Several yeast strains degrading malic acid as a sole carbon and energy source were isolated from Korean wine pomace after enrichment culture in the presence of malic acid. Among them, the strain designated as KMBL 5774 showed the highest malic acid degrading ability. It was identified as Issatchenkia orientalis based on its morphological and physiological characteristics as well as the nucleotide sequences of the internal transcribed spacer (ITS) 1-5.8S rDNA-ITS II region. Phylogenetic analysis of the ITS I-5.8S rDNA-ITS II sequences showed that the KMBL 5774 is the closest to I. orientalis zhuan 192. Identity of the sequences of the KMBL 5774 was 99.5% with those of I. orientalis zhuan 192. The optimal pH of the media for the growth and malic acid degradation by the yeast was between 2.0 and 3.0, suggesting that the strain is an acidophile. Under the optimized conditions, the yeast could degrade 95.5% of the malic acid after 24 h of incubation at $30^{\circ}C$ in YNB media containing 2% malic acid as a sole carbon and energy source.
Nine novel cyclodextrin glycosytransferase-producing bacteria were isolated from soil in a low acidic pH (3-4) medium at high temperature (45-60C). The isolated acidophilic bacteria were identified as Bacillus acidocaldarius. Highest yield of enzyme was obtained by using the following medium: 4% raw potato, 1% peptone, 0.1% yeast extract, 0.02% (NH4)2SO4, 0.05% MgSO4, 0.02% CaCl2, 0.3% KH2PO4. The crude enzyme showed a very broad pH-activity curve and had two optium pH ranges at 30 and 5.0-6.0. The crude enzyme was most active at 90C.
광양 광산 폐석더미에 많은 양으로 방치되어 있는 황철석으로부터 유용금속을 보다 효과적으로 용출시켜내기 위해서 $42^{\circ}C$에서 미생물 용출실험을 실시하였다. $42^{\circ}C$의 미생물 용출 실험에서 생존할 수 있는 토착 호산성박테리아를 일본 하쵸바루 산성 온천수에서 채취하였고, 박테리아의 용출능력을 향상시켜 주기 위하여 황철석-용출 배양액에 yeast extract를 첨가하였다. 원소황과 yeast extract가 포함된 성장-배양액에서 성장한 토착박테리아들은 막대 모양으로 나타났다. 크기가 약 $0.7\times2.6\;{\mu}m$, $0.6\times7\;{\mu}m$, $0.8\times5\;{\mu}m$ 및 $0.7\times8.4\;{\mu}m$인 박테리아들이 황철석 표면에 부착하였다. 막대 모양의 박테리아들은 황철석 표면에 발달한 육각형 공동 주변과 공동 안쪽 벽면에 집중적으로 군집을 형성하여 부착하였다. 길이가 약 $4.92\;{\mu}m$에서 약 $10.0\;{\mu}m$인 filament-shaped 박테리이들이 황철석 표면의 크랙 주변과 크랙 안쪽 벽변에 부착하였다. 황철석에 대한 XRD분석에서, 박테리아에 반응시킨 시료가 비교시료에 비하여 상대적으로 (111), (311), (222) 및 (320) 결정면들의 강도는 감소하였고, (200), (210) 및 (211)의 결정면들의 강도는 증가하였다. Fe 이온은 미생물학적 용출량이 화학적 용출량에 비하여 3.4배 이상 높게 용출되었고, Zn 이온은 화학적 용출량보다 미생물학적 용출량이 2배 이상 높게 용출되었다. 토착호산성박테리아가 황철석의 특정 표면을 선택적으로 공격히는 것을 SEM 및 XRD분석에서 확인하였다. 앞으로 보다 더 높은 온도로 미생물 용출실험을 실시한다면 보다 많은 유용금속이온이 용출될 것으로 기대된다.
발암성 ethyl carbamate의 전구물질인 요소의 분해를 촉매하는 urease 생산 효모를 분리하고 그 특성을 조사하였다. 우리나라 전통 누룩으로부터 약 223주의 효모를 분리하고 이들 중 urease 활성이 있는 6 균주를 선별하였다. 분리된 6 균주는 ITS I-5.8S-ITS II 영역의 PCR-RFLP 분석 및 계통분석을 통하여 이 균주 모두가 $I.$$orientalis$ ATCC 24210과 99.8% 이상의 염기서열 상동성을 나타내어 유전적으로 매우 가까운 근연관계에 있음을 확인하였다. 분리 효모 중 uresae 활성이 가장 강한 2 균주 JJ22와 SH10을 선정하여 형태학적, 생리학적 특성을 조사한 결과 $I.$$orientalis$와 특성이 거의 유사하여 $I.$$orientalis$로 동정하였다. 이 균주들은 온도 $20-40^{\circ}C$의 넓은 범위에서 생육이 양호하였으며 JJ22의 경우에는 $35^{\circ}C$, SH10의 경우에는 $30^{\circ}C$에서 urease 활성이 가장 높았다. pH의 영향을 조사한 결과 pH 2.0-6.0까지 넓은 범위의 산성 조건에서 생육이 매우 양호하여 호산성 효모로 생각된다. Urease 효소의 활성은 PH 5.0에서 최대치를 나타내었고 pH가 감소하거나 높아짐에 따라 활성이 감소하였다.
A bacterial strain PN33 producing large amounts of extracellular pectin lyase (PNL, EC 4.2.2.10) was isolated from soil. The isolated bacterium was identified as a strain of Bacillus sp. Production of PNL by the strain was induced only by pectins, with a higher degree of esterification, which had been added to the culture medium as a sole carbon source. The optimal medium for PNL production was determined to consist of 10 g pectin, 2 g yeast extract, 4 g $K_2HPO_4{\cdot}3H_2O$, 0.6 g $MgSO_4$, and 0.11 g $CaCl_2$ per liter (pH 7.0). The PNL activity in the culture supernatant reached the highest level of 132 mU/ml after 32 h cultivation at $37^{\circ}C$ in the optimal medium. The PNL produced was purified to homogeneity by ammonium sulfate fractionation (50~80%), and cation exchange and size exclusion chromatographies. The molecular mass of the enzyme was estimated to be approximately 52 kDa by SDS-PAGE. Almost the same mass was determined by nondenaturing PAGE, indicating that the functional enzyme had a monomeric structure. As expected, the PNL exhibited higher activities on the highly esterified pectins whereas it gave no detectable activity on polygalacturonic acid. The enzyme showed the highest activity at the acidic pH of 6.0, exceptional for a bacterial PNL. Maximum activity was measured at $40^{\circ}C$, although the stability f the purified enzyme was poor at this temperature. alcium (1 mM) was found to activate the PNL activity by $50\%$, and also remarkably increased the thermal stability f the enzyme. Phenylmethylsulfonylfluoride (PMSF) and iethylpyrocarbonate (DEPC) inhibited the PNL activity lmost completely at the concentration of 5 mM. This result ndicates that some serine and histidine residues of the nzyme may play an essential role for catalytic function of he enzyme.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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