 후 은염색하여 단편을 검출하는 것은 Agarose gel에 비하여 시간, 기술, 경비가 요구되지만 보다 정확한 유전적 배경을 설명할 수 있다고 생각되었다. 또한 Agarose gel 분석, Polyacrylamide gel 분석 및 주성분 분석법에서 Farley, C. tomentosa, C. flacra, Black walnut, C. corpiformis만이 동일 그룹에서 이탈되지 않았다.

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Cellvibrio sp. KY-GH-1의 아가로오스 당화 관련 엑소형 GH50A β-아가레이즈와 GH117A α-NABH의 특성 및 NA2와 L-AHG 양산에의 적용 가능성 (Characterization of Exolytic GH50A β-Agarase and GH117A α-NABH Involved in Agarose Saccharification of Cellvibrio sp. KY-GH-1 and Possible Application to Mass Production of NA2 and L-AHG)

  • 장원영;이희경;김영호
    • 생명과학회지
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    • 제31권3호
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    • pp.356-365
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    • 2021
  • 최근, 본 연구진은 담수 환경 유래 한천 분해 세균인 Cellvibrio sp KY-GH-1 (KCTC13629BP)의 전체 유전체 염기 서열을 분석하여 아가로오스를 L-AHG 및 D-갈락토오스로 가수분해시키는 아가레이즈들을 암호화하는 유전 정보를 탐색하였다. 그 결과, KY-GH-1 균주는 유전체 상의 약 77 kb 길이의 아가레이즈 유전자 클러스터 내에 9개의 β-아가레이즈 유전자들과 2개의 α-네오아가로비오스 가수분해효소(α-NABH) 유전자들을 지닌 것으로 나타났다. 이러한 유전자 정보를 바탕으로 KY-GH-1 균주가 한천을 탄소원으로 자화하기 위해 단량체인 L-AHG와 D-갈락토오스로 분해시키는 공정은, 엔도형 GH16 β-아가레이즈, 엔도형 GH86 β-아가레이즈 등에 의해 개시되어 NA4, NA6, NA8 등을 생성시킨 후, 이들에 대해 엑소형 GH50 β-아가레이즈가 추가로 작용하여 NA2를 생성시키고, 이어서 GH117 α-NABH가 작용하여 생성된 NA2를 단량체 L-AHG와 D-갈락토오스로 분해함으로써 종결되는 것으로 예측되었다. 대장균 발현 시스템과 PET-30a 벡터를 함께 사용하여, KY-GH-1 균주 유래의 GH50 패밀리 β-아가레이즈 유전자들(GH50A, GH50B, GH50C)과 GH117 패밀리 α-NABH 유전자들(GH117A α-NABH, GH117B α- NABH)을 발현시켜 His-태그 재조합 효소단백질들로 확보하여, 이들 효소단백질을 이용하여 효소 활성을 비교 분석한 결과, 재조합 GH50A β-아가레이즈가 세 개의 GH50A 패밀리 β-아가레이즈 동위효소들 중에서 가장 높은 엑소형 β-아가레이즈 활성을 나타내며, 또한 재조합 GH117A α-NABH가 NA2를 L-AHG와 D-갈락토오스로 강력하게 가수분해할 수 있으나 재조합 GH117B α-NABH는 NA2 가수분해 활성이 없음을 확인하였다. 연이어 GH50A β-아가레이즈 및 GH117A α-NABH의 효소 특성을 추가로 조사하였다. 아울러 이들 각 효소가 나타내는, 아가로오스를 분해하여 NA2를 생성시키는 효율성과 NA2를 분해하여 L-AHG 및 D-갈락토오스를 생성시키는 효율성을 평가하였다. 본 총설에서는, L-AHG 및 D-갈락토오스의 양산을 위한 아가로오스의 효소적 가수분해에 성공적으로 활용될 수 있을 것으로 기대되는, 담수 유래 한천 분해 세균 Cellvibrio sp. KY-GH-1 유래의 재조합 GH50A β-아가레이즈 및 GH117A α-NABH의 장점들에 대해 기술한다.

Functional Characterization of the Major Surface Protein of Treponema maltophilum in Human Gingival Fibroblasts

  • Lee, Sung-Hoon;Choi, Bong-Kyu
    • International Journal of Oral Biology
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    • 제30권1호
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    • pp.31-37
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    • 2005
  • Treponema maltophilum, a Group IV oral spirochete, is associated with periodontitis and endodontic infections. In this study we analyzed the functional role of the major surface protein of this organism (MspA) in human gingival fibroblasts (HGFs). The full-length gene encoding MspA was cloned and expressed in Escherichia coli by using the expression vector pQE-30. The recombinant protein (rMspA) was purified by affinity chromatography with nickel-nitrilotriacetic acid agarose and possible contamination of E. coli endotoxin in rMspA was removed by using polymyxin B-agarose. rMspA significantly induced the expression of pro inflammatory cytokines like IL-6 and IL-8 and intercellular adhesion molecule (ICAM)-1 in HGFs, when analyzed by reverse transcription-PCR, flow cytometry, and enzyme-linked immunosorbent assay. Our results indicate that MspA of T. maltophilum may play an important role in amplifying the local immune response by upregulating the expression of proinflammatory cytokines and ICAM-1.

바이오리액터를 이용한 MC3T3-E1 세포의 기계적 자극에 대한 영향 (Effects of Mechanical Stimulation for MC3T3-E1 Cells using Bioreactor)

  • 이인환;박정훈;이승재;조동우;강상순
    • 대한기계학회:학술대회논문집
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    • 대한기계학회 2008년도 추계학술대회A
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    • pp.1411-1414
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    • 2008
  • It is reported that mechanical stimulation takes a role in improving cell growth in skeletal system. And various research groups have showed that developed bioreactor to stimulate cell-seeded and threedimensional scaffold. In this study, we designed a custom-made bioreactor capable of applying controlled compression to cell-seeded agarose gel. This device consisted of a circulation system and compression system. In circular system, culture chamber was sealed for prohibiting contamination and media solution was circulated by pump. In compression system, mechanical stimuli were controlled by LabVIEW software and mechanical transfer system. Cell-encapsulated agarose gels were cultured for up to 7 days. There were significant differences between the number of cells grown in dynamic cell culture and in static cell culture from 3 days to 7 days.

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吸着 크로마토그라피法에 의한 사람 ALpha-Fetoprotein의 分離 (Affinity Purification of Human Alpha-Fetoprotein)

  • Kang, Shin-Sung;Bang, Ok-Sun;Park, Tae-Kyu
    • 한국동물학회지
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    • 제29권4호
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    • pp.283-293
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    • 1986
  • 사람의 alpha-fetoprotein(AFP)에 대한 모노클론 항체의 생산 및 분석을 위하여, 태아조직을 재료로 추출법, DEAE-cellulose 및 concanavalin A-Sepharose, Cibacron blue F3GA-agarose, immunoadsorbent column등의 흡착크로마토그라피법에 의해 AFP를 분리하였다. 총 534g의 태아조직에서 AFP의 量은 8.76 mg으로서 순수분리되었음을 확인하였다.

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