A PCR method that combines biological and enzymatic amplification of PCR targets was developed for the detection of Pseudomonas syringae pv. actinidiae on kiwifruit leaves. A nested PCR was performed with primers designes from the coding sequence of the cfl gene, which is involved in production of the phytotoxin coronatine. The first and second primer sets efficiently amplified expected 665 and 310-bp fragments, respectively. With two successive amplifications, as few as 20 CFU/ml of P. syringae pv. actinidiae could be detected on ethidium bromide-stained agarose gel. Leaf samples were collected from 4 kiwifruit trees showing yellow halo spots on leaves and incubated in pepton-sucrose broth for 12 h at $16^{\circ}$C before PCR amplification. Positive detection was obtained with one sample, which was proved as a diseased plant in the next spring.
This study was conducted to select and screen for an antifungal bacterial strain showing pathogen inhibitory activity against Diaporthe actinidiae, which causes stem-end rot in kiwi fruit. Four bacterial strains were isolated which strongly inhibit Diaporthe actinidiae from among two hundred and fifty bacterial strains screened from the soil where kiwi fruit were grown. By co-culturing bacterial strain #72 and the pathogen causing the stem-end rot of kiwi fruit, bacterial strain #72 showed 81.0% antifungal activity against Diaporthe actinidiae. Bacterial strain #72 was identified to be from the genus Bacillus sp. based on morphological and biochemical characterization. The bacterialization of culture broth for Bacillus sp. #72 which was sterilized at $121^{\circ}C$ for 15 minutes and than purified by $0.45{\mu}m$ membrane filter showed almost all of the antagonistic activity against Diaporthe actinidiae. We have also confirmed that in vitro treatment of Bacillus sp. #72 cultured in SD+B+P(sugar 5%, soy sauce 3%, beef extract 0.2%, peptone 0.2%) medium efficiently inhibited the growth of Diaporthe actinidiae responsible for stem-end rot in kiwi fruit.
Choi, Eun Jin;Lee, Young Sun;Kim, Gyoung Hee;Koh, Young Jin;Jung, Jae Sung
Korean Journal of Microbiology
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v.50
no.3
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pp.245-248
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2014
Pseudomonas syringae pv. actinidiae is the causal agent of bacterial canker in kiwifruit (genus Actinidia). Multilocus sequence analysis of seven housekeeping and 11 type III effector genes differentiated the virulent P. syringae pv. actinidiae isolates worldwide into three groups designated as Psa1-Psa3. In this work, a total of 12 P. syringae pv. Actinidiae strains, including three Psa1, three Psa2, three Psa3 strains isolated from Korea and three Psa3 strains from Italy, were compared based on their phenotypic properties. Strains with different geographic origins had unique growth patterns as demonstrated by growth rate at several temperatures; all tested strains exhibited maximum growth at temperatures below $22^{\circ}C$, while the growth of Psa3 strains was completely inhibited above $30^{\circ}C$. Psa3 strains isolated from Korea had longer lag phases than the Psa3 strains from Italy. The Psa2 strains were different from Psa1 and Psa3 strains in the API 20NE test, in which the Psa2 strains could not utilize potassium gluconate, capric acid and trisodium citrate. Psa3 strains isolated from Korea could hydrolyze esculin. The API ZYM test showed that ${\beta}$-glucosidase activity was detected only from Psa3 strains. The strains belonging to the three Psa groups differed with regard to their susceptibility to ampicillin, novobiocin, and oleandomycin.
We have collected eight high-level streptomycin-resistant strains of Pseudomonas marginalis and P. syringae pv. actinidiae which were isolated from kiwifruit orchards in Korea and Japan, The molecular mechanisms of resistance were investigated by the PCR, susceptibility tests, and nucleotide sequence analysis. Of the eight high-level streptomycin-resistant strains, four harbored strA-strB genes, which encode streptomycin-inactivating enzymes. While the three Korean strains of R marginalis did not have plasmid and carried the resistant genes in the chromosomes, the Japanese strain of P. syringae pv. actinidiae had a plasmid containing strA-strB genes. The myomycin susceptibility test demonstrated that the high-level resistance to streptomycin of the remaining four strains is associated with mutations in the rpsL gene. Nucleotide sequence analyses revealed that they contain a single base-pair mutation in codon 43 of their rpsL gene.
Post-harvest diseases of kiwifruit caused severe damages on the fruits during storage, transportation, marketing and consumption. Phomopsis sp. was reported to be one of the major causal organisms of post-harvest fruit rots of kiwifruit. Symptoms of stem-end rot caused by Phomopsis sp. appeared at the stem-end area of the fruit as it ripened. The brown pubescent skin at the area became soft and lighter in color than the adjacent firm healthy tissues. A watery exudate and white mycelial mats were frequently visible at the stem-end area forming a water-drop stain down the sides on the dry brown healthy skin. When the skin was peeled back, the affected flesh tissue was usually watersoaked, disorganized, soft and lighter green than the healthy tissue. Phomopsis sp. was consistently isolated from the diseased fruits, and its pathogenicity was confirmed by an artificial inoculation test on healthy fruit of kiwifruits. The mycological characteristics of the telemorph state of the fungus produced on potato-dextrose agar were in accordance with those of Diaporthe actinidiae. This is the first report on the occurrence of a telemorph state of D. actinidiae as the causal organism of stem-end rot of kiwifruit in Korea.
Park, JungKum;Lim, Jeong-A;Yu, Ji-Gang;Oh, Chang-Sik
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.28
no.9
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pp.1542-1546
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2018
Bacterial canker in kiwifruit is caused by Pseudomonas syringae pv. actinidiae (Psa). In this study, the bacteriophage PPPL-1 effective against Psa was characterized. Belonging to the Podoviridae family, PPPL-1 was effective against most Psa strains as well as most Pseudomonas syringae pathovars. PPPL-1 carries a 41,149-bp genome with 49 protein coding sequences and is homologous to the previously reported phiPSA2 bacteriophage. The lytic activity of PPPL-1 was stable up to $40^{\circ}C$, within a range of pH 3-11 and under 365 nm UV light. These results indicate that the bacteriophage PPPL-1 might be useful to control Psa in the kiwifruit field.
This study was conducted to identify optimum ripening condition for kiwifruits (Actinidia deliciosa) to prevent postharvest fruit rots caused by Botryosphaeria dothidea, Diaporthe actinidiae and Botrytis cinerea. The optimum temperatures for mycelial growth of B. dothidea, D. actinidiae and B. cinerea were $26{\sim}35^{\circ}C$, $26{\sim}29^{\circ}C$ and $20{\sim}26^{\circ}C$, respectively, and the incidence was closely related with the temperature. Although kiwifruits ripened faster at higher temperatures, the rates of diseased fruits increased with the rates of ripened fruits increased. Optimum conditions for ripening of kiwifruit were 20-day at 17C.
Sixteen hundred fruits were randomly collected from 16 kiwifruit (Actinidia deliciosa) orchards in Jeonnam, Gyeongnam and Jejn provinces in Korea in 2000 and incidences of postharvest fruit rots were examined. The overall disease incidence was 32% and varied much with locations of orchards ranging from 5 to 68%. The percentages of kiwifruits showing internal, external, and both internal and external symptoms were 21.9%, 4.9%, and 5.2%, respectively. Several fungi were isolated from rotten fruits; Botryosphaeria dothidea, Diaporthe actinidiae and Botrytis cinerea were the major pathogens with the average isolation rates of 83.3%, 11.9% and 1.4%, respectively. Based on the symptoms on kiwifruits and the characteristics, the postharvest fruit rots caused by B. dothidea and D. actinidiae are suggested to be named as ripe rots and stem-end rots, respectively.
Pseudomonas syringae pv. actinidiae, the causal agent of bacterial canker, is currently causing severe economic losses to kiwifruit production worldwide. The pathogen has affected green-fleshed kiwifruit cutlivars and yellow-fleshed kiwifruit cultivars since 1988 and 2006 in Korea, respectively. In recent years, the biovar 3 strains of P. syringae pv. actinidiae were introduced through imported contaminated pollens and have rapidly spread to neighboring kiwiruit orchards by secondary infection, leading to outbreaks of bacterial canker and tremendous damages on yellow- and red-fleshed kiwifruit cultivars. In this review, we summarize the various management practices of bacterial canker of kiwifruit such as disease escaping, cultural practices, blocking of dissemination, early diagnosis, eradication of inoculum sources, chemical control, and trunk injection on the basis of our research works and field experiences and important research products conducted during the last three decades in the world. Finally, we propose a manual for the efficient management of the disease that can be practically utilized at the farmers' orchards in order to keep kiwifruit vines healthy in the future.
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