토양으로부터 분리한 Xylose 발효효모 X-6-41 (Candida sp.)의 xylanase 효소생성 조건을 조사해 본 결과, 본 실험에 사용한 X-6-41 균주는 배지조성중 yeast extract 혹은 polypeptone이 첨가되면 xylanase 효소생성이 없었다. 즉 특정 아미노산인 isoleucine에 의해서는 그 생성이 억제되었고, tryptophan 25$\mu$g/$m\ell$ 농도의 존재하에서는 xylanase 생성이 증가했다.
Effect of arabinose on xylitol production from xylose by Candida parapsilosis KFCC 10875 was investigated at the different concentrations of arabinose. When the arabinose was added in xylose medium, the cell growth increased and the final cell concentration was maximum at 10 g/l arabinose. The consumption rate of arabinose was greatly lower than those of xylose and arabinose. Above 10 g/l arabinose, it was not completely consumed and then remained in the medium during xylitol fermentation. Estimated cell mass obtained from arabinose increased with increasing consumed arabinose. As arabinose concentration was increased, xylitol production decreased but ethanol production increased. The inhibitory effect of ethanol, a major by-product, on xylitol production was also studied. As the ethanol concentration added increased, xylitol production decreased. When cells were inoculated in a xylose medium after removing ethanol, xylitol production was not inhibited. This results suggested that the inhibition of xylitol production resulted from ethanol which was formed by adding arabinose. It was also interesting that total products(xylitol and ethanol) yield was constant regardless of the arabinose concentration. This result suggested that the total amount of products such as xylitol and ethanol from xylose was constant regardless of the arabinose concentration and arabinose shifted the carbon flow from xylitol to ethanol.
본 연구에서는 높은 수율로 xylitol을 생산하기 위하여 P. stipitis CBS 5776으로부터 xylitol dehydrogenase (XDH)의 활성이 결여된 변이균주의 개발과 xylitol 발효 특성에 관한 실험을 수행하였다. EMS를 처리하여 XDH defective 변이균주인 PXM-4를 최종적으로 선별하였고, 변이균주 PXM-4의 XDH 활성을 측정하여 XDH 활성이 완전히 제거된 변이균주임을 확인하였다. 변이균주 PXM-4의 xylitol 발효에서 가장 적합한 cosubstrate로서 galactose를 선정하였다. Galactose와 xylose의 혼합당 배지에서 xylitol 생산이 오히려 낮아졌고, 20 g/L 이상에서는 xylitol 생산이 호히려 낮아졌고, 20 g/L의 xylose를 이용한 xylitol 발효에서 가장 적합한 galactose의 농도는 20 g/L 이었으며, 생산된 xylitol의 농도는 14.4 g/L 이었고, 수율은 97% 이었다. 또한 잔존하는 xylose를 완전히 xylitol로 전환시키기 위하여 xylitol 농도가 증가되지 않는 시기에 glalactose를 첨가함으로써 최종 xylotil 농도를 25 g/L 까지 향상시켰다. 옥수수 속의 산 가수분해 용액을 이용한 xylitol 발효에서 배지 내 존재하는 xylose는 모두 xylitol로 전환됨으로 확인하였다. 이와 같은 결과에 따라 XDH defective 변이균주를 개발함으로써 높은 수율의 xylitol 생산이 가능함을 확인하였다.
국내외에서 분양 받고 국내식육에서 분리된 총 100균주의 Y. enterocolitica에 대한 병원성여부를 HEp-2세포 침투성 시험법을 기준으로 하고 여러 가지 병원성 확인 방법을 비교하였다. 혈청형만으로 병원성을 판단하기에는 충분하지 않았고 이외의 방법 즉, esculin과 salicin시험, pyrazinamidase 시험, biotype 등의 생화학적 특성에 바탕을 둔 실험 단독으로 병원성을 판단하기에는 완전하지 않았다. D-xylose 발효실험, CRMOX agar 시험과 자동응고반응(Autoagglutination)들은 병원성확인에 보조적인 역할만을 할 수 있었다. HEp-2 세포 침투성 시험법은 시간과 노력이 많이 소요되므로 이 방법을 대치할 수 있는 간단하고 신속, 정확하게 Y. enterocolitica 병원성을 확인할 수 있는 방법은 esculin시험에서 음성반응을 보이는 것만 PCR시험을 행하여 판별하는 것이라고 사려된다.
섬유성 가수분해물로부터 효율적으로 ethanol을 생산하는 세 가지 균주를 밀기울 당화액에서의 집적배양에 의해 토양에서 분리하였다. 효모인 KM-09와 KM-402 및 세균인 HG-225의 생리학적 및 생화학적 특성은 각각 Candida sp. 및 Klebsiella sp.과 거의 유사하였다. KM-09와 HG-225 균주는 발효당으로 xylose와 cellobiose를 이용하였고 HG-225는 발효시 넓은 당 이용성을 가졌다.
Pichia stiJitis CBS5776를 이용하여 6탄당과 5 탄당을 함유한 혼합당 배지에서의 에탄올 발효 특성 을 알아 보기 위한 실험을 수행하였다. 탄소원으로 사용된 당 중 에탄올 수율변에셔는 포도당, mann nose, galactose, xylose 순으로 5탄당보다는 6탄당 이 우수한 기절로 판명되었다. 포도당의 에탄올 수 율이 O.376g ethanol/g glucose로 제 일 높았으며, 다음으로 mannose의 에탄올 수율은 O.326g ethannol/g mannose이였다. Spent sulfite liquor와 같은 조성을 가진 혼합당 함유 배지에서 6탄당인 mannose, 포도당이 먼저 이용된 후 galactose와 5탄당인 xylose가 이용됨을 알 수 있었다. Arabinose가 단일 탄소원으로 존재할 경우, 일부가 균체 성장에 이용되였으나 혼합당 배지 에셔는 전혀 이용되지 못하였다. 발효 결과 최대 에 탄올 농도는 $12.2g/\ell$ 이었고, 에탄올 생산 수율은 0.332g ethanol/g sugar이었다.
Volumetric productivity를 향상시키기 위하여 미생물 재순환에 의한 연속 시스템을 이용하였다. 연속발효조의 연구에서 9.2g/1와 15.0,g/1의 범위의 세포 농도를 유지할 수 있었다. 4%의 xylose의 feed와 1.04g $O{_2}$hr-g DCW의 specific oxygen supply rate의 조건에서 희석율이 0.0349 h$^{-1}$ethanol 수율은 0.36이었다. Ethanol volumetric productivity는 같은 희석율에서 0.244g/hr-$\ell$로 증가하였으며 이것은 회분배양값의 260%이었다.
Medium optimization for xylitol production from xylose by Candida parapsilosis ATCC 22019 mutant was performed. Effect of various nitrogen sources on xylitol production was investigatied. Of inorganic nitrogenous compounds, ammonium sulfate was effective for xylitol production and yeast extract was the most suitable orangic nitrogen nutrient for enhancement of xylitol production. Effect of inorganic salts such as KH$_{2}$PO$_{4}$ and MgSO$_{4}$-7H$_{2}$0 on xylitol production was also studied. Optimal medium was selected as xylose of 50 g/l, yeast extract of 5 g/l, (NH4$_{4}$)$_{2}$SO$_{4}$ of 5 g/l, KH$_{2}$PO$_{4}$ of 5 g/l, MgSO$_{4}$-7H$_{2}$O of 0.2 g/l. In a fermentor by using the optimal medium, a final xylitol concentration of 37 g/l could be obtained from 50 g/l of xylose with a xylitol yield of 74% and a xylitol productivity of 0.58 g/1-hr. At 300 g/l xylose, fermentation was also carried out and then a final xylitol concentration of 242 g/l was obtained at 272 hours. It was corresponding to xylitol yield of 80.7% and xylitol productivity of 0.58 g/1-hr.
목질계 자원에 다량으로 함유되어 있는 xylose를 이용하기 위하여 xylose의 이성체인xylulose를 이용한 에탄올 발효를 실시하였다. Xylulose로부터 에탄올 생산의 최적조건을 찾기위해 xylulose의 농도, 발효 온도등을 변화시켜가면서 발효양상을 고찰하였다. 비성장속도는 xylulose농도 5g/l에서 최대값인 0.087g/l를 보여 주었으며, 에탄올 생성수율은 xylulose농도에 비례하여 증가하여 xylulose농도 16g/l에서는 최대이용율의 90%에 해당하는 0.49g EtOH/g xylulose를 얻었다. 발효온도의 영향에서는 에탄올 생성수율은 35에서 0.47 EtOH/g xylulose로 최대였고 비성장속도로 $35^{\circ}C$에서 최대값인 $0.087 1/hr^{-1}$을 보여주었다. 포도당과 xylulose를 공통기질로 사용하였을 경우, xylulose에 의한 성장속도가 증가하였다. 이는 먼저 자화된 포도당의 중간 대사산물이 xylulose의 대사작용을 촉진한 것이라 여겨진다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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