In this study, a new system to determine the concentration of cholesterol using a color change was developed. The system comprised diacetylene vesicles and cholesterol oxidase (ChOx). 10,12-Pentacosadiynoic acid (PCDA) was used as the diacetylene compound, and PCDA vesicles were formed using sonication. The H2O2 produced during the reaction between cholesterol and ChOx was used to initiate the polymerization of the PCDA in the vesicles. During polymerization, the vesicles changed from colorless to blue. Therefore, the cholesterol concentration was proportional to the intensity of the blue color. The absorption at 665 nm indicated that the blue color was directly proportional to the cholesterol concentration. This indicates that the system can be used for cholesterol detection. The minimum cholesterol concentration detected using this system was 1.0 mM.
Intrauterine adhesion (IUA) can occur after trauma to the basal layer of the endometrium, contributing to severe complications in females, such as infertility and amenorrhea. To date, the proposed therapeutic strategies are targeted to relieve IUA, such as hysteroscopic adhesiolysis, Foley catheter balloon, and hyaluronic acid injection have been applied in the clinic. However, these approaches showed limited effects in alleviating endometrial fibrosis and thin endometrium. Mesenchymal stem cells (MSCs) can offer the potential for endometrium regeneration owing to reduce inflammation and release growth factors. On this basis, MSCs have been proposed as promising methods to treat intrauterine adhesion. However, due to the drawbacks of cell therapy, the possible therapeutic use of extracellular vesicles released by stem cells is raising increasing interest. The paracrine effect, mediated by MSCs derived extracellular vehicles (MSC-EVs), has recently been suggested as a mechanism for their therapeutic properties. Here, we summarizes the main pathological mechanisms involved in intrauterine adhesion, the biogenesis and characteristics of extracellular vesicles, explaining how these vesicles could provide new opportunities for MSCs.
If the surfaces of vesicles are chemically modified so that they can be dispersed in organic solvents, the application of vesicular colloids may be expanded. A polymerizable surfactant (BDAC) and nonpolymerizable bipolar surfactant (BPAS) were synthesized in multi-steps. Large vesicles composed of BDAC and BPAS with embedded a cross-linking agent (divinylbenzene) underwent a radical polymerization. BPAS was extracted out using methanol (skeletonization). The headgroup of BDAC was cleaved off via hydrolysis in an acidic condition to yield vesicles where surfaces were covered with -COOH groups. There was no significant change in the overall shape. The skeletonized vesicles appear to have many holes with diameters up to about 25 nm. The holes retained even after hydrolysis. The hydrolyzed vesicles were not dispersed in water and most organic solvents such as tetrahydrofuran and chloroform, but dispersed in methanol.
The effect of the trehalose incorporation on the biological membranes was investigated with respect to the phase of the membranes using the fluorescence intensity change. Spherical phospholipid bilayers, vesicles, were prepared only with the variation in the phase of each layer via a double emulsion technique. In the aqueous inside of the vesicles, 8-Aminonaphthalene-1,3,6-trisulfonic acid disodium salt(ANTS) was encapsulated. As a quencher, p-Xylene-bis(N-pyridinium bromide)(DPX) was included in the buffer where the vesicles were dispersed. The fluorescence scale was calibrated with the fluorescence of ANTS vesicles in p-Xylene-bis(N-pyridinium bromide)(DPX)-included-buffer taken as 100% fluorescence and the mixture of ANTS and DPX in the buffer as 0% fluorescence. Trehalose injection into the vesicle solution led the distortion of the membrane. It was found that the distortion was related to the phase of each layer the vesicle up on the ratio of trehalose to lipid. In the identical measurements at glucose, the behavior of the distortion was completely different from that of trehalose. These results seem to depend on the stability of the vesicles, due to the osmotic and volumetric effects on the headgroup packing disruption.
Agents that activate or inhibit the $Ca^{2+}$ release channel in cardiac sarcoplasmic reticulum (SR) were tested for their abilities to affect the activity of the SR $Ca^{2+}$-ATPase. Vesicles of junctional SR (heavy SR, HSR) from terminal cisternae were prepared from porcine cardiac muscle by density gradient centrifugation. The steady-state activity of $Ca^{2+}$-ATPases in intact HSR vesicles was/$347{\pm}5\;nmol/min{\cdot}mg$ protein (${\pm}$ SD). When the HSR vesicles were made leaky, the activity was increased to $415{\pm}5\;nmol/min{\cdot}mg$ protein. This increase is probably due to the uncoupling of HSR vesicles. Caffeine (10 mM), an agonist of the SR $Ca^{2+}$ release channel, increased $Ca^{2+}$-ATPase activity in the intact HSR vesicle preparation to $394{\pm}30\;nmol/min{\cdot}mg$ protein. However, caffeine had no significant effect in the leaky vesicle preparation and in the purified $Ca^{2+}$-ATPase preparation. The effect of caffeine on SR $Ca^{2+}$-ATPase was investigated at various concentrations of $Ca^{2+}$. Caffeine increased the pump activity over the whole range of $Ca^{2+}$ concentrations, from $1\;{\mu}M$ to $250\;{\mu}M$, in the intact HSR vesicles. When the SR $Ca^{2+}$-ATPase was inhibited by thapsigargin, no caffeine effect was observed. These results imply that the caffeine effect requires the intact vesicles and that the increase in $Ca^{2+}$-ATPase activity is not due to a direct interaction of caffeine with the enzyme. We propose that the activity of SR $Ca^{2+}$-ATPase is linked indirectly to the activity of the $Ca^{2+}$ release channel (ryanodine receptor) and may depend upon the amount of $Ca^{2+}$ released by the channels.
Autophagy is a degradation pathway in eukaryotic cells in which aging proteins and organelles are sequestered into double-membrane vesicles, termed autophagosomes, which fuse with vacuoles to hydrolyze cargo. The key step in autophagy is the formation of autophagosomes, which requires different kinds of vesicles, including COPII vesicles and Atg9-containing vesicles, to transport lipid double-membranes to the phagophore assembly site (PAS). In yeast, the cis-Golgi localized t-SNARE protein Sed5 plays a role in endoplasmic reticulum (ER)-Golgi and intra-Golgi vesicular transport. We report that during autophagy, sed5-1 mutant cells could not properly transport Atg8 to the PAS, resulting in multiple Atg8 dots being dispersed into the cytoplasm. Some dots were trapped in the Golgi apparatus. Sed5 regulates the anterograde trafficking of Atg9-containing vesicles to the PAS by participating in the localization of Atg23 and Atg27 to the Golgi apparatus. Furthermore, we found that overexpression of SFT1 or SFT2 (suppressor of sed5 ts) rescued the autophagy defects in sed5-1 mutant cells. Our data suggest that Sed5 plays a novel role in autophagy, by regulating the formation of Atg9-containing vesicles in the Golgi apparatus, and the genetic interaction between Sft1/2 and Sed5 is essential for autophagy.
Phospholipase D (PLD) catalyzed the generation of phosphatidic acid (PA) from phosphatidylcholine (PC) at the outer layer of the vesicles prepared through layer by layer via a double emulsion technique. The generation induced a curvature change in the vesicles, which eventually led them to fuse each other. The ratio of two-fatty-acid-tail ethanolamine (PE) to one-fatty-acid-tail ethanolamine (PE) was found to acquire the condition where the mixed-phospholipid vesicles were stable identically with pure two-fatty-acid-tail PC. The effect of the outer-layer mixture on the PLD-induced vesicle fusion was investigated using the fluorescence intensity change. 8-Aminonaph-thalene-1,3,6-trisulfonic acid disodium salt (ANTS) and p-Xylene-bis(N-pyridinium bromide) (DPX) were encapsulated in the vesicles, respectively, for the quantification of the fusion. The fluorescence scale was calibrated with the fluorescence of a 1/1 mixture of ANTS and DPX vesicles in NaCl buffer taken as 100% fluorescence (0% fusion) and the vesicles containing both ANTS and DPX as 0% fluorescence (100% fusion), considering the leakage into the medium studied directly in a separate experiment using vesicles containing both ANTS and DPX. The fusion data for each composition were acquired with the subtraction of the leakage from the quenching. From the monitoring, the vesicle fusion caused by the PLD reaction seems dominantly to occur rather than the vesicle lysis, because the composition effect on the fusion was observed identically with that on the change in the vesicle structure. Furthermore, the diameter measurements also support the fusion dominancy.
In the present study, the vacuolar apparatus were investigated in the hepatocytes of rats treated with DA by transmission electron microscopy of conventional and cytochemical thin sections. In the rats after 20 min of dehydrocholic acid treatment, the cis Golgj cisterns were sacculated in line. The saccule occasionally occured by elongation and attenuated neck. The lysosomes also showed protrudent saccule. The vesicles were observed near the cis Golgi cisterns, lysosome and bile canaliculi. Some of the vesicles appeared to be fused to bile canaliculi. The cis Golgi cisterns usually faced toward the bile canaliculi both in normal and experimental groups. The cis Golgi cisterns, protrudent saccule and vesicles were almost devoid of visible contents. The osmium deposits were heavy on the protrudent saccule as well as on the cis Golgi cisterns or on the vesicles isolated near by, but they were light or not observed on the vesicles in the immediate vicinity of bile canaliculi. The acid phosphatase activities appeared on the lysosome and vesicles located near by, but did not appear on the vesicles as approaching closer to the bile canaliculi. The evidence suggests that the vesicles are derived from the cis Gogi cistern and lysosomes and fuse to bile canaliculi for exocytosis, and that the activity in the vesicles is diminished as approaching closer to the bile canaliculi.
An attempt has been made to discriminate the synapses in the striatum consisting caudate nucleus, putamen and fundus striati of the cat with emphasis on the characteristic structures of axon terminals and postsynaptic profiles. The differentiation is based on the size and shape of vesicle in the bouton terminal, and the symmetrical or asymmetrical thickening the pre- and postsynaptic membrane. Four types of synapses could be differentiated: Type I: the bontons with asymmetrical,synaptic thickenings contain round 45 nm diameter vesicles and contact cell soma, dendritic shafts and dendritic spines (74%). Type II : the boutons contain round 45nm diameter vesicles and are associated with symmetrical membrane thickenings. These synapses are formed on the soma and dendritic shafts (6%). Type III: the boutons with symmetrical membrane thickenings contain 50-60 nm diameter pleomorphic vesicles, and contact soma and dendritic shafts (18%). Type IV: the terminals contain flattened vesicles ($25{\times}45 nm$) and are associated with symmetrical membrane thickenings. These synapses are found in contact with soma and dendritic shafts. Additionally, the bouton en passant, which is expanded from myelinated or unmyelinated axons containing round vesicles (45nm diameter) contacts the dendritic shaft or dendritic spine with asymmetrical membrane thickenings. Two unusual types of synapses, axo-axonic and dendro-dendritic, are found occasionally.
Molecular aggregates of surfactant molecules consisting of one or more bilayers arranged in a hollow, closed, usually spherical geometry are termed “esicles”or “iposomes” In recent years it has been found that in certain systems the vesicular structure forms spontaneously and is long lived, and it has been suggested that these structures may in fact constitute the equilibrium state in these cases (as is true of micelles) This paper deals with the mixed CMC, vesicles, phase behavior, phase transition, geometrical structure, their formation and characterization in the aqueous solutions of mixed cationic/anionic surfactants systems. TEM micrographs revealed that the vesicles were of spherical shape and that their size was of around 180 nm. The zeta potentials are positive at CGS1-rich regions and negative at SLES-rich regions. In the region where SLES/CGS1 (6/4), the zeta potentials are very small, implying that the vesicles at this surfactant ratio may be less stable. At other surfactant ratios, the vesicles are thought to be stable, supported by large absolute values of zeta potentials and little change in UV absorbance for several months.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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