• 한국약용작물학회지
• /
• 제14권4호
• /
• pp.195-201
• /
• 2006

미생물 및 동물에 비해 식물에서는 혈전용해효소에 대한 연구가 매우 부족한 실정이며, 기존의 혈전용해효소가 가지는 혈전에 대한 비특이적, 부작용, 고가 등의 단점을 해결할 수 있는 새로운 혈전용해효소의 개발을 위하여 동백의 종자, 종피, 유엽 그리고 성엽으로부터 추출된 수용성 단백질의 혈전용해활성을 조사하였다. 각각의 동백부위로부터 추출된 조효소 용액은 기존 혈전 용해효소인 plasmin과 양성 대조군으로 하여 비교하여 fibrin agarose plate로 확인한 결과 fibrin clot을 효과적으로 분해하였다. 그 중 단백질 분해효소의 활성이 다른 부위보다 20-33배로 높았던 동백종자와 종피의 수용성 추출물의 혈전용해활성은 양성 대조군인 plasmin과 비교하여 1.6-2.0배의 높은 활성을 나타내었다. 전체 수용성 단백질은 30-80%황산암모늄을 이용하여 농축하였으며 혈전용해효소는 fibrin zymography를 수행하여 확인하였다. SDS-PAGE에 의하여 동백유엽의 혈전용해효소 분자량을 측정한 결과 45 kDa으로 단일 polypeptide임을 확인하였으며, 각종 pretense 저해제에 의한 영향을 조사한 결과 PMSF,그리고 TLCK에 강력하게 저해되는 것으로 보아 동백유엽의 혈전용해효소는 trypsin과 유사한 serine protease의 하나로 생각되었다. 그러나 EDTA와 DTT처리에 의해서는 효소활성의 저해가 두드러지게 나타나지 않고 오히려 증진된 양상을 확인할 수 있었다. 또한, 효소 활성에 미치는 pH 및 온도의 효과는 약간의 산성쪽에 가까운 pH 5.5와 $30^{\circ}C$에서는 최적의 활성을 나타내었으며, $45^{\circ}C$ 이상의 온도에서는 효소활성이 급격히 감소하였다. 이상의 모든 결과로 볼 때 동백유엽의 혈전용해효소는 trypsin과 유사한 serine protease에 속하는 혈전용해효소임을 확인할 수 있었다.

• 동의생리병리학회지
• /
• 제28권1호
• /
• pp.35-44
• /
• 2014

This study was performed to investigate the anti-photoaging effects of Persimmon leaf tea(PLT) in hairless mice(SKH-1) exposed to UVB radiation. The animals were divided into non-treated group (normal, N) and UV-radiated groups. UV-radiated groups were divided into only UV-radiated group(control, C) and UV-radiated and PLT treated experimental groups[first extraction treated group(PLT-I), second extraction treated groupe(PLT-II), and third extraction treated group(PLT-III)]. Three PLT treated experimental groups of mice were treated with both oral administration(300mg/Kg B.W./day) and topical application (100 ul of 2% conc./mouse/day) for 4 weeks. Anti-photoaging effects of Persimmon leaf were evaluated by MTT assay, anti oxidative reaction, MMP immunohistochemistry, gelatin zymography assay and RT-PCR observations. Treatment with Persimmon leaf tea(PLT)-I, and -III groups decreased immunohistochemical density of matrix metalloproteinases(MMP)-3 and -9 related to degradation of extracellular matrix in skin. Especially, immunohistochemical density of MMP-2 decreased in PLT-I, -II and -III groups in skin. On the effects of antioxidant function on the treatment with Persimmon leaf tea(PLT), treatment of HaCaT cells with extracts of PLT-I and PLT-II had also significantly reduced intracellular ROS produced by UVB irradiation in a dose dependent manner(PLT-I, p<0.05, p<0.01, p<0.001; PLT-II, p<0.01, p<0.001). Gelatin zymography assay revealed that PLT-II and PLT-III (200 ug/ml) had inhibitory effect on MMP-9 expression in UVB-radiated HaCaT cells. Western blot analysis revealed that PLT-1, -II and -III groups down-regulates the expression of inflammatory associated genes(IL-$1{\beta}$) and PLT-1 and -II groups down-regulates the expression of TNF-${\alpha}$ in a dose dependent manner. Our study suggests that Persimmon leaf tea(PLT) extracts participates in inhibitory effects on the morphological and molecular experiments related to photoaging skin on UVB irradiated hairless mice.

• 생명과학회지
• /
• 제21권11호
• /
• pp.1501-1510
• /
• 2011

최근에 해양자원에 있는 동물, 해조류 곰팡이 세균에서 신규 잠재적인 후보약효제가 조사되어 왔다. 본 연구에서는 치료제를 탐색하기 위하여 암전이, 관절염, 만성염증 및 주름형성에 주요한 역할을 하는 기질금속단백질분해효소(s) (MMPs)를 목적효소로 이용하였다. 5종의 녹조류, 18종의 홍조류, 4종의 갈조류를 포함한 다양한 해조류가 사람피부섬유아세포 및 섬유아육종세포로부터 유래된 기질금속단백질효소에 미치는 영향을 gelatin zymography를 이용하여 조사하였다. 사람피부섬유아세포에서는 홍조류중에서 Laurencia okamurae, Polysiphonia japonica, Grateloupia lanceolate 및 Sinkoraena lancifolia에서 MMP-2 억제효과가 관찰되었다. 반면에 녹조류의 Enteromorpha compressa와 Enteromorpha linza, 갈조류의 Peltaronia bighamiae and Sargassum thunbergii에서는 MMP-2 활성화가 관찰되었다. 사람섬유아육종세포에서는 MMP-9 활성화가 갈조류인 Sargassum thunbergii, 홍조류의 Polysiphonia japonica, 녹조류의 Enteromorpha compressa와 Enteromorpha linza의 존재 하에서는 감소되었다. 본 연구에서 흥미로운 발견은 녹조류의 E. compressa와 E. linza 및 갈조류의 S. thunbergii는 정상세포에서는 MMP-2에 대하여 활성화 효과를 나타내었으나, 암세포에서는 MMP-9응 억제하는 효과를 나타낸 것이다. 이러한 결과는 녹조류의 E. compressa와 E. linza 및 갈조류의 S. thunbergii는 항암 효능을 발휘할 수 있는 성분을 함유하고 있다는 것을 암시하고 있다.

• 한국산림과학회지
• /
• 제18권1호
• /
• pp.17-22
• /
• 1973

생물체(生物體)가 가지고 있는 동위효소(同位酵素)는 그것을 지배(支配)하고 있는 유전자형(遺傳子型)에 의(依)해 여러가지 효소형(酵素型)을 나타낸다. 그러므로 소나무 clone 보존원(保存園)과 같이 접목법(接木法)에 의(依)해 영양번식(榮養繁殖)된 경우에는 만약 대목(臺木)이 접수(接穗)의 동위효소형(同位酵素型)에 직접적(直接的)인 영향(影響)을 미치지 않는다면 동위효소(同位酵素)를 이용(利用)하므로써 어떤 제한(制限)된 범위내(範圍內)에서는 감별(鑑別)이 가능(可能)할 것이다. 본(本) 연구(硏究)는 상기(上記) 가능성(可能性)을 확실(確實)히 알아내기 위하여 각(各) 개체(個體)마다 산지(産地)가 다른 소나무 수형목후보목(秀型木候補木)에서 접목법(接木法)에 의(依)해 조성(造成)된 clone 보존원(保存園)의 clone 중(中) 8개(個) clone의 48개(個) ramet에 대(對)한 과산화동위효소형(過酸化同位酵素型)을 조사연구(調査硏究)하였다. 8 clone 중 같은 효소형(酵素型)을 나다낸 것은 충북(忠北)3호(號)(CB-3)의 경기(京畿) 1호(號)(KK-l)였으나 이들도 평균활성도(平均活性度)에는 차이(差異)가 난다. 같은 clone 내(內)의 ramet 간(間) 효소형(酵素型)은 같이 나타나서 대목(臺木)이 접수(接穗)의 효소형(酵素型)에 직접적(直接的)인 영향(影響)을 마치지 않음을 보여 주었다. 48개(個) ramet 중 4개(個) ramet가 같은 clone 내(內)의 다른 ramet와는 그 효소형(酵素型)이 달랐다. 이상의 결과(結果) 소나무 접목(接木) clone을 과산화동위효소(過酸化同位酵素) 이용(利用) 감별(鑑別)할 수 있음을 시사(示唆)하였다.

• 한국동물번식학회:학술대회논문집
• /
• 한국동물번식학회 2004년도 춘계학술발표대회
• /
• pp.224-224
• /
• 2004

Plasminogen activators (PAs)는 자궁분비액, 난포액, 정장물질 등을 포함한 여러 가지 세포외 분비액(extracellular fluids) 및 plasma에 풍부하게 존재하는 세포외 전구효소인 plasminogen을 plasmin으로 전환시키는 단백질분해효소이다. PAs는 섬유소용해, 배란, 착상 및 수정을 포함한 다양한 생리적인 과정에서 중요한 역할을 수행하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 본 연구는 돼지의 체외수정 과정시 정자와 난자에서의 plasminogen activators activity의 변화를 SDS-PAGE와 zymography를 이용하여 검토하였다. (중략)

• 약학회지
• /
• 제50권4호
• /
• pp.228-233
• /
• 2006

Matrix metalloproteinase-2 is known to be involved in pathological processes such as tumor invasion or rheumatoid arthritis. A soil microorganism producing siderophore under low iron stress $(up\;to\;5\;{\mu}m\;of\;iron)$ was identified as Burkholderia sp. Hydroxamate type siderophore produced by Burkholderia sp. CAS-5 was partially purified. MMP inhibitory activity of siderophore was confirmed by gelatin zymography. The $Zn^{2+}-chelating$ activity of siderophore correlated with the inhibition of MMP-2 activity.

• 동의생리병리학회지
• /
• 제28권5호
• /
• pp.520-529
• /
• 2014

The purpose of this study is to investigate the protective effects of Yukmijiwhang-tang(YM) water extracts against the UVB irradiation on the human keratinocyte HaCaT cells. We observed the effects of YM on the oxidative stress, gene expression of pro-inflammatory cytokine such as TNF-${\alpha}$ and IL-$1{\beta}$, and matrix metalloproteinase-9 in UVB-irradiated HaCaT cells. On the effects of oxidative stress and antioxidant function on the treatment with YM, The activity of xanthine oxidase(XO) was significantly decreased by treatment of YM in all the concentrations(p<0.01). The activity of superoxide dismutase(SOD) and catalase(CAT) was significantly increased by treatment of YM in a dose dependent manner(p<0.05 and p<0.01). DPPH radical was erased by treatment of YM under dose of $500{\mu}g/m{\ell}$ concentration. Treatment of HaCaT cells with YM had also significantly reduced intracellular ROS produced by UVB irradiation in a dose dependent manner(p<0.05, p<0.01, p<0.001). Gelatin zymography assay showed that YM downregulated the MMP-9 activity in UVB-irradiated HaCaT cells. RT-PCR analysis revealed that YM suppressed the expression of IL-$1{\beta}$ and MMP-9 however, it has no effects on the expression of TNF-${\alpha}$ and MMP-3. Our study suggests that Yukmijiwhang-tang exert protective actions on the UVB-irradiated HaCaT cells largely by anti-oxidative and anti-inflammatory processes.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
• /
• 제13권11호
• /
• pp.5709-5714
• /
• 2012

Objective: To evaluate the effects of curcumin on matrixmetalloproteinase-9 (MMP-9) and invasion ability induced by transforming growth factor-${\beta}1$ (TGF-${\beta}1$) in MDA-MB-231 cells and potential mechanisms. Methods: Human breast cancer MDA-MB-231 cells were used with the CCK-8 assay to measure the cytotoxicity of curcumin. After treatment with 10 ng/ml TGF-${\beta}1$, with or without curcumin (${\leq}10{\mu}M$), cell invasion was checked by transwell chamber. The effects of curcumin on TGF-${\beta}1$-stimulated MMP-9 and phosphorylation of Smad2, extracellular-regulated kinase (ERK), and p38 mitogen activated protein kinases (p38MAPK) were examined by Western blotting. Supernatant liquid were collected to analyze the activity of MMP-9 via zymography. Following treatment with PD98059, a specific inhibitor of ERK, and SB203580, a specific inhibitor of p38MAPK, Western blotting and zymography were employed to examine MMP-9 expression and activity, respectively. Results: Low dose curcumin (${\leq}10{\mu}M$) did not show any obvious toxicity to the cells, while $0{\sim}10{\mu}mol/L$ caused a concentration-dependent reduction in cell invasion provoked by TGF-${\beta}1$. Curcumin also markedly inhibited TGF-${\beta}1$-regulated MMP-9 and activation of Smad2, ERK1/2 and p38 in a dose- and time-dependent manner. Additionally, PD98059, but not SB203580, showed a similar pattern of inhibition of MMP-9 expression. Conclusion: Curcumin inhibited TGF-${\beta}1$-stimulated MMP-9 and the invasive phenotype in MDA-MB-231 cells, possibly associated with TGF-${\beta}$/Smad and TGF-${\beta}$/ERK signaling.

• 한국콘텐츠학회논문지
• /
• 제20권6호
• /
• pp.124-130
• /
• 2020

본 연구에서는 시스플라틴과 백작약 에틸아세테이트 분획물의 병용 처리에 의한 암세포 성장억제 및 PMA에 의해 유도된 MMP-2 및 MMP-9 암전이 억제 효과를 조사하였다. 세포생존율 측정은 MTS법에 의해 조사하였고, MMP-2/-9의 유전자발현과 활성은 RT-PCR과 Zymography법을 통하여 확인하였다. 결과에 의하면, 백작약, 시스플라틴의 농도가 증가함에 따라 세포 성장억제 효과가 증가함을 보였다. 또한, 단독 처리에 비해 200 μM의 시스플라틴과 50 ㎍/ml의 백작약 병용 처리에 의해서는 YD-10B 세포의 성장이 50% 감소하였다. PMA 처리된 YD-10B 세포에서 50 ㎍/ml의 백작약과 200 μM의 시스플라틴을 병용 처리하였을 때, MMP-2 및 MMP-9의 mRNA 발현과 단백질 활성들이 모두 유의하게 억제하였다. 그러므로 본 연구에서는 시스플라틴과 백작약의 병용 처리는 시스플라틴 단독 처리보다 구강암의 암 침윤을 억제할 수 있는 효과적인 항암제로서의 가능성을 기대할 수 있다.

• 한국융합학회논문지
• /
• 제8권1호
• /
• pp.107-114
• /
• 2017

본 연구는 생리활성이 우수한 천년초의 활용도를 높이기 위해 L. plantarum를 이용한 발효과정을 통해 얻은 추출물을 천년초의 열수추출물과 비교하여 특성을 확인하였다. 점성분석, 총폴리페놀, 아미노산 분석을 수행하였으며, 항박테리아 활성 및 사이토카인 분석, zymography 등을 통해 발효추출물의 특성을 연구하였다. 천년초 이용도를 절감시키는 점성도가 거의 절반 감소되고, 비타민 C의 양은 약간 감소하였으나 발효과정 동안 거의 유지되는 것으로 보이며, 총폴리페놀, 아미노산 총량 및 생리활성 주요 무기질 성분은 발효를 통해 증가함을 확인하였다. 또한 세포독성이 없음을 확인하고, 염증관련 사이토카인류와 MMP-9 활성도를 확인한 결과 천년초의 열수추출물에 비해 L. plantarum-발효 천년초에서 염증 억제 및 조직 파괴 억제 효과가 있는 것으로 확인되었다. 이러한 결과들은 유산균을 이용한 발효 천년초를 기능성을 부가한 소재로 활용하는데 있어 기초가 될 것으로 기대된다.