• 한국수정란이식학회지
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• 제26권3호
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• pp.181-186
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• 2011

Spermatozoa sorted by flow cytometry have been successfully used to produce offspring in domestic animals and are commercially available for cattle. Also sheath fluid is the important environment for viability of sex-sorted sperm in flow cytometry. The aim of this study was to investigate whether or not HEPES (N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-Ethanesulfonic acid) has any effect on the viability in sex-sorted Hanwoo (Korean native cattle) sperm. In this study, the semen was collected from Hanwoo of Hoengseong Livestock Cooperation by artificial vagina method then pooled and subjected to cryopreservation in straws. Sperm were cultured for 0, 30, 60 and 120 min with 0, 2.5, 5, 7.5 and 10 mM of HEPES added to the sheath fluid and incubated at 4, 20 and 38$^{\circ}C$, respectively. For the cytometric analysis the frozen-thawed semen was extended with 5 mM HEPES extender to final concentration ($2{\times}10^7$ spermatozoa) at 4, 20 and 37$^{\circ}C$. Sperm viability was assessed with SYBR-14 and propidium iodide (PI) staining. This study shows that the viability of sperm was decreased with prolongation of incubation time in all of test. But the viability of sperm which were treated with 38$^{\circ}C$ was gently decreased than that of treated with other temperature. The viability of the control was sharply decreased (p<0.05) than all of the HEPES treatment group at 60 to 120 min in 38$^{\circ}C$. X-sexed sperm was more sensitive than Y-sexed sperm to temperature during f10w cytometry (p<0.05). In conclusion, the results of this study suggest that the sheath fluid with 5 mM HEPES has effect on maintenance of viability after sperm sexing at 37$^{\circ}C$ in Hanwoo.

• 한국임상수의학회지
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• 제11권2호
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• pp.545-552
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• 1994

This experiment was carried out to investigate the renditions to maintain good post-thaw motility and viability of canine spermatozoa when the semen was frozen using methanol. The semen from two male dogs which had been proven to be fertile in the previous one year was treated with different compositions of semen diluent and was frozen at different freezing temperatures, When canine semen was frozen at-2$0^{\circ}C$, -6$0^{\circ}C$, or -8$0^{\circ}C$, the spermatozoa frozen and stored at -2$0^{\circ}C$ showed very low post-thaw motility and viability from day 2 to 7 and showed no viability since day 15 after freezing. The spermatozoa frozen and stored at -6$0^{\circ}C$ or -8$0^{\circ}C$ showed higher post-thaw motility and viability on day 2, 1, 15 and 30 after freezing than that frozen and stored at-2$0^{\circ}C$(p<0.01), with no difference between two groups. Among different composition groups of the semen diluents of control(tris + egg yolk + glycerol), egg yolk-free, 히ycerol-free, and tris-free, Prior to freezing, the egg yolk-free diluent showed significantly love. motility and viability than the other diluents(p<0.05). On each thawing day (from day 2 to 15 after freezing), control group showed considerably higher motility and viability than the other groups(p<0.01). The canine spermatozoa frozen and stored at -6$0^{\circ}C$ and -8$0^{\circ}C$ showed gradual decrease of motility from day 2 to 30 after freezing and the spermatozoa of these two groups thawed on day 30 showed considerably love. motility than those thawed on day 2 after freezing, respectively(p<0.01). These results indicate that the freezing temperature of either -6$0^{\circ}C$ or -8$0^{\circ}C$ can be applicable to the freezing method using methanol and also all of the components of the semen diluent including cryoprotectant, buffer and cold-shock buffer are very important to maintain motility and viability of canine spermatozoa in the freezing and thawing procedure.

• 한국수정란이식학회지
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• 제28권4호
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• pp.373-379
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• 2013

Spermatogonial stem cells (SSCs) developed into sperms through spermatogenesis have been utilized as a useful tool in the field of regenerative medicine and infertility. However, a small number of highly qualified SSCs are resided in the seminiferous tubule of testis, resulted in developing effective in-vitro culture system of SSCs for solving simultaneously quantitative and qualitative problems. Presently, SSCs can be enriched on testicular stromal cells (TSCs), but there are no systematic researches about TSC culture. Therefore, we tried to optimize culture condition of TSCs derived from mouse with different strains. For these, proliferation and viability were measured and compared by culturing ICR outbred or DBA/2 inbred mouse-derived TSCs at 35 or $37^{\circ}C$. In case of ICR strain, primary TSCs cultured at $37^{\circ}C$ showed significantly higher proliferation and viability than those at $35^{\circ}C$ and significant increase of proliferation and viability in sub-passaged TSCs was detected in the $35^{\circ}C$ culture condition. Moreover, sub-passage of primary TSCs at $35^{\circ}C$ induced no significant effects on proliferation and viability. In contrast, in case of DBA/2 strain, significantly improved proliferation were detected in the primary TSCs cultured at $35^{\circ}C$, which showed no significant difference in the viability, compared to those at $37^{\circ}C$. Furthermore, sub-passaged TSCs cultured at $37^{\circ}C$ showed no significant differences in proliferation and viability, compared to those at $35^{\circ}C$. However, with significant decrease of proliferation induced by sub-passage of primary TSCs at $35^{\circ}C$, no significant effects on proliferation and viability were resulted from sub-passage of primary TSCs at $37^{\circ}C$. From these results, culture temperature of primary TSCs derived from outbred and inbred strain of mouse could be separately optimized in primary culture and subculture.

• Nutrition Research and Practice
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• 제2권2호
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• pp.74-79
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• 2008

Zinc plays a protective role in anti-atherosclerosis but the clear mechanism has not been proposed yet. In the present study, we evaluated whether zinc modulates atherosclerotic markers, VACM-1 and ICAM-1 and cell viability both in endothelial cells in vitro and mouse aortic cell viability ex vivo. In study 1, as in vitro model, endothelial EA.hy926 cells were treated with $TNF{\alpha}$ for 5 hours for inducing oxidative stress, and then treated with Zn-adequacy ($15\;{\mu}M$ Zn) or Zn-deficiency ($0\;{\mu}M$ Zn) for 6 hours. Pro-atherosclerosis factors, VCAM-1 and ICAM-1 mRNA expression and cell viability was measured. In study 2, as ex vivo model, mouse aorta ring was used. Mourse aorta was removed and cut in ring then, cultured in a 96-well plate. Aortic ring was treated with various $TNF{\alpha}$ (0-30 mg/ml) and intracellular zinc chelator, N, N, N', N', -tetrakis (2-pyridylmethyl) ethylenediamine (TPEN, $0-30\;{\mu}M$) for cellular zinc depletion for 2 days and then cell viability was measured. The results showed that in in vitro study, Zn-adequate group induced more VCAM-1 & ICAM-1 mRNA expression than Zn-deficient group during 6-hour zinc treatment post-5 hour TNF-$\alpha$ treatment, unexpectedly. These results might be cautiously interpreted that zinc would biologically induce the early expression of anti-oxidative stress through the increased adhesion molecule expression for reducing atherosclerotic action, particularly under the present 6-hour zinc treatment. In ex vivo, mouse aortic ring cell viability was decreased as TNF-$\alpha$ and TPEN levels increased, which suggests that mouse aortic blood vessel cell viability was decreased, when oxidative stress increases and cellular zinc level decreases. Taken together, it can be suggested that zinc may have a protective role in anti-atherosclerosis by cell viability in endothelial cells and aorta tissue. Further study is needed to clarify how pro-atherosclerosis molecule expression is modulated by zinc.

• 한국육종학회지
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• 제41권4호
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• pp.496-501
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• 2009

저장조건을 달리한 딸기 화분을 FCR Test와 결실률을 바탕으로 하여 화분 활력을 조사하고 암술 주두 활력을 인공수분을 통하여 구명함으로서 딸기 교배 육종시 효율성을 높이고자 하였다. '설향'을 대상으로 화분 활력을 조사하였으며 암술 주두의 수정 능력은 '매향' 등 4품종을 공시하고 화분친은 '설향'을 사용하였다. 딸기 화분은 상대습도 33%이하의 건조한 조건에서는 처리 온도($18^{\circ}C$ 및 $22^{\circ}C$)와 관계없이 수일 동안 높은 활력을 유지하였다. 반면 상대습도가 높을수록 화분 활력의 감소가 컸으며 저장한지 7일차에 대부분의 화분이 활력을 상실하여 결실률이 급격히 감소하였고 이러한 경향은 $18^{\circ}C$보다 $22^{\circ}C$저장 조건에서 결실률이 더욱 불량하였다. 즉, 상대습도가 낮은 경우 화분 활력은 크게 감소하지 않았으며, 온도보다는 습도가 화분 활력을 결정하는 중요한 요인으로 작용하는 것으로 판단된다. 암술의 수정 능력은 품종간의 차이가 있었으나 시설 내부 일평균온도가 $15^{\circ}C$내외일때, 제웅 후 2일차부터 8일차까지 평균 77.2%이상으로 높게 유지되었다. 그러나 결실률은 제웅 후 10일차부터 점차 감소하기 시작하여 12일차 이후에는 일부 품종을 제외하고 급격히 감소하였다. 적산온도를 기준으로 하였을 때, 제웅 후 $45{\sim}140^{\circ}C$내외 범위에서 인공수분을 하는 것이 딸기 결실률을 향상 시킬 수 있을 것으로 판단된다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제28권3호
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• pp.167-172
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• 2004

Flow cytometry를 이용하여 개 정자의 생존율 평가를 수행하고자 2-4세의 수캐 5두가 이용되었고, 분석을 위해 PI염색을 실시하였다. Flow cytometry를 이용한 개 신선 정액의 생존율 평가는 생존 정자와 죽은 정자의 비율을 1:0, 1:1, 1:3으로 조성하여 이를 flow cytometry로 평가하고 광학현미경검사, CFDA/PI 염색검사, HOS test에 의한 생존율과 비교하여 flow cytometry와의 상관관계를 알아보았다. 또한 개 정액을 동결하여 응해 후의 개 정자의 생존율 평가에도 동일한 방법으로 상관관계를 조사하였다. 신선 정액에서 생존 정자와 죽은 정자의 비율이 1:0, 1:1, 1:3 모든 경우에서 flow cytometry를 이용한 생존율은 HOS test에 의한 생존율과 높은 상관관계를 나타내었다 (p<0.01). 신선 정액에서 생존 정자와 죽은 정자의 비율이 1:0과 1:3일 때 광학현미경적 검사에 의한 생존율은 flow cytometry 분석에 의한 생존율과 유의 적인 상관관계를 나타내었으나 (p<0.05), 1:1 비율의 경우 상관관계를 보이지 않았다. 신선 정액에 생존 정자와 죽은 정자의 비율이 1:0과 1:1일 때 CFDA/PI 염색 검사에 의한 생존율은 flow cytometry분석에 의한 생존율과 높은 상관관계를 보였으며(p<0.01), 1:3 비율에서는 유의적인 상관관계를 보였다 (p<0.05). 동결 및 응해 후의 개 정자의 생존율 평가에서 HOS test 결과는 flow cytometry분석에 의한 생존율과 높은 상관관계를 보였으며 (p<0.01), 광학현미경적 검사를 통한 생존율은 유의적인 상관관계를 보였으나 (p<0.05), CFDA/PI 염색 검사결과는 상관관계를 보이지 않았다. 이상의 결과 flow cytometry는 신선정액 및 동결 융해 후 개 정자에 대한 생존율 검사에 정확한 평가 방법 인 것으로 판단되었다.

• 대한생식의학회:학술대회논문집
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• 대한불임학회 2006년도 The 5th Biannual Meeting of Pacific Rim Society for Fertility and Sterility
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• pp.160.2-160.2
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• 2006

• 한국작물학회:학술대회논문집
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• 한국작물학회 1988년도 춘계 학술대회지
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• pp.22-23
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• 1988

• Journal of Dairy Science and Biotechnology
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• 제33권3호
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• pp.203-207
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• 2015

본 연구에서는 동결건조 공정에 의한 유산균의 생균수 감소를 최소화 할 수 있는 농후 발효유를 개발하고자 하였다. 이를 위해 농후 발효유 제조에 첨가되는 당의 종류 및 구성을 달리하여 동결 건조 전후의 유산균 생존율을 비교 분석하였다. 그 결과, 포도당의 일부를 이소말토올리고당으로 대체하였을 때, 발효유 내 초기 유산균 생균수 및 동결건조 공정 이후의 유산균 생존율 또한 높아졌다. 또한 동결 건조 시 열판 온도가 낮을 경우, 건조 효율은 떨어지지만, 동결건조 이후의 동결건조 농후 발효유 내 초기 유산균 생존율이 높았다. 16주간의 저장기간에 따른 유산균 생균수 변화를 살펴본 결과, 상온보관 조건에서 유산균은 지수적으로 감소하였다. 하지만 16주가 경과한 후에도 $1.63{\times}10^8CFU/g$의 생균수를 유지하여 약 0.6 g 이상의 동결건조 농후 발효유만 섭취하여도 체내에서 유산균 증식 및 유해균 억제 배변활동 원활 등의 건강기능성을 가질 수 있는 수준이었다. 하지만 본 연구에서는 식품 매트릭스에 따른 동결방지 효과를 파악할 때, 유산균 생균수를 유일한 지표로 삼았다는데 한계가 있다. 유산균 생균수뿐만 아니라, 유산균의 활성을 살펴보기 위해 동결건조 이후의 젖산 생성능력이나 실질적으로 체내에 들어갔을 때 위액이나 담즙액에 대한 저항성 측면에서의 추가 연구가 필요할 것으로 사료된다.

• 대한소아치과학회지
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• 제42권4호
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• pp.291-301
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• 2015

본 연구의 목적은 다양한 MTA 재료(ProRoot MTA, RetroMTA, Endocem Zr)에 대한 유치 치수 세포의 생활력 및 분화능을 비교 평가하는 것이다. 유치 치수세포는 각 재료별로 경화된 원형 디스크를 이용하여 직접법 및 간접법으로 세포 생활력을 관찰하였다. 또한 재료별 추출물을 이용하여 pH를 측정하였으며, alkaline phosphatase(ALP) 활성도 및 Alizarin Red S 염색법을 통하여 세포의 분화능을 관찰하였다. 직접법에서 유치 치수세포는 ProRoot MTA와 RetroMTA에서 Endocem Zr에 비해 높은 세포 생활력을 보였으나, 반면 간접법에서는 Endocem Zr에서 다른 재료에 비해 높은 세포 생활력이 관찰되었다. pH의 경우 Endocem Zr가 다른 두 재료에 비해 낮은 알칼리성을 나타냈다. 모든 재료에서 ALP 활성도는 대조군에 비해 증가하지 않았으며, Alizarin Red S 염색결과 유치 치수세포의 분화능이 대조군에 비해 낮았다. 본 실험에서 재료별 차이는 있었으나 모든 재료에서 어느 정도의 세포 독성이 관찰되었으며, 유치 치수세포의 생활력과 분화능을 증진시키지 못하였다. 하지만 Endocem Zr의 경우 ProRoot MTA나 RetroMTA에 비해 낮은 알칼리성과 높은 생활력을 보였다.