The purpose of this research was to investigate cytotoxicity of DangkwiYonghoe-Hwan(DYH) and the constitutive crude drugs on several cancer cell-lines, thymocytes, splenocytes and 3T3 cells. The DYH consists of Coptidis Rhizoma, Scutellariae Radix, Phellodendri Cortex, Gardeniae Fructus, Gentianae scabrae Radix, Indigo pulverata Levis, Aloe, Rhei Rhizoma, Moschus, Saussureae Radix and Angelicae Gigantis Radix. The cytotoxicity was determined by MTT method. The DYH inhibited the proliferation of MOLT-4, K562, HL-60, Jurkat, L1210, P815, S180 and Yac-1, thymocyte, splenocyte and 3T3 cells. The cytotoxicity of Coptidis Rhizoma on the cancer cell-lines was the most potent in the constitutive crude drugs. The proliferation of cancer cell-lines was partly inhibition and partly increase by the treatment of Scutellariae Radix, Gardeniae Fructus, Gentianae scabrae Radix, Indigo pulverata Levis, Aloe, Rhei Rhizoma, Moschus and Angelicae Gigantis Radix. Phellodendri Cortex and Saussureae Radix had a poor cytotoxicity on cancer cell-lines. Coptidis Rhizoma and Phellodendri Cortex inhibited the proliferation of thymocyte, splenocyte and 3T3 cells.
This study was undertaken to test the effects of Daturae Flos(DF) and Daturae Semen(DS) on the cellular and humoral immune responses, and the functions of the cells involved in immunoinflammation. Both extracts decreased the activity of superoxide dismutase, and the decrease was greater in the mouse group which was treated with DS. Both extracts decreased the phagocytic activity as measured by assessing the number of the latex particle within the phagocyte after incubation of peritoneal macrophages with fluorochrome-labelled latex particle and decreased natural killer cell activity as measured by enumerating the viable YAC-1 cells after treatment of target cells with splenic natural killer cells. Both extracts also decreased the cell-mediated immunity in vivo as assessed by measuring the ear thickness after sensitization and challenge with dinitrofluorobenzene, however, had no effects on the humoral immune responses as measured by checking hemolysin and hemagglutinin titers after immunization with sheep red blood cells(SRBC). Extracts of Semen caused decrease in the number of rosette forming cells between the splenic cells and SRBC. The results of this study suggested that both Daturae extracts could depress the immunoinflammation by affecting the various cell types involved in inflammation.
Positional cloning (map-based cloning) of mutations or genetic variations has been served as an invaluable tool to understand in-vivo functions of genes and to identify molecular components underlying phenotypes of interest. Mice homozygous for the cerebellar deficient folia (cdf) mutation are ataxic, with cerebellar hypoplasia and abnormal lobulation of the cerebellum. In the cdf mutant cerebellum approximately 40% of Purkinje cells are ectopically located within the white matter and the inner granule cell layer (IGL). To identify the cdf gene, a high-resolution genetic map for the cdf-gene-encompassing region was constructed using 1997 F2 mice generated from C3H/HeSnJ-cdf/cdf and CAST/Ei intercross. The cdf gene showed complete linkage disequilibrium with three tightly linked markers D6Mit208, D6Mit359, and D6Mit225. A contig using YAC, BAC, and P1 clones was constructed for the cdf critical region to identify the gene. A deletion in the cdf critical region on chromosome 6 that removes approximately 150kb of DNA was identified. A gene associated with this deletion was identified using cDNA selection. cdf mutant mice with the transgenic copy of the identified gene restored the brain abnormalities of the mutant mice. The positional cloning of cdf gene provides a good example showing the identification of a gene could lead to finding a new component of important molecular pathways.
The present study was designed to investigate the effects of Stachys Sieboldii MIQ as a new natural antitumor agent or immunomodulator. To obtain the above objectives, Stachys sieboldii MIQ was extracted with ethanol. Stachys sieboldii MIQ accelerated mouse spleen cell growth, but inhibited FM3A/S°-cell growth. However, no significant difference was found for CD4+ / CD8+ cells. The growth rates of CD4+ and CD8+ T cells were accelerated more than those normal mouse group. Stachys sieboldii MIQ fed mice showed a significant enhancement of IL-2 receptor expression, increased numbers of CD4+ T cells, and CD8+ T cells. Stachys sieboldii MIQ also stimulated the production of NO by peritoneal macrophages and the production of NO by and the growth of mouse spleen cells. On the other hand, lung localization of Bl6Fl0 melanoma cells was inhibited by ethanol extract of Stachys sieboldii MIQ. These results show that Stachys sieboldii MIQ is a useful new functional antitumor agent or immunomodulator.
The natural killer cell activity of splenocytes and TBC, active NK cells, recycling capacity of natural killer cells were observed by means of both the 51Cr-release cytotoxicity assay and single cell cytotoxicity assay against YAC-1. CSH/HeJ mice were infected intranasally with $1{\times}10^4{\;}or{\;}1{\times}10^5$ trophosoites of pathogenic Acanthamoeba culbertsoni. The infected mice showed mortality rate of 34% in $1{\times}10^4$ group and 65% in 1{\times}10^5 group, and mean survival time was $16.40{\pm}3.50$ {\;}and{\;}3.20{\pm}4.09$ days respectively. The cytotoxic activity of natural killer cells of the 2 groups was significantly higher than that of non-infected mice from the 12th hour to the 2nd day after infection, showing the highest on the first day. On the l0th day after infection, the cytotoxic activity of natural killer cells was significantly suppressed as compared with that of the control. There was no significant difference in NK cell cytotoxicity between two infected groups. The targetbinding capacity and active NK cells of natural killer cells in $1{\times}10^5$ trophosoite infected mice was significantly increased on the 12th hour and the first day after infection as compared with the control group. Maximal recycling capacity (MRC) was not changed during the observation period. The present results indicated that the elevation of natural killer cell activity in the mice infected with A. culbertsoni was due to elevation of target.binding capacity and increased active NK cells of natural killer cells, and not due to the maximal recycling capacity of the individual NK cell, and there was no difference between two experimental dose groups.
Intracavity frequency doubling of a single-mode Nd:YAG laser by using a nonplanar ring cavity is demonstrated. The nonplanar ring cavity consists of a Brewster-angled Nd:YAG crystal placed in a magnetic field, a KTP crystal, and two spherical mirrors. In this design the Nd:YAG block acts as both a nonreciprocal polarization rotator and a partial polarizer, and the nonplanar portion of the ring cavity, which is formed by a relative twist angle between the Brewster-angled end surfaces of the Nd:YAG block, serves as a reciprocal polarization rotator. An eigenpolarization theory for the cavity configuration is presented and suitable values of the relative twist angle for unidirectional operation are estimated. A single-mode output power of 22 ㎽ at 532 nm and an optical to optical conversion efficiency of 1.8% are obtained with a 1.2 W diode laser at 809 nm.
In order to study the clinical usefulness of crude polysaccharides fractionated from Eleutherococcus senticosus, EN-3, in eliminating tumors, we have investigated the effect of combination therapy on the murine tumor metastasis and growth models. In experimental metastasis of colon26-M3.1 cells, prophylactic intravenous (i.v.) administration of EN-3 (0.5, 5, and 50 $\mu\textrm{g}$/mouse) inhibited tumor metastasis compared with tumor control group in 33.6, 66.8, and 81.8% respectively. The administration of EN-3 (50 $\mu\textrm{g}$/mouse) also exhibited a 66.1% therapeutic effect on lung tumor metastasis. Although EN-3 induced no toxic effect on both tumor cell and normal splenocyte in the concentration below 100 $\mu\textrm{g}$/mι in in vitro, it induced significant proliferating activity on normal splenocyte in the concentration-dependent manner. In an analysis of NK-cell activity, i.v. administration of EN-3 (4∼100 $\mu\textrm{g}$/mouse) significantly augmented NK cytotoxicity to YAC-1 tumor cells. The combination treatments of cisplatin (10 $\mu\textrm{g}$) and EN-3 (5 $\mu\textrm{g}$) induced synergistic effect on the inhibition of tumor metastasis in experimental tumor metastasis model produced by colon26-M3.1 cells. In addition, the combination treatments also exhibited prolongation of lifespan in S∼180 tumor bearing mouse for over the 60 days. Even though cisplatin (2.5 $\mu\textrm{g}$/mι) exhibited cytotoxicity to tumor cells and inhibited tumor growth over 95% in in vitro, combination treatment with EN-3 (20 $\mu\textrm{g}$/mι) was induced splenocyte proliferation and produced cytokines, such as TNF-$\alpha$, IL-1 and IL-12, from the macrophages. These results suggested that EN-3 stimulate immune system non-specifically and apply to the biological response modifiers (BRM) in chemo-immunotherapy for tumor prevention.
Inhibitory effect of the lectins (KML-C) isolated from Korean mistletoe (KM; Viscum album coloratum) on tumor metastases produced by murine tumor cells (B16-BL6 melanoma, colon 26M3.1 carcinoma and L5178Y-ML25 lymphoma cells) was investigated in syngeneic mice. An intravenous (i.v.) administration of KML-C (20-50 ng/mouse) 2 days before tumor inoculation significantly inhibited lung metastases of both B16-BL6 and colon 26-M3.1 cells. The prophylactic effect of 50 ng/mouse of KML-C on lung metastasis was almost the same with that of 100 $\mu$ g/mouse of KM. Treatment with KML-C 1 day after tumor inoculation induced a significant inhibition of not only the experimental lung metastasis induced by B16-BL6 and colon 26M3.1 cells but also the liver and spleen metastasis of L5178Y-ML25 cells. Furthermore, multiple administration of KML-C given at 3 day-intervals after tumor inoculation led to a significant reduction of lung metastasis and suppression of the growth of B16-BL6 melanoma cells in a spontaneous metastasis model. In an assay for natural killer (NK) cell activity. i.v. administration of KML-C (50 ng/mouse) significantly augmented NK cytotoxicity against Yac-1 tumor cells 2 days after KML-C treatment. In addition, treatment with KML-C (50 ng/mouse) induced tumoricidal activity of peritoneal macrophages against B16-BL6 and 3LL cells. These results suggest that KML-C has an immunomodulating activity to enhance the host defense system against tumors, and that its prophylactic and therapeutic effect on tumor metastasis is associated with the activation of NK cells and macrophages.
An, Jung-Hwan;Cho, Mun-Young;Woo, Chan;Shin, Yong-Jin;Shin, Sun-Ho
The Journal of Internal Korean Medicine
/
v.35
no.1
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pp.79-91
/
2014
Objectives : To investigate the anti-cancer effect of Palbohoichoon-tang (PBHCT) extracts. Methods : The cell viability was assessed by 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MMT) assay and cell morphological changes were microscopically analyzed after staining with $10{\mu}M$ 2-[4-amidinophenyl]-6-indolecarbamidine dihydrochloride (DAPI) and TUNEL. We also analyzed expression of Bcl2, $Bcl_{xL}$, Bax, procaspase-3, procaspase-9, and procyclic acidic repetitive protein (PARP) by western blot method. Results : Observations showed that PBHCT induced the apoptotic cell death proved by increased sub-G1 phase cell population, apoptotic body formation and chromatin condensation. Western blot analysis of total cell lysates revealed that the PBHCT induced cleavage of caspase-9, caspase-3 and poly (ADP-ribose) polymerase (PARP). In addition, PBHCT dose-dependently increased the activity of caspase-9, caspase-3 and PARP-1. Furthermore, PBHCT reduced anti-apoptotic Bcl2, $Bcl_{xL}$ expression which contributed to the loss of mitochondrial membrane potential and the activations of caspase-9 and caspase-3. Conclusions : These findings suggest that PBHCT exerts anti-cancer effects on human neuroblastoma SH-SY5Y cells by inducing apoptotic death via down-regulation of anti-apoptotic proteins such as Bcl2 and $Bcl_{xL}$, up-regulation of pro-apoptotic proteins such as Bax, and activation of caspase cascades and PARP-1.
We demonstrate that glycoprotein isolated from Dioscorea batatas (GDB) has immunostimulatory effects including macrophage activation. Analysis of infiltration of inflammatory cells into peritoneal cavity showed GDB treatment significantly increased the recruitment of macrophages, lymphocytes, neutrophils, and monocytes into the peritoneal cavity. Treatment of spleen cells isolated from C57BL/6 mice with GDB significantly increased the proliferation of B cells and T cells induced by LPS and ConA, respectively. Treatment with GDB significantly increased the cytolytic capacity of NK cells and macrophages against YAC-1 and B16 cells, respectively. In order to further confirm and investigate the mechanism of GDB on macrophage activation, we analyzed the effects of GDB on the cytokine expression including iNOS, IL-1${\beta}$, and TNF-${\alpha}$ in mouse macrophage cell line, RAW 264.7 cells. RT-PCR and ELISA showed that GDB increased the expression of IL-1${\beta}$, and TNF-${\alpha}$, whereas iNOS was not induced by GDB. Collectively, this series of experiments indicates that GDB stimulates immune system including macrophage activation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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