Objectives: The purpose of this study was to investigate the effects of 56 herbal formulae covered by the National Health Insurance Corporation (NHIC) on dementia-related biomarkers and neuronal cell changes. Methods: The 56 herbal formulae were extracted with 70% ethanol at $100^{\circ}C$ for 2 h. The antioxidant properties was measured by radical scavenging assay using ABTS+ radical. The acetylcholinesterase (AChE) activity was tested by Ellman's assay and $amyloid-{\beta}$ ($A{\beta}$) aggregation was determined using fluorescence method. To estimate the inhibitory effects of herbal formulae on neuronal cell death and inflammation using HT22 hippocampal cells and BV-2 microglia, respectively. Results: Among the 56 herbal formulae, Dangguiyukhwangtang, Banhasasimtang, Samhwangsasimtang, Cheongwiesan, Hwangryunhaedoktang, Banhabaekchulchunmatang, Jaeumganghwatang, Cheongseoikgitang, and Hoechunyanggyuksan has a significant inhibitory effects on acetylcholinesterase (AChE) activity. Doinseunggitang and Samhwangsasimtang exerted the effect on the inhibition of $amyloid-{\beta}$ ($A{\beta}$) aggregation. Additionally, 10 herbal formulae affected AChE and $A{\beta}$ aggregation revealed antioxidant activity as well as neuroprotective and anti-neuroinflammation effects in neuronal cell lines. Conclusions: 10 herbal formulae that have been shown to be effective against the major dementia markers have been shown to have antioxidant activity, neuronal cell protection and inhibition of brain inflammation. Further investigation of these herbal formulae will need to be validated in dementia animal models.
잎녹차 추출물 보다는 분말녹차 추출물의 경우가 그리고 저장된 sample보다는 fresh sample의 AChE 저해활성이 상대적으로 높았고 이는 생리활성 물질의 추출효율성과 생리활성 물질의 특성 변화 측면에서 기인되는 것으로 판단된다. 또한 본 연구팀에서 구성한 저장 조건에서, 4주간의 짧은 저장기간이 3개월 저장조건보다는 우수한 효소 저해활성도를 나타냈다. 수분활성도 측면에서는 수분활성도 0.81의 조건을 갖는 sample에서의 효과가 비교적 우수했고, 3개월 저장하는 동안의 저장온도 조건은 효소 저해 활성도에 큰 차이를 보이는 요소로 작용하지 못했다. 다만 상온이나 냉장조건 보다는 냉동상태의 저장조건이 다소 우수한 것으로 판단된다. 결국 생리활성물질을 보다 효율적으로 추출할 수 있는 녹차의 상태와 처리 또는 섭취 농도가 더욱 중요한 것으로 사료되고, 추출 효율을 증가시키기 위해서는 잎 보다는 분말의 상태가 더 우수한 것으로 판단된다. 따라서 녹차 추출물은 acetylcholine성 신경세포의 기능을 강화시켜줄 수 있는 AChE 저해제로서 활용가치가 높을 것이다.
The acetylcholinesterase (AChE) inhibitor of Yarrowia lipolytica S-3 was maximally produced when it was incubated at $30^{\circ}C$ for 36 h in an optimal medium containing 1% yeast extract, 2% peptone and 2% glucose, with an initial pH 6.0. The final AChE inhibitory activity under these conditions was an $IC_{50}$ value of 64mg/ml. After partial purification of the AChE inhibitor by means of systematic solvent extraction, the final $IC_{50}$ value of the partially purified AChE inhibitor was 0.75 mg/ml. We prepared a test product by using the partially purified AChE inhibitor and then determined its stability for the development of a new antidementia commercial product. The test product was stable at room temperature for 15 weeks.
다양한 영양성분을 함유할 뿐만 아니라 생리활성이 우수한 참죽의 기능성 식품소재로의 이용가능성을 확인하고자 참죽으로부터 폴리페놀을 추출하고 이들의 생리기능성을 측정하였다. 이를 위해 동결건조된 참죽분말을 열수, 에탄올 및 효소(Viscozyme, Shearzyme)를 이용하여 폴리페놀을 추출하고 추출방법에 따른 폴리페놀 분획의 기능적 특성을 비교하였다. 참죽으로부터 추출된 폴리페놀 분획의 수율은 VphF가 43.44%로 가장 높았으며, 그 다음 SphF, WphF, EphF 순으로 나타났다. 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량은 EphF가 각각 447.98 mg GAE/g 및 337.49 mg QE/g으로 가장 높은 함량을 보였다. 산화방지 활성을 측정한 결과, DPPH 라디칼 소거능, ABTS 라디칼 소거능, $Fe^{2+}$ 킬레이팅 효과 및 환원력 모두 EphF가 유의적으로 가장 높았다. Acetylcholinesterase 저해활성을 측정한 결과, 저농도에서는 EphF가, 고농도에서는 WphF가 가장 높은 활성을 보였다. ${\alpha}$-glucosidase 저해활성은 EphF, VphF, SphF, WphF 순으로 높은 활성을 보였으며, 특히 EphF, SphF, VphF는 대조군인 아카보스보다 유의적으로 높은 활성을 보였다. Tyrosinase 저해활성 측정 결과, 2 mg/mL 농도에서 모든 추출군은 50% 이상의 저해활성을 보였다. 이상의 연구 결과, 참죽의 폴리페놀 분획은 우수한 산화방지 활성뿐만 아니라 ${\alpha}$-glucosidase, acetylcholinesterase, tyrosinase 효소에 대한 높은 저해활성을 보였으며, 특히 에탄올추출 및 열수추출에 의해 얻어진 폴리페놀 분획은 뛰어난 산화방지 활성을 보였다. 이를 통해 참죽은 기능성 식품 소재로 활용가능성이 매우 높을 것으로 판단된다.
Luo, Heng;Li, Changtian;Kim, Jin Cheol;Liu, Yanpeng;Jung, Jae Sung;Koh, Young Jin;Hur, Jae-Seoun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제23권2호
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pp.161-166
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2013
At present, acetylcholinesterase (AChE) inhibitors are the first group of drugs to treat mild to moderate Alzheimer's disease (AD). Although beneficial in improving cognitive and behavioral symptoms, the effectiveness of AChE inhibitors has been questioned since they do not delay or prevent neurodegeneration in AD patients. Therefore, in the present study, in order to develop new and effective anti-AD agents from lichen products, both the AChE inhibitory and the neuroprotective effects were evaluated. The AChE inhibitory assay was performed based on Ellman's reaction, and the neuroprotective effect was evaluated by using the MTT method on injured PC12 cells. One AChE inhibitor ($IC_{50}$ = 27.1 ${\mu}g/ml$) was isolated by means of bioactivity-guided isolation from the extract of lichen-forming fungus Cladonia macilenta, which showed the most potent AChE inhibitory activity in previous screening experiment. It was then identified as biruloquinone by MS, and $^1H$- and $^{13}C$-NMR analyses. The inhibitory kinetic assay suggested that biruloquinone is a mixed-II inhibitor on AChE. Meanwhile, biruloquinone improved the viability of the $H_2O_2$- and ${\beta}$-amyloid-injured PC12 cells at 1 to 25 ${\mu}g/ml$. The protective effects are proposed to be related to the potent antioxidant activities of biruloquinone. These results imply that biruloquinone has the potential to be developed as a multifunctional anti- AD agent.
본 연구에서는 해조류 추출물 20종의 치매 예방 및 개선 소재로서의 가치를 검토하기 위해 총폴리페놀 함량, ABTS radical 소거능, acetylcholinesterase(AChE) 저해 활성, ${\beta}$-secretase 효소 억제 활성 및 신경세포 보호 효과를 비교하였다. 해조류 추출물의 총폴리페놀 함량과 ABTS radical 소거능을 측정한 결과 감태 추출물의 총폴리페놀 함량이 가장 높았으며, 검둥감태와 감태 추출물이 높은 ABTS radical 소거능을 나타내었다. AChE 저해 활성을 검토한 결과 감태, 검둥감태, 바위수염이 30% 이상의 높은 저해 활성을 보였고 그중 감태가 가장 높은 억제율을 나타내었다. 또한, ${\beta}$-secretase 효소 억제 활성은 검둥감태, 감태, 왜모자반 추출물에서 관찰되었다. $H_2O_2$에 의해 유도된 신경세포 독성에 대한 보호 효과는 감태, 검둥감태, 왜모자반 추출물 $100{\mu}g/mL$ 농도에서 관찰되었다. 이상의 결과로 미루어 보았을 때 감태 추출물이 치매 예방 및 개선제로서의 활용 가능성이 가장 뛰어난 것으로 생각되며, 추가로 생리활성 물질 구명 및 작용기전 입증을 위한 후속 연구가 진행되어야 할 것으로 생각한다.
본 연구에서는 말뚝버섯의 자실체 메탄올 추출물의 항산화, cholinesterase 저해 및 항염증 효과를 탐색하였다. DPPH 라디칼 소거능, hydroxyl radical 소거능, 철 이온 제거능 및 환원력 등의 항산화 효과를 측정한 결과 DPPH 라디칼 소거능, hydroxyl radical 소거능 및 환원력은 양성대조군으로 사용한 BHT에 비해 낮았으나 실험에 시용한 2.0 mg/ml의 농도에서 50% 이상의 저해효과를 나타내었고 철 이온 제거능은 BHT에 비해 높게 나타나서 다른 종류의 식의약용 버섯에 비해 항산화 효과가 우수하였다. 치매환자의 기억력 감퇴와 관련된 acetylcholinesterase와 butyrylcholinesterase의 저해실험에서 말뚝버섯 자실체의 메탄올 추출물은 실험에 사용한 전 농도 범위에서 양성대조군인 galanthamine에 비해 유의하게 낮았지만 1.0 mg/ml의 농도에서 50% 이상의 저해 효과를 나타냈다. In vitro 항염증 실험에서 RAW 264.7 대식세포에 서로 다른 농도의 메탄올 추출물을 처리한 후 염증 유발물질인 LPS를 처리하여 RAW 264.7 세포가 생성한 NO의 양을 측정한 결과 추출물을 투여한 실험군의 NO 농도가 LPS만 단독으로 처리한 양성대조군에 비해 유의하게 낮았고 처리한 메탄올 추출물의 농도가 증가함에 따라 생성된 NO의 양은 유의하게 감소하는 경향을 나타났다. 또한 in vivo 항염증 실험에서 먼저 각기 다른 농도의 메탄올 추출물을 생쥐의 뒷발에 주사한 후 추가로 기염제인 carrageenan을 주사하여 흰쥐 뒷발에 유도된 부종 (edema)이 추출물에 의해 저해되는 정도와 염증 치료제로 처방되는 indomethacin을 양성대조군으로 하여 실험을 진행하였다. 실험 결과 흰쥐에 주사한 말뚝버섯 자실체의 메탄올 추출물의 농도가 증가함에 따라 흰쥐 뒷발에 유도된 부종의 용적도 농도 의존적으로 유의하게 감소하는 것이 관찰되어 말뚝버섯 자실체에는 염증을 저해하는 성분이 함유되어 있는 것으로 사료되었다. 따라서 말뚝버섯 자실체의 메탄올 추출물에는 항산화, acetylcholinesterase과 butyrylcholinesterase의 저해 및 항염증 효과를 나타내는 유용 성분이 함유되어 있어 앞으로 의약용 기초 소재로서의 이용 연구가 필요하다고 사료된다.
Yun, Beom-Sik;Lee, Mi-Ra;Oh, Chang-Jin;Cho, Jeong-Hee;Wang, Chun-Yan;Gu, Li Juan;Mo, Eun-Kyung;Sung, Chang-Keun
Journal of Ginseng Research
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제34권4호
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pp.348-354
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2010
Black ginseng and white ginseng were extracted with 80% ethanol and evaluated for relative ginsenoside composition, acetylcholinesterase (AChE) and butyrylcholinesterase (BChE) inhibitory activities, and antioxidant properties. As analyzed by HPLC, black ginseng contained a greater proportion of ginsenoside $Rg_3$ compared to white ginseng. White ginseng was characterized by undetectable ginsenoside $Rg_3$ but it contained more total ginsenosides than black ginseng. Black ginseng extract exhibited higher (p<0.05) free radical-scavenging activity, as well as higher antioxidant activities than white ginseng against 2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl, superoxide dismutase, and xanthine oxidase, despite the fact that the total saponin content was higher in white ginseng than black ginseng. In addition, the black ginseng extract displayed greater AChE and BChE inhibitory activities. These results suggest that black ginseng has stronger effects on anti-oxidation and AChE and BChE inhibition than white ginseng.
Alzheimer's disease (AD) is a progressive neurodegenerative disorder symptomatically characterized by impairment in memory and cognitive abilities. AD is characterized pathologically by the deposition of ${\beta}$-amyloid ($A{\beta}$) peptides of 40-42 residues, which are generated by processing of amyloid precursor protein (APP). $A{\beta}$ has been believed to be neurotoxic and now is also considered to have a role on the mechanism of memory dysfunction. In this study, we tested that EtOH extract of the fruits of Chaenomeles sinensis Koehne (CSE) affects on the processing of APP from the APPswe over-expressing Neuro2a cell line. We found that CSE increased over 2 folds of the $sAPP{\alpha}$ secretion level, a metabolite of ${\alpha}$-secretase. We showed that CSE reduced the secretion level of $A{\beta}42$ and $A{\beta}40$ by down regulation of ${\beta}$-secretase (BACE) without cytotoxicity. Furthermore, we found that CSE inhibited BACE and acetylcholinesterase activity in vitro. We suggest that Chaenomelis Fructus may be an useful source to develop a herbal medicine for AD.
Two known farnesylacetone derivatives (1 and 2) were isolated from the Korean brown alga Sargassum sagamianum off Jeju Island, Korea. Compounds 1 and 2 were identified as (5E,10Z)-6, 10, 14-trimethylpentadeca-5, 10-dien-2, 12-dione and (5E,9E,13E)-6, 10,4-trimethylpentadeca-5,9,13-trien-2,12-dione, respectively, by comparison with the literature data. Compounds 1 and 2 showed moderate acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase inhibitory activities with $IC_{50}$ values of 65.0∼48.0 and 34.0∼23.0 $\muM$, respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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