본 연구에서는 주요 새우 생산 국가에서 2017년 7월부터 2020년 11월 사이 생산되어 국내로 수입된 냉동 새우(29개 그룹)를 대상으로 흰반점바이러스(WSSV), covert mortality nodavirus (CMNV) 및 decapod iridescent virus 1 (DIV-1)의 검출여부를 조사하였다. 각 바이러스에 대한 nested PCR 결과, WSSV는 9개 그룹(9/29)에서 검출되었으며 CMNV와 DIV-1은 검출되지 않았다. Nested PCR에서 WSSV 양성으로 확인된 시료를 대상으로 WSSV genome variable loci로 알려진 VR 14/15 region에 대해 참조 서열들과 삽입/결손(insertion and deletion) 서열 비교 및 근연관계를 분석하였다. WSSV 양성 시료 중 1개 시료(20-CH-1 isolate, 2020년 10월 중국 생산)에서만 VR 14/15에 대한 PCR amplicon이 생성되었으며 염기서열 분석 결과, 20-CH-1 isolate는 2005년 인도에서 보고된 WSSV-IN-05-01과 99.84%의 상동성을 보였다. 이는 과거 알려진 바와 같이 새우의 교역을 통한 국가 간 WSSV가 확산되었음을 뒷받침해주는 결과이다.
White spot syndrome virus (WSSV) is the causative agent of a disease that has led to severe mortalities of cultured shrimps in Korea and many other countries. Since 1993, massive mortalities due to the viral infection have also occurred in the penaeid shrimps cultured in Korea. WSSV is a large, circular, double stranded (ds) DNA virus and an enveloped, ellipsoid virus with a rod-shaped nucleocapsid with flat ends. In order to identify the characteristics of this Korean isolate of WSSV, the genes for four virion proteins, VP15, VP19, VP28 and VP35 were cloned and their sequences were compared with the available pool of WSSV gene sequences in the GenBank/EMBL databases. From these comparisons, we confirm the occurrence of WSSV in Korea and deduce that, VP15, VP28 and VP35 genes are identically conserved among the Korean isolate and geographically different foreign isolates, but VP19 amino acid sequences of the Korean WSSV isolates changed valine of the foreign isolates into aspartate. (omitted)
K. V. Rajendran;S. J. Jung;Kim, Y. J.;Kim, S. R.;M. J. Oh
한국어업기술학회:학술대회논문집
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한국어업기술학회 2001년도 춘계 수산관련학회 공동학술대회발표요지집
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pp.521-523
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2001
White spot syndrome virus (WSSV) causes the most serious epizootic in cultured penaeid shrimp. The epizootic started in 1992, and spread through east and south east Asia and into other shrimp growing countries of the region. WSSV has also been reported from Penaeus chinensis cultured in Korean peninsula (Park et al., 1998; Kim et al., 1999). However, this paper deals with the WSSV infection in cultured and wild P. chinensis, purification and characterization of the pathogen, and the occurrence of other concomitant infection. (omitted)
White spot syndrome virus (WSSV) is a major threat to the shrimp farming industry and so far there is no effective therapy for it, and thus early diagnostic of WSSV is of great importance. However, at the early stage of infection, the extremely low-abundance of WSSV DNA challenges the detection sensitivity and accuracy of PCR. To effectively detect low-abundance WSSV, here we developed a pre-amplification PCR (pre-amp PCR) method to amplify trace amounts of WSSV DNA from massive background genomic DNA. Combining with normal specific PCR, 10 copies of target WSSV genes were detected from ${\sim}10^{10}$ magnitude of backgrounds. In particular, multiple target genes were able to be balanced amplified with similar efficiency due to the usage of the universal primer. The efficiency of the pre-amp PCR was validated by nested-PCR and quantitative PCR, and pre-amp PCR showed higher efficiency than nested-PCR when multiple targets were detected. The developed method is particularly suitable for the super early diagnosis of WSSV, and has potential to be applied in other low-abundance sample detection cases.
Kim, Chun Soo;Choi, Seung Hyuk;Kim, Min Sun;Kim, Ki Hong
한국어병학회지
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제27권1호
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pp.11-16
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2014
The resistance against white spot syndrome virus (WSSV) infection in wild marine crab Gaetice depressus by the immunization of a recombinant glutathione-S-transferase (GST) fused VP28 protein (GST-VP28) was evaluated. The cumulative mortalities of GST-VP28 injected groups were lower than those of the control groups at 10 days of post-challenge, and the time to death of 50% crab ($TD_{50}$) was delayed by the immunization using GST-VP28. The group boosted with GST-VP28 after 2 weeks of primary immunization clearly showed longer $TD_{50}$ than non-boosted group against challenge with WSSV. This result suggests that boosting with the antigen protein elicit stronger immune responses similar to adaptive immune responses of vertebrates. However, the short $TD_{50}$ was observed in the group challenged at 3 weeks post boosting comparing to the group challenged at 1 week post boosting. This suggests that the protective strength of immunization decreased by the time.
흰반점바이러스(WSSV)는 새우양식산업에 막대한 경제적 손실을 일으키는 가장 치명적인 바이러스성 질병 원인체 중 하나이다. 본 연구는 인위적인 실험모델로서 WSSV에 대한 자주새우(Crangon affinis)의 감수성을 확인하고자 실험을 수행하였다. WSSV가 희석된 수조 내에서 침지법으로 감염된 새우는 감염 후 7일째에 100% 누적폐사율을 보여 자주새우가 WSSV에 대해 매우 높은 감수성을 갖고 있음을 확인하였다. 또한 재조합단백질인 rVP466에 대한 항혈청의 중화효과를 확인하기 위해 항혈청과 반응시킨 바이러스액($1{\times}10^4$ 배로 희석된 WSSV)을 이용하여 침지법으로 자주새우에 대해 공격실험(challenge test)을 수행하였다. 실험 결과, WSSV로 challenge한 감염대조구(positive control)의 새우들은 감염 후 5일째에 100% 폐사하였으며, WSSV와 rVP466 항혈청을 1:0.01, 1:0.1, 1:1로 혼합한 액으로 challenge한 새우들은 감염 후 14일째에 각각 100%, 68.8%, 68.8%의 누적폐사율을 보였다. 따라서 본 연구 결과는 연안서식종인 자주새우가 양식장으로부터 배출된 WSSV에 의해 자연상태에서 감염 될 수 있는 가능성과 함께 항혈청에 대한 중화효과를 나타냄으로써 겨울철 저수온기에 WSSV 감염을 위한 대체 실험생물로서의 유용성을 확인하였다.
This study was carried out for the molecular level identification of recombinant protein vaccine efficacy, by oral feeding against white spot syndrome virus infection, with the comparison of viral mRNA transcriptional levels in shrimp cells. For the determination of WSSV dilution ratio for the vaccination experiment by oral feeding, in vivo virus titration was carried out using different virus dilutions of virus stock ($1{\times}10^2$, $2{\times}10^2$, and $1{\times}10^3$). Among the dilution ratios, $2{\times}10^2$ diluted WSSV stock was chosen as the optimal condition because this dilution showed 90% mortality at 10 days after virus injection. Recombinant viral proteins, rVP19 and rVP28, produced as protein vaccines were delivered in shrimps by oral feeding. The cumulative mortalities of the shrimps vaccinated with rVP19 and rVP28 at 21 days after the challenge with WSSV were 66.7% and 41.7%, respectively. This indicates that rVP28 showed a better protective effect against WSSV in shrimp than rVP19. Through the comparison of mRNA transcriptional levels of viral genes from collected shrimp organ samples, it was confirmed that viral gene transcriptions of vaccinated shrimps were delayed for 4~10 days compared with those of unvaccinated shrimps. Protection from WSSV infection in shrimp by the vaccination with recombinant viral proteins could be accomplished by the prevention of entry of WSSV due to the shrimp immune system activated by recombinant protein vaccines.
Ha, Yu-Mi;Gong, Soo-Jung;Nguyen, Thi-Hoai;Ra, Chae-Hun;Kim, Ki-Hong;Nam, Yoon-Kwon;Kim, Sung-Koo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제18권5호
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pp.964-967
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2008
Two structural protein genes, VP19 and VP466, of white spot syndrome virus (WSSV) were cloned and expressed in Sf21 insect cells using a baculovirus expression system for the development of injection and oral feeding vaccines against WSSV for shrimps. The cumulative mortalities of the shrimps vaccinated by the injection of rVP19 and rVP466 at 15 days after the challenge with WSSV were 50.2% and 51.8%, respectively. For the vaccination by oral feeding of rVP19 and rVP466, the cumulative mortalities were 49.2% and 89.2%, respectively. These results show that protection against WSSV can be generated in the shrimp, using the viral structural protein as a protein vaccine.
Research in low cost feeds with high nutritional value and immunogenicity is important to reduce production cost and increase yields in the shrimp industry. In this study, immunostimulants of bacterial origin (peptidoglycan and lipopolysaccharides) and egg white were incorporated in shrimp diets as feed additives to determine the growth, survival and tolerance of Penaeus monodon to white spot syndrome virus (WSSV). Although the results obtained were not statistically significant (p>0.05) among the treatments, shrimp fed with bacterial additives and egg white showed higher weight gain, specific growth rate and survival than those fed on commercial shrimp diet. Shrimp fed with artificial diet showed 100% mortality when challenged with WSSV. However, shrimp fed on peptidoglycan supplemented diet had higher survival than their counterpart, whereas shrimp fed on egg white supplemented diet had a higher specific growth rate and better tolerance when challenged with WSSV. Further studies are required to determine the effectiveness and optimization of bacterial strains and egg white as feed additives to increase production and enhance the shrimp immune response to diseases.
White spot syndrome virus (WSSV) causes the most serious epizootic in cultured penaeid shrimp. The epizootic started in 1992, and spread through east and south east Asia and into other shrrimp growing countries of the region. In order to circumvent the epizootic, in many Asian countries, freshwater prawn, Macrobrachium rosenbergii is being widely considered as an alternative species to marine shrimp. (omitted)
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[게시일 2004년 10월 1일]
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