본 연구에서는 dextransucrase hyper-producing Leuconostoc mesenteroides B-512FMCM과 dextransucrase constitutive mutants인 B-742CB 및 B-1355C에서 얻은 dextransucrase 및 alternansucrase를 이용하여 maltose, lactose, gentiobios 및 raffinose의 수용체반응을 수행하였다. B-512FMCM의 경우 수용체로서 maltose와 gentiobiose는 설탕에 대한 농도비가 1/1이하일 때 수용체에 ${alpha}$l-6으로 D-glucose가 결합한 일련의 올리고당을 생성하였고, 9/1이상에서는 단 두 가지의 수용체산물로서 maltose의 경우에는 panose와 isomaltosyl maltose를, gentiobiose의 경우에는 6$^2$-${alpha}$-D-glucopyranosyl gentiobiose와 isomaltosyl gentiobiose만을 생성하였다. 그러나 lactose는 유일한 산물인 2$^1$-${alpha}$-D-glycopyranosyl lactose만을 생성하였다. 효소양의 변화에 대해서 maltose와 gentiobiose의 수용체반응에서 생성된 수용체산물(올리고당)의 수와 양은 효소양이 증가함에 따라 증가하였으나 lactose의 경우에는 효소양의 증가에 대해 수용체산물 양의 변화가 크지 않았다. B-742CB dextransucrase와 B-1355C alternansucrase를 사용하면 B-512FMCM dextransucrase에서는 단 한가지만의 수용체산물을 생산하였던 lactose와 raffinose를 수용체로 하여 여러 가지의 수용체산물(올리고당)을 생산하였다.
KIM, MIN-JEONG;PARK, HAE-EUN;SUNG, HEE-KYUNG;PARK, TACK-HYUN;CHA, JAE-HO
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제15권1호
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pp.99-104
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2005
Microbacterium laevaniformans levansucrase synthesized various hetero-oligosaccharides by transferring fructosyl residue from sucrose to various saccharides as acceptors. The acceptor specificity test showed that reducing saccharides were more favorable acceptors than nonreducing saccharides. The transfructosylated product, fructosyl galactose, was produced in the presence of D-galactose as an acceptor. The chemical structure of the resulting fructosyl galactose was analyzed by yeast invertase and NMR, and identified as O-$\alpha$-D-galactosyl-(1${\to}$2)-$\beta$-D-fructofuranoside. These results indicate that the main transfructosylation activity of the enzyme is to make nonreducing transferred products via a transfer of fructosyl residue to acceptor molecules having reducing group. When nonreducing sugars, such as methyl $\alpha$-D-glucoside and methyl $\alpha$-D-galactoside, were used as an acceptor, the transfer product was also formed in spite of the reducing group blocked with methyl group. The fact that no transfer product was formed with sugar alcohols as acceptors was suggested to be due to marked conformational difference of acceptors.
Kim, Myo-Deok;Jung, Dong-Hyun;Seo, Dong-Ho;Jung, Jong-Hyun;Seo, Ean-Jeong;Baek, Nam-In;Yoo, Sang-Ho;Park, Cheon-Seok
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제26권11호
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pp.1845-1854
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2016
The transglycosylation activity of amylosucrase (ASase) has received significant attention owing to its use of an inexpensive donor, sucrose, and broad acceptor specificity, including glycone and aglycone compounds. The transglycosylation reaction of recombinant ASase from Deinococcus radiopugnans (DRpAS) was investigated using various phenolic compounds, and quercetin-3-O-rutinoside (rutin) was found to be the most suitable acceptor molecule used by DRpAS. Two amino acid residues in DRpAS variants (DRpAS Q299K and DRpAS Q299R), assumed to be involved in acceptor binding, were constructed by site-directed mutagenesis. Intriguingly, DRpAS Q299K and DRpAS Q299R produced 10-fold and 4-fold higher levels of rutin transglycosylation product than did the wild-type (WT) DRpAS, respectively. According to in silico molecular docking analysis, the lysine residue at position 299 in the mutants enables rutin to more easily position inside the active pocket of the mutant enzyme than in that of the WT, due to conformational changes in loop 4.
Benzene solution of trans-1,2-bispyrazylethylene and electron deficient olefin, tetracyanoethylene, as a ${\pi}$-acceptor gave 1,2-bispyrazyl-3,3,4,4-tetracyanocyclobutane, a 2${\pi}$ + 2${\pi}$ cycloaddition product, on irradiation with 350 nm UV light. Fluorescence studies revealed the reaction to proceed through a singlet exciplex. The fluorescence of trans-1,2-bispyrazylethylene was quenched very efficiently by tetracyanoethylene with the quenching constant of 1.6 ${\times}$ 10$^{10}$M$^{-1}$s$^{-1}$ while electron rich olefin, tetramethylethylene, did not quench the fluorescence of bispyrazylethylene.
The heterobimetallic anion, (OC)5CrMn(CO)5-M+ (M+=Na+, PPN+), which has a donor-acceptor metal-metal bond1, was reacted with allyl bromide to yield BrCr(CO)5- and Mn(CO)5(CH2CHCH2). The reaction mechanism has been proposed in terms of the consecutive reaction pathway in which Cr(CO)5(THF) is an important intermediate leading to the corresponding product. Counterion effect on this reaction was also evaluated and the results were compared with those of the corresponding reaction of the mononuclear carbonyl anion, Mn(CO)5-.
Quenching experiments by photoinduced electron transfer between a charged donor and a neutral acceptor were carried out in acetonitrile, dichloromethane and mixed solvents of acetonitrile and dichloromethane. Tris(2, 2'-bipyridine) ruthenium(II) ($[Ru(bpy)_3]^{2+}$) which has 2+ charge and dicyanobis (2, 2'-bipyridine) ruthenium(II) ($Ru(bpy)_2(CN)_2$) which has no charge were used as electron donors, and a series of tris(${\beta}$-diketonato) ruthenium (III) was used as acceptor. In dichloromethane, $[Ru(bpy)_3]^{2+}$ and its counter ions ($ClO{_4}^-$) form ion pair. In the estimate of ${\Delta}G$ of electron transfer, the electrostatic potential between counter ions and product ion pair produced by electron transfer must be taken into account. A similar effect of counter ions was found in mixed solvents of 10, 30, 50, 70 and 90% acetonitrile ratio in volume. The effect of counter ion on ${\Delta}G$ became smaller with the increase in acetonitrile ratio. The result in mixed solvents suggests that $[Ru(bpy)_3]^{2+}$ and its counter ions form ion pair even in 90% acetonitrile solution.
Glycosynthase는 친핵성 아미노산을 비친핵성 아미노산으로 치환하여 당전이 산물의 가수분해를 막아서 당전이 효율을 증가시킬 수 있다. 이전 연구에서 본 실험실은 열에 안정하고 산에 강한 Thermoplasma acidophilum 유래의 ${alpha}$-glucosidase (AglA)가 당전이 활성이 있음을 입증하였으나 시간이 지남에 따라 당전이 산물이 가수분해 되었다. 이러한 AglA의 당전이 효율을 개선하기 위하여 친핵성 아미노산인 아스파라긴산을 글리신으로 치환하였다. 이 치환된 glycosynthase는 니켈 친화력 크로마토그래피를 통하여 정제되었으며, 정제된 돌연변이 단백질의 배당체를 합성하는 능력이 말토오스를 공여체로 그리고 p-nitrophenyl-${alpha}$-D-glucopyranoside($pNP{\alpha}G$)를 수용체로, 그리고 $pNP{\alpha}G$가 당공여체 및 수용체로 이용될 수 있는지 검사하였다. Glycosynthase를 이용한 당전이 산물의 수율은 약 42.5%를 보였으며 시간이 지남에 따라서 가수분해되지 않았다. 박막 크로마토그래피법을 이용한 반응산물의 분석은 수용체의 높은 농도에서 기존의 효소보다 많은 양의 배당체를 합성할 수 있음을 보여주었고, 특히 중성보다 낮은 pH 영역에서 가장 높은 활성을 보여줌을 확인하였다. 이러한 결과는 glycosynthase가 산업적으로 배당체를 합성하는데 유용성이 크다는 것을 나타낸다.
본 연구는 디지털기기 사용성향을 구성하는 요인들을 밝히고, 세대를 구분하는 것에 연구목적이 있다. 이를 위해 51개 문항으로 구성된 설문을 이용하여, 15세에서 49세에 이르는 우리나라 일반 사용자들로부터 639부의 데이터를 수거하여 요인분석, 군집분석 등의 분석을 실시하였다. 그 결과, 디지털기기 사용성향을 구성하는 11개의 요인을 추출하고, 각각 관심, 오락성, 단순성, 조작불안감, 실용성, 개성, 조작일관성, 기능의 다양성, 조작법 습득, 고장의 책임성, 대여도로 명명하였다. 이어서, 요인점수를 변수로 하는 군집분석을 실시, 전체 조사대상자를 적극적 수용자형, 소극적 추종자형, 보수적 무관심형으로 명명된 3개 군집으로 분류하였다. 그리고 연령을 변인으로 하는 교차분석을 반복적으로 실시한 후, 그 결과들을 종합함으로서, 연령이 군집출현에 강한 영향을 준다는 것을 확인하였고, 이를 바탕으로 1727세대, 2834세대, 3538세대, 3949세대의 4개가지로 세대구분하였다. 세대 외에 성별, 소득, 학력, 직업 등의 인구통계화적 변인들은 사용성향에 큰 영향을 주는 변인이 아님을 확인하였다. 이어, 이러한 세대구분 연구결과를 제품사용경험에 대한 코호트맵 선행연구결과와 비교함으로서, 3538 세대가 분기점 역할을 하는 원인에 대해 고찰하였다.
Proton transfer reaction is one of the most fundamental processes in chemistry and life science. Excited state intramolecular proton transfer (ESIPT) has been studied as a model system of the proton transfer, since it can be conveniently initiated by light. We report ESIPT reaction dynamic of 1-hydroxy-anthraquione (1-HAQ) in solution by highly time-resolved fluorescence. ESIPT time of 1-HAQ is determined to be $45{\pm}10$ fs directly from decay of the reactant fluorescence and rise of the product fluorescence. High time resolution allows observation of the coherent vibrational wave packet motion in the excited state of the reaction product tautomer. The coherently excited vibrational mode involves large displacement of the atoms, which shortens the distance between the proton donor and the acceptor. With the theoretical analysis, we propose that the ESIPT of 1-HAQ proceeds barrierlessly with assistance of the skeletal vibration, which in turn becomes excited coherently by the ESIPT reaction.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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