• 미생물학회지
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• 제40권1호
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• pp.12-16
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• 2004

Acid proteinase는Aspergillus niger (acid pretense A)와 Cryphonectria parasitica (acid proteinase EapC)에서 분비하는 단백질로서 치즈를 제조할 때 이용하는 단백질이다. 본 연구에서는 Penicillium oxalicum HCLF-34로부터 acid proteinase의 부분유전자를 기존에 밝혀진 acid proteinase의 homology 정보로부터 degenerate primer를 제작하여 PCR방법을 이용하여 cloning하였다. Cloning된 유전자로부터 438 bp 염기서열을 분석하였으며, 이 염기서 열을 146개의 아미노산 정보로 변환하여 acid proteinase family와 homology를 비교한 결과 acid protease A와 71% 아미노산 서열의 homology를 나타내었고, EapC와 67%의 아미노산 서열 homology가 확인되었다.

• 미생물학회지
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• 제7권3호
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• pp.115-124
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• 1969

The mash of Takjoo, Korean flour wine, is fermented through two brewing processes ; the primary brewing process to saccharify and the main one to produce ethyl alcohol. The activities of acid proteinase (pH3), weak acid proteinase (pH 6), and alkaline proteinase (Ph 80 on the processes are determined with time by the Folin phenol method as a strength of casein digestion. Hydrogen ion concentration, the content of total organic acids, protein, free amino acids and oligopeptides, which effect the activities of proteinase, are also measured. The results are briefly summarized as follows : 1. In general, the activities of acid proteinase and weak acid proteinase in the mesh of primary brewing process are stronger than those in main brewing process. 2. The activities of acid proteinase are remarkably stronger than those of weak acid proteinase in both processes. It reveals that they decrease slowly through the fermentation. Activities of alkaline proteinase are weaker than others. 3. As the raw materials are mixtured, the total amount of organic acids is equivalent to 0.150 mg/ml acetic acid in the mesh of primary brewing process and 0.02 mg/ml acetic acid in the main one. They increase gradually with time. 4. Hydrogen ion concnetration shows 3.9 in the mesh of main brewing process and 3.28 in the primary one. They increase to the maximum in 60-72 hrs., and decrease since 108 hrs. 5. The content of crude protein shows 66.90mg/ml in the mesh of main brewing process, while shows 64.29mg/ml in the mesh of primary one. they decrease slowly with time. it seems that a small content of crude protein, as a substrate, converts into amino acids and soluble nitrogen compounds by proteinase. 6. The content of free amino acids and oligopeptides shows 0.36 mg/ml in the mesh of primary brewing process and 0.24mg/ml in the main brewing process. It is evident that the reason they increase continuously through the fermentation is the effect of proteinase. 7. According to the results, the strong activities of proteinase in primary brewing process has been derived from the decrease of hydrogen ion concentration due to the production of organic acids.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제30권2호
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• pp.116-122
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• 2002

김치로부터 분리된 젖산균들의 16S rDNA 부분 염기서열 결정 결과, 6균주 중 2균주는 Leuconostoc mesenteroides로, 나머지 균주는 Lactobacillus속으로 재동정되었다. 이들 김치유래 젖산균들은 유제품 유래 젖산균과 마찬가지로 cell-envelope proteinase (CEP)로 추정되는 세포외 proteinase 활성을 보유하고 있는 것으로 나타났고, 젖산균의 CEP 특이적 primer를 제작하여 PCR을 수행한 결과, Leu. mesenteroides로부터는 예상 크기의 PCR 산물이 증폭되지 않았지만 Lactobacillus속 균주들로부터는 예상되는 1.2 kb 의 DNA 단편이 증폭되었다. Lactobacillus pentosus KFR1821의 genomic DNA로부터 증폭된 PCR 산물의 추정 아미노산서열은 Lactococcus lactis subsp. cremoris의 PrtP와 95％, Labtobacillus paracasei subsp. paracasei이 PrtP와 92％의 높은 상동성을 보였다. 증폭된 PCR 산물을 probe로 하여 Southern hybridization을 수행한 결과, Lb. pentosus KFR1821의 CEP 유전자는 chromosomal DNA에 암호화 되어있는 것으로 확인되었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제32권4호
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• pp.231-242
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• 1994

자연 감염된 가재에서 폐흡충의 피낭유충을 분리하고 개에 경구 감염시켜 성충을 얻었다. 폐흡충 성충의 조효소를 ion-exchange chromatography, affinity chromatography와 gel filtration chromatoglaphy를 실시하여 cysteine proteinase를 순수 정제하였다. 이들 효소의 생화학적 특성과 분해능을 관찰하였으며. 효소면역전기영동이적법을 이용하여 순수 정제한 효소의 항원성을 관찰하였다. 정제된 효소는 저분자 합성기질인 CBZ-arg-arg-AFC 보다 CBZ-phe-arg-AFC에서 높은 활성을 보였으며. 이들 효소는 thiol-dependent이었다. 정제된 효소 및 조효소의 최적 pH는 5.5이었고. 최적 mole 농도는 0.1 M(0.1 M sodium citrate, pH 5.5)이었고, 이들 효소는 $4^{\circ}C$에서 48시간 동안 80%의 안정성을 보였다 정제된 효소의 native 분자량은 20.000 dalton이었고, SDS- PAGE상에 나타난 분자량은 17,500 dalton이었다 정제된 효소는 cysteine proteinase 특이 억제 인자인 E-64, lodoacetic acid, NEM에 의해 활성이 완전히 억제되었으며, serine proteinase, aspartic proteinase 및 metallo proteinase 특이 억제인자에 의해 활성이 억제되지 않았다. 정제된 효소는 collagen(Type I)과 hemoglobin을 분해하였고, 효소면역전기영동이적법으로 정제된 효소의 항원성을 확인하였다.

• 미생물학회지
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• 제36권1호
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• pp.14-19
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• 2000

Penicillium oxalicum(HCLF-34)의 세포외 분비효소로부터 ultrafilration, gel filtration chromatograph와 anion exchange chromatography법을 이용하여 남조세균(Anabaena cylindrica) 분해효소를 분리하였다. 이 효소의 분자량은 약 22 kDa이며, renaturation SDS-PAGE에서 monomer로서 남조세균 분해 활성을 갖는다. 아미노산 서열은 N-말단부터$NH_(2)$-Glu-Ser-Tyr-Ser-Ser-Asn-Ala-Ala-Gly-Ala-Val-Leu-Ile---, 13개의 아미노산을 분석하였으며, 분석된 아미노산의 homology를 조사한 결과 aspergillopepsin II precursor(acid protease A)와 13개의 아미노산 중 11개(84%)의 유사도를 나타내었고, acid proteinase EapC precursor과 13개 중 10개(81%)의 유사도를 나타내었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제26권2호
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• pp.95-106
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• 1988

아메바의 cytolytic process가 주로 가수분해 효소 환성과 관계 깊다는 연구들이 70년대 후반부터 병원성 Entamoeba sp.와 Naegleria sp.에서 보고되었지만 Acanthamoeba sp.에서는 가수분해 효소 환성에 관한 연구는 찾아볼 수 없다. 본 연구에서는 병원성이 없는 것으로 알려진 Acanthamoeba royreba를 대조로 하여 병원성이 있는 A. culbertsonl이 가수분해 효소 활성도를 측정하고 이들을 비교하고자 하였다. A. culbertsoni를 마우스에 감염시켰더니 15일내에 마우스 모두가 사망하였으며, 평균 생존기간은 8.5일이었고, 아베바성 수막뇌염으로 사망했음을 알 수 있었다. 반면에 A. royreba를 감염시킨 마우스에서는 수막뇌염이 발생되지 않았다. CGV배지에서 두 종(種) 아메바를 배양하여 아메바 추출물 및 배양액에서 가수분해 효소의 환성을 측정한 결과 A. rcyreba에 비해 A. culbertsoni 세포의 추출물 및 배양액에서 현저히 활성도가 높은 가수분해 효소는 acid phosphatase, p-N-acetyl galactosaminidase, β-N-acetyl glucosaminidase, α-mannosidase, neutral proteinase, acid proteinase였다. 표적 세포인 CHO 세포에 혼합한 A. culbertsoni는 대조군에 비해 강한 세포독성을 나타내었고 CHO 세포와의 혼합후 48시간 후 80%, 72시간후 95% 이상의 CHO 세포가 사멸하는 것을 알 수 있었다. 반면에 A. royreba를 혼합하였을 때는 별다른 세포독성을 나타나지 않았다. CHO 세포에 혼합한 A. tulbgrtsoni이 가수분해 효소 활성도를 경과 시간별로 측정하였던 바 CGV 배지에서 배 양시간이 지남에 따라 아메바내보다 그 배양액에서 더 높은 효소 활성도를 나타내었던 acid phosphatase, β-N·acetyl galactosaminidase, β-N·acetyl glucosaminidase, α-mannosidase, acid proteinase는 혼합 120시간 동안 아메바내에서 더 높은 효소 활성도를 나타내었으며, neutral proteinase의 활성도는 경과시간이 지남에 따라 아메바내에서는 일정하였지만 그 배양액인 EBSS용액내에서는 점점 높아짐을 알 수 있었다. 이상의 성적으로 보아 마우스에서 수막뇌염을 일으키는 A. cuzbertsoni는 비 병원성인 A. reyreba와 비교할 때 여러 종류 가수분해 효소들의 활성도에 현저한 차이를 나타내고 있음을 알 수 있었다. 또한 표적세포인 CHO세포에 대한 A. cuzbertsoni의 세포독성은 강함을 알 수 있었고, 이 때 몇 종류 가수분해 효소들의 환성도도 높게 나타났으며, 이러한 소견이 A. culbertsoni의 병원성과 관련이 있을 것으로 추측되었다.

• BMB Reports
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• 제29권4호
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• pp.380-385
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• 1996

Ovomucoid third domain is a serine proteinase inhibitor protein which consists of 56 amino acid residues. A fifty picosecond molecular dynamics (MD) simulation was carried out for ovomucoid third domain protein with 5 $\AA$ layer of water molecules. A comparison of main chain atoms in the MD averaged structure with the crystal structure showed that most of the backbone structures are maintained during the simulation. Investigation of the intramolecular hydrogen bondings indicated that most of the interactions between main chain atoms were conserved, whereas those between side chains were reorganized for the period of the simulation. Especially, the side chain interactions around the scissile bond of reactive site P1 (Met18) were found to be more extensive for the MD structures. During the simulation, hydrogen bonds were maintained between the side chains of Glu19 and Arg21 as well as those of Thr17 and Glu19. Extensive side chain interactions observed in the MD structures may shed light on the question of why protein proteinase inhibitors are strong inhibitors for proteinases rather than good substrates.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제38권3호
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• pp.159-166
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• 2000

The present study intended to verify activities of cysteine proteinase of Pneumocystis carinii from rats and to purify the enzyme. In order to exclude the contamination of host-derived enzymes, concentrates of P. carinii was primarily treated with a mixture of proteinase inhibitors before Iysis of P carinii. A 68-kDa cysteine proteinase was finally purified from the crude extract of P. carinii by 4 sequential chromatographic methods. The enzyme showed an optimal activity at pH 5.5 in 0.1 M sodium acetate, and its activity was specifically inhibited by L-trans-epoxy-succinylleucylamido (4-guanidino) butane (E-64) and iodoacetic acid, suggesting that the enzyme is a cysteine proteinase. The 68-kDa proteinase weakly digested rnacrornolecules such as collagen, hemoglobin and fibronectin. The present study demonstrated the activity of cysteine proteinase at the 68-kDa band of P. carinii, and purified and characterized the molecule.

• 한국작물학회지
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• 제49권4호
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• pp.342-348
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• 2004

Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis of the $60\%$ isopropanol extract of soybean(Glycine max [L.] Merr.) seed revealed two abundant proteins with molecular masses of 19 and 10 kDa. Amino acid analysis revealed that the isopropanol-extractable protein fraction was rich in cysteine. Two-dimensional gel electro-phoretic analysis indicated that the 19kDa and 10kDa proteins had pI of 4.2 and 4.0 respectively. Peptide mass fingerprints of trypsin digests of the two proteins obtained using matrix-assisted, laser desorption/ionization-time of flight (MALDI-TOF) mass spectroscopy revealed the 19kDa protein was Kunitz trypsin inhibitor and the 10kDa protein was Bowman-Birk proteinase inhibitor. When resolved under non-denaturing conditions, the isopropanol-extracted proteins inhibited trypsin and chymotrypsin activity. Results presented in this study demonstrate that isopropanol extraction of soybean seed could be used as a simple and rapid method to obtain a protein fraction enriched in Kunitz trypsin and Bowman-Birk proteinase inhibitors. Since proteinase inhibitors are rich in sulfur amino acids and are putative anticarcinogens, this rapid and inexpensive isolation procedure could facilitate efforts in nutrition and cancer research.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제35권1호
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• pp.39-46
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• 1997

이 연구에서는 살아있는 질편모충의 단백질녈해효소가 인체 면역글로불린을 분해하는지 알아보고 질편모충에 의한 조직세포 독성에 있어서 단백질분해효소의 역할을 시험관내에서 관찰하였다 실험에 사용한 질편모충은 질염환자로년터 분리한 KT9 분리주이었으며 세포독성을 알아보기 위한 표적세포로는 HeLa 세포를 사용하였다 질편모충 단백질분해효소가 인체 면역글로불린을 분해하는지 관찰하고자 인체의 분비 IP. 혈청 IgA 및 IgG를 살아있는 원충. 원충의 용출액 및 분비-배설 액과 DTT를 넣어 반응시켰다. 여러 계열의 단백질분해효소 저해제(aminopeptidase, serine, metallo, cystelrle계열)를 살아있는 질편모충과 미리 반응시킨 후 세척하고 면역글로불린의 분해 단백질분해효소 활성 및 조직세포독성에 미치는 영향을 관찰하였다 살아있는 질편모충은 인체의 분비 IgA. 혈청 IgA 및 IgG를 분해하였는데 질편모충 수가 증가할수록 반응시간이 길수록 분해가 더 잘 이루어졌다 질푄모충의 용출액과 분비-배설액도 분비 IgA. 혈청 IgA 및 IgG를 분해하였다. Cysteine, serine계 열의 단백질분해효소 저해제 (I-64 antipain, iodoacetic acid, iodoacetamide, TLCK)를 처리한 질편닐충은 분비 IgA의 분해를 저해하였으며. 단백질분해효소저해제로 처리한 경우 질편모충의 단백질븐해효소 활성은 감소하였고 HeLa세포에 대한 독성이 감소하였다. 이상의 성적을 종합하면 질편모충에서 분비되는 단백질분해효소는 시험관내에서 조직세포에 세포독성을 나타내며 또한 인체면역글로불린을 분해하여 숙주의 방어기전에 대한 도피물질로 작용하는 것으로 생각된다.