본 연구에서는 신이화에 함유된 물질을 열수와 에탄올을 이용하여 추출한 후 화장품약리활성 및 항염증효과를 확인하고, 화장품 및 바이오산업에 적용하기 위한 천연소재로써의 이용 가능성을 살펴보았다. DPPH 라디칼 소거능 실험결과 농도의존적으로 소거능 효과를 보이며, 열수추출물의 경우 5,000 ug/ml 농도에서 대조군인 BHA보다 우수한 효능을 보였다. SOD 유사활성에서는 농도가 증가할수록 유사활성이 증가하는 것을 확인할 수 있었고, 5,000 ug/ml에서 열수추출물의 경우 85% 유사활성을 나타내었고, 에탄올 추출물의 경우 43%의 유사활성을 나타내었다. Xanthine oxidase 저해능 실험에서도 5,000 ug/ml 농도에서 대조군 BHA 보다 높은 저해능을 효여 우수한 항산화효과를 보였으며, 합성항산화제를 대체할 수 있는 천연항산화제로 사용이 가능할 것으로 사료된다. 항염증효과를 확인하기 위하여 NO 저해 활성 및 iNOS 발현량을 측정하였는데, 열수와 에탄올 추출물 모두 농도가 증가할 수로 NO 저해활성과 iNOS 발현량이 감소하여 우수한 항염증효과를 보였다. 이상의 결과에서 신이화 열수추출물과 에탄올추출물은 우수한 화장품약리활성 및 항염증효과가 있음을 확인할 수 있었고, 안티에이징 및 트러블 피부 개선 화장품 소재로서의 가능성을 확인할 수 있었다.
본 연구에서는 Bovine bile에서 항산화 물질분획을 분리하고 이에 따른 항산화 효소들의 여러 활성효과를 측정하였으며 GC/FID에 의한 항산화성 물질의 패턴을 확인하였다. 항산화력은 Butylated hydroxy toluene(BHT)에 비해 Bovine bile의 EtOAc추출물(BBE)이 51.2%로 나타났고 xanthine oxidase를 측정 48.3%의 저해효과를 보였으며 glutatione-S-transferase의 활성은 85.7%의 활성이 나타났다. MTT방법에 의한 세포생존율의 조사에서는 6mM glutathione 투여에서 95%라는 생존율과 비교하여 20mg, 60mg의 BBE를 처리했을 때 56%와 65%, 140mg처리에서는 78%의 세포생존율이 나타났다. Bovine bile EtOAc추출물을 TLC로 분석한 결과 Rf값이 0.72에서 항산화 활성이 나타났고 이 분획을 methylation과 trimethysilyl(TMS) 유도체화를 시켜서 Gas Chromatography(FID)와 mass spectrum을 통한 성분 분석을 하고 bile acid의 구성분과 비교하여 계통분석을 실시한 결과 Coprostan-3ol로 추정되었다.
한방에서 건조된 뿌리를 '우슬'이라는 약재로 이용되는 쇠무릎의 잎과 줄기를 물과 에탄올을 용매로 추출하여 유용성분과 항산화 활성을 측정하였다. 폴리페놀과 플라보노이드 화합물의 총 함량을 측정한 결과 쇠무릎 잎의 물 추출물인 LWE에서 각각 58.27 mg/g과 42.22 mg/g으로 가장 많은 함량을 나타내었고, 단백질 함량에서도 LWE에서 16.42 mg/g으로 가장 많이 함유된 것으로 분석되었다. 환원당 함량은 줄기의 에탄올 추출물인 SEE에서 11.35 mg/g으로 가장 많았으며 전자공여능은 1.0 mg/mL의 농도에서 SEE가 93.41%로 가장 우수한 전자공여 효과를 보였다. SOD 유사활성능은 1.0 mg/mL의 농도에서 모든 추출물이 10% 미만의 낮은 활성을 나타내었다. 아질산염 소거능은 pH 1.2의 조건의 1.0 mg/mL의 농도에서 LWE가 94.90%의 가장 높은 아질산염 소거능을 나타내었으며, pH 3.0에서도 LWE가 45.20%로 가장 높은 소거 활성을 나타내었다. LWE는 1.0 mg/mL 66.67%로 가장 높은 XO 저해 효과를 나타내었으며, LEE와 SWE도 각각 31.17%와 32.06%의 XO 저해율을 나타내었다. 이상의 결과 쇠무릎 잎은 다량의 폴리페놀 및 플라보노이드 화합물을 함유하였으며 전자공여능과 SOD 유사활성능, 아질산염 소거 효과도 줄기보다 우수하며 식용 및 약용식물로 이용되는 여러 식물보다 우수하여 쇠무릎 잎을 식용뿐만 아니라 기능성 식품의 첨가제나 천연 항산화제로서 활용될 수 있을 것이라 판단된다.
Objective : To evaluate the effects of the reactive oxygen species (ROS) generated with a xanthine (X) and xanthine oxidase (XO) system on sperm function, the change of sperm characteristics, lipid peroxidation, and DNA fragmentation in bovine spermatozoa. Materials and Methods: ROS were produced using a combination of 1000 uM X and 50 mU/ml XO. The ROS scavengers: superoxide dismu tase (SOD) (200 U/ml) and catalase (500 U/ml) were also tested. Spermatozoa were incubated for 2 hours in BWW medium with a combination of X-XO supplemented with or without ROS scavengers at $37^{circ}C$ under 5% $CO_2$ incubator. Sperm movement characteristics by CASA (computer-aided sperm analysis), HOST (hypoosmotic swelling test), Caionophore induced acrosome reaction, malondialdehyde formation for the analysis of lipid peroxidation, the percentage of DNA fragmentation using the method of TdT-mediated nick end labelling (TUNEL) by flow cytometry were determined after 2 hours incubation. Results: The action of ROS on bovine spermatozoa resulted in a decreased in capacity for sperm motility, Ca-ionophore induced acrosome reaction and membrane integrity, an increased in malondialdehyde formation and the percentage of sperm with DNA fragmentation. In the effects of antioxidant, catalase completely alleviated the toxic effects induced by the ROS in terms of sperm function and characteristics, however SOD exhibited no capacity to reduce the toxic effects. Conclusion: The ROS can induce significant damages to sperm functions and characteristics. The useful ROS scavengers can minimized the defects of sperm function and various damages of spermatozoa.
This study was performed to investigate effect of dried powders and ethanol extracts of garlic flesh and peel on antioxidative capacity in 16-month- old rats. Forty Sprague-Dawley male rats weighing 618.1$\pm$6.5g were blocked into five groups according to body weight and raised for 3 months with experimental diets containing 5% (w/w) of dried powders of garlic flesh or peel, or ethanol extracts from equal amount of each dried powder. Total polyphenols, flavonoids, /3 -carotene, vitamin C, vitamin E, and total antioxidant status (TAS) levels were determined in garlic preparations. Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) levels in plasma, liver and VLDL + LDL fraction, oxidative DNA damage (8-hydroxy-2' -deoxyguanosine, 80HdG) in kidney, xanthine oxidase (XO) activities in plasma and liver, superoxide dismutase (SOD) activities in erythrocyte and liver, and carotenoid concentration, and total antioxidant status (TAS) in plasma were measured. Total polyphenols and flavonoids contents in garlic preparations were highest in peel ethanol extract. Vitamin C content was not different significantly among preparations, but peel powder contains slightly more vitamin C. The content of $\beta$-carotene was highest in peel ethanol extract and vitmain E content was highest in flesh ethanol extract. The highest level of TAS was observed in peel ethanol extract. Plasma TBARS levels in all the experimental groups were found to be significantly lower than control group, and TBARS concentration in VLDL + LDL fraction was decreased in all the experimental groups in comparison to control group. Also levels of 80HdG in kidney in experimental groups were lower than that of control group. Plasma and liver XO activities were. decreased in all experimental groups, and erythrocyte and liver SOD activities were higher in experimental groups compared to control group. All experimental groups also showed higher plasma TAS levels than control group. Especially, garlic flesh powder group was significantly lower in plasma and liver XO activities, and significantly higher in erythrocyte and liver SOD activities than control group. Moreover, plasma TBARS level and kidney 8OHdG level were decreased in flesh powder group. In conclusion, garlic diets showed effect of improving antioxidative capacity in 16-month old rats, especially, garlic flesh powder was prominent in inhibiting XO activity, promoting SOD activity and decreasing kidney 8OHdG level among experimental groups.
In order to eludidate the mechanism of oxidative stress in cultured spinal motor neurons damaged by oxygen free radicals, cytoxicity was assesed by MTT assay and NR assay after spinal motor neurons from mouse were cultured in media containing various concentrations of xanthine oxidase(XO) and hypoxanthine(HX) for 3 hours. In addition, neuroprotective effects of several herb extracts on oxidant-induced neurotoxicity were examined in these cultures, compared with nerve growth factors such as basic fibroblast growth factor(bFGF). XO/HX decreased cell viability in dose- and time dependent manners on cultured mouse spinal motor neurons, and MTT50 and NR50 values were measured at 20mU/ml XO and 0.1mM HX for 3 hours in these cultures. bFGF significantlt increased cell viability. In neuroprotective of herb extracts, Epimedium Koreanum Nakai(EK) and Alpinia oxphylla Mig(IJI) was very effective in the prevention of the neurotoxicity induced by XO/HX in cultured mouse spinal motor neurons. From the above results, it is suggested that XO/HX shows toxic effect in cultured mouse spinal motor neurons and selective herb extracts such as Epimedium Koreanum Nakai(EK) and Alpinia oxphylla Mig(IJI) were very effective in the increase of cell viability against the neurotoxicity induced by oxygen radicals in these cultures.
본 시험 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 공시교잡종의 평균 과피두께는 $37{\mu}m$로 얇은 특성을 보였는데 특히 CNU108 교잡종이 $30.3{\mu}m$로 가장 얇은 특성을 보였고 출사일수는 CNU69와 CNU202 등이 59일로 가장 빨랐으나 CNU160 교잡종은 68일로 본 교잡종들 중에서 가장 늦었다. 2. CNU70과 CNU138의 교잡종들은 높은 항산화효소(xanthin oxidase, catalase, superoxide dismutase)의 활성을 나타내었고, 특히 CNU160과 CNU193 교잡종은 각각 94.8%, 94.6% 등으로 높은 항산화력(EDA)을 나타내었다. 3. CNU109와 CNU34의 교잡종에서는 전반적으로 높은 항산화효소 활성 및 항산화력을 나타내었다. 따라서 CNU34, CNU70, CNU108, CNU138, CNU193 등의 교잡종 찰옥수수가 항산화 효과가 높은 고기능성 유색 찰옥수수인 것으로 사료되었다.
The purpose of this study is to investigate the protective effects of Yukmijiwhang-tang(YM) water extracts against the UVB irradiation on the human keratinocyte HaCaT cells. We observed the effects of YM on the oxidative stress, gene expression of pro-inflammatory cytokine such as TNF-${\alpha}$ and IL-$1{\beta}$, and matrix metalloproteinase-9 in UVB-irradiated HaCaT cells. On the effects of oxidative stress and antioxidant function on the treatment with YM, The activity of xanthine oxidase(XO) was significantly decreased by treatment of YM in all the concentrations(p<0.01). The activity of superoxide dismutase(SOD) and catalase(CAT) was significantly increased by treatment of YM in a dose dependent manner(p<0.05 and p<0.01). DPPH radical was erased by treatment of YM under dose of $500{\mu}g/m{\ell}$ concentration. Treatment of HaCaT cells with YM had also significantly reduced intracellular ROS produced by UVB irradiation in a dose dependent manner(p<0.05, p<0.01, p<0.001). Gelatin zymography assay showed that YM downregulated the MMP-9 activity in UVB-irradiated HaCaT cells. RT-PCR analysis revealed that YM suppressed the expression of IL-$1{\beta}$ and MMP-9 however, it has no effects on the expression of TNF-${\alpha}$ and MMP-3. Our study suggests that Yukmijiwhang-tang exert protective actions on the UVB-irradiated HaCaT cells largely by anti-oxidative and anti-inflammatory processes.
TO evaluate an effect of cyclohexane treatment on the degree of liver damage, rats were induced liver damage with 10 or 17 times $CCl_4$ injection (0.1 m1/100 g body wt., 50% $CCl_4$ dis-solved in olive oil) at intervals of every other day. Cyclohexane (1.56 g/kg body wt., i.p.) was administrated to the animals at 48 hours after the last pretreatment of $CCl_4$ . Rats were sacrificed at 4 hours after injection of cyclohexane. On the basis of histopathological findings, liver weight/body weight (LW/ BW, %), activities of serum alanine aminotransferase (ALT), xanthine oxidase (XO) and akaline phosphatase (ALP), and contents of liver protein and manlondialdehyde (MDA), $CCl_4$ -pretreatment induced liver damage. And $CCl_4$ 17 times treated group showed more severe liver damage than $CCl_4$ 10 times treated group. Administration of one dose of cyclohexane to $CCl_4$ 10 times treated animals resulted in the enhanced liver damage; liver necrosis with proliferation of fibroblast and bile duct abnormality, and increase in hepatic MDA content and the activities of serum ALP and ALT, But the enhanced liver damage was not found in $CCl_4$ 17 times treated animals. Serum cyclohexanone concentrations at 4 or 8 hours after injection of cyclohexane were higher in all liver damaged groups than normal group and were somewhat higher In $CCl_4$ 17 times treated animals than $CCl_4$ 10 times treated ones. Among the oxygen free radical metabolizing enzymes, hepatic cytochrome P45O dependent aniline hydroxylase (CYPdAH) activity in cyclohexane metabolizing enzyme system was meaningfully increased by the injection of cyclohexane to the liver damaged rats, with increased Vmax and high affinity to aniline. LW/BW (%) and activities of serum XO and ALT were more significantly increased in liver damaged groups than normal group by administration of cyclohexanone. In conclusion, it is assumed that an enhancement of liver damage by injection of one dose of cyclohexane to liver damaged animals might be caused by oxygen free radicals and cyclohexanone.
To evaluate the effect of cyclohexane(CH) treatment on the serum levels of glutathion S-transferase(GST) activity in liver damaged animals, damaged liver was induced with pretreatment of 50% $CCl_4$ dissolved in olive oil (0.1 m1/100g body weight) intraperitoneally 17 times every other day. To $CCl_4$-treated rats, CH (1.56 g/kg body weight, i.p) was injected once and then the animals were sacrificed at 4 hours after injection of CH. The $CCl_4$-treated animals were identified as severe liver damage on the basis of liver functional findings, 1,e, increased serum levels of alanine aminotransferase(ALT), alkaline phosphate(ALP) and xanthine oxidase(XO) activities. On the other hand, $CCl_4$-treated animals injected with CH once($CCl_4$-pretreated animals) showed more decreased serum levels of ALT and XO, and more increased those of ALP rather than $CCl_4$-treated animals. In case of comparing the GST with ALT activity in liver, both $CCl_4$-treated and pretreated animals showed similar changing pattern of enzyme actvity. Especially $CCl_4$-pretreated animals showed significantly increased serum level of GST actvity compared with the $CCl_4$-treated those, whereas those of ALT showed reversed tendency. In aspects of GST enzyme kinetics, $CCl_4$-pretreated animals showed higher Vmax of liver GST enzyme than $CCl_4$-treated animals. In conclusion, injection of CH to the liver damaged rats led to enhanced liver damage and more increased activity of serum GST which may be chiefly caused by the enzyme induction.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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