• 한국임상수의학회지
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• 제22권4호
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• pp.386-391
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• 2005

This study was done to produce a mutated protein inactivated cytotoxicity of Shigatoxin 2e (Stx2e) of E.coli O139 isolates by deletional mutagenesis of Stx2e A subunit gene encoding active-site cleft of enzymatic domain in ST2e holotoxin. Cytotoxicity of the toxoid expressed from the mutant Stx2e gene was compared with wild type Stx2e for development of vaccine candidate. A recombinant plasmid pED18 containing Stx2e gene ot E.coli O139 isolates was used to generate mutation plasmid. Deletion mutagenesis was conducted for Stx2e A subunit gene encoding enzymatically active domain by polymerase chain reaction (PCR) using ot designed primer to induce deletional mutation. DNA sequence analysis was confirmed that the pentamer (Typ 202- Ser 206) that lies within the proposed active-site cleft in the second region was completely deleted. A DNA fragment of 1.1 kb that encode the new mutant Stx2eA gene was inserted into plasmid pRSET vector digested with EcoRV-Hind III and named pEDSET The PEDSET was transformed in E. coli for expression of mutant protein and the protein was confirmed by SDS-PACE and Western-blotting. The protein expressed by the mutant was tested to confirm the reduction of cytotoxic activities on Vero cell using microcytotoxicity assay compared with wild type Stx2e, the cytotoxicity of deletional mutant protein was at least reduced by 3,000-fold on Vero cell.

• 대한수의학회지
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• 제42권2호
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• pp.231-239
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• 2002

Proteomics is an emerging powerful tool in studying protein expression and function. At present study, proteomics was employed to evaluate the antigenicity among Escherichia coli O157:H7 strains using 2-dimensional gel electrophoresis (2-DE) and immunoblotting, SDS-PAGE and immunblotting analysis revealed no big differences among E coli O157:H7 strains. 2-DE analysis, however, revealed common antigens as well as specific antigens. The immunoblotting analysis revealed 20 common antigenic spots among E coli O157:H7 strains. In addition, there were 3 and 13 spots as common antigens between ATCC 43894 and KSC 109, and between ATCC 43894 and ACH 5, respectively. Antigenic spots specific for individual strain were also identified as 15, 8 and 22 for ATCC 43894, ACH 5 and KSC 109, respectively. The common antigens would be useful by employing either vaccine development or diagnosis marker, or both, whereas the specific antigens of individual strains would be applicable for epidemiological study. This study suggest that proteome analysis, representative as 2-DE, is valuable tool in exploring the E. coli antigenicity.

• BMB Reports
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• 제49권10호
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• pp.554-559
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• 2016

Mycobacterium abscessus, a member of the group of non-tuberculous mycobacteria, has been identified as an emerging pulmonary pathogen in humans. However, little is known about the protective immune response of antigen-presenting cells, such as dendritic cells (DCs), which guard against M. abscessus infection. The M. abscessus gene MAB1843 encodes ᴅ-alanyl-ᴅ-alanine dipeptidase, which catalyzes the hydrolysis of ᴅ-alanyl-ᴅ-alanine dipeptide. We investigated whether MAB1843 is able to interact with DCs to enhance the effectiveness of the host's immune response. MAB1843 was found to induce DC maturation via toll-like receptor 4 and its downstream signaling pathways, such as the mitogen-activated protein kinase and nuclear factor kappa B pathways. In addition, MAB1843-treated DCs stimulated the proliferation of T cells and promoted Th1 polarization. Our results indicate that MAB1843 could potentially regulate the immune response to M. abscessus, making it important in the development of an effective vaccine against this mycobacterium.

• 대한바이러스학회지
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• 제28권3호
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• pp.247-265
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• 1998

To determine the sequence and expression of the VP7 gene of Korean isolates (CAU-9), viral RNA was purified and used for cDNA amplification by RT-PCR. The VP7 cDNA was cloned, sequenced, and expressed using baculovirus expression system. The result showed that the sequence homologies CAU-9 compared with foreign isolated strains Wa, 417, TMC-II, 95B and SA11 were ranged from 74.0% to 95.1 % of nucleotide sequence and 35% to 43% of amino acid sequence, respectively. High homology of CAU-9 was observed in Japanease isolates 417 (nucleotide sequence homology was 95.1% and amino acid sequence homology was 43%). To express VP7 gene, the VP7 cDNA was cloned into pCR-Bac vector and inserted into the genome of baculovirus adjacent to the polyhedrin promoter by cotransfection of Spodoptera frugiperda (Sf9) insect cells with wild type baculovirus DNA. In antigenic analysis of Sf9 cells inoculated with the recombinant VP7, immunofluorescence assay revealed positive for viral antigens. In metabolic labeling of Sf9 cell lysates infected with recombinant baculoviruses, it was revealed that the protein of 34 kDa was expressed. The limited study of expressed VP7 protein inoculated with guinea pigs failed to elicit neutalizing antibody. As a results, the sequence analysis and expression of VP7 protein of rotavirus CAU-9 isolated from an infant in Korea could permit the conformation and development of virus like particles which may be useful in designing vaccine strategy.

• Toxicological Research
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• 제34권3호
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• pp.191-197
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• 2018

In 2015, a candidate for the second national reference standard (NRS) of Gloydius snake venom was produced to replace the first NRS of Gloydius snake venom. In the present study, the potencies of the candidate were determined by a collaborative study, and the qualification of the candidate was estimated. The potencies of the candidate were determined by measuring the murine lethal titers and lapine hemorrhagic titers of venom against the regional working reference standard (RWRS) for antivenom using the methods described in the previous report for the first NRS of Gloydius snake venom. Three Korean facilities contributed data from a total of 30 independent assays. Subsequently, two foreign national control research laboratories contributed to this collaborative study. The results were calculated using the Reed-Muench method for lethality and determined using a mixed-effects model for hemorrhage. The general common potencies of the lethal and hemorrhagic titers were obtained from the results of the 30 tests performed at three Korean facilities. The results are expressed in micrograms for 1 test dose (TD) with a 95% confidence interval as follows: a lethal titer of $90.13{\mu}g/TD$ (95% confidence interval = $87.39{\sim}92.86{\mu}g$) and a hemorrhagic titer of $10.80{\mu}g/TD$ (95% confidence interval = $10.46{\sim}11.14{\mu}g$). In addition, the candidate preparation showed good quality evaluation according to the results of the quality estimation of the candidate and is judged to be suitable to serve as the Korean NRS for snake venom. In conclusion, the second NRS of Gloydius snake venom was established in this study and will be used for national quality control, including a national lot release test of Korean antivenom products.

• Pediatric Infection and Vaccine
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• 제8권1호
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• pp.90-93
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• 2001

목 적 : 소아 감염병 중 가장 흔한 상기도 감염의 원인이 되는 A군 연쇄구균 상기도 감염은 급성기 합병증 뿐만 아니라, 류마티열이나 사구체 신염과 같은 후기 합병증의 가능성 때문에 정확한 진단과 치료가 중요하다고 하겠다. A군 연쇄구균이 원인이 되는 상기도 감염은 5~30% 정도에 불과하나 실제 상기도 감염시 많은 임상의사들이 부적절한 항생제 사용을 하게되는 것을 볼 수 있다. 또한 항균제의 부적절한 사용에 따른 항균제 내성 세균이 증가추세에 있는 실정이고, 외래 상기도 감염 환자에게 있어서 항생제 투여 여부를 결정할 수 있는 당위성을 제공하는 신속검사에 대한 유용성을 알아보고자 한다. 방 법 : 2000년 10월부터 2001년 1월까지 경희의료원 소아과 외래와 마산파티마병원 소아과 외래를 방문하였던 상기도 감염 환아 중 임상적으로 인두 편도염이 의심되었던 87명을 대상으로 신속검사와 인두배양검사를 동시에 실시하였다. 환아로 부터 소독된 면봉을 이용하여 양쪽 편도와로 부터 검체를 2회 채취하여 신속검사와 혈액한천배지에 각각 접종하였다. 신속검사는 접종즉시 키트내 삽입된 지침서에 따라 시행하였고 혈액한천배지에 접종하였던 배지는 흔히 사용되는 방법으로 배양하여 두 검사의 일치율 유무를 검토하였다. 결 과 : 인두 편도염 증세를 보인 87명의 환아 중 균배양 검사에서 39명에서 A군 연쇄구균이 배양되었으며, 이중 신속검사에 대한 양성예측율은 92.3%(39명 중 36명)이었으며, 예민도는 81.8%(44명 중 36명)을 보였다. 신속검사의 특이도는 93.0%(43명 중 40명)이었으며, 음성 예측율은 83%(48명 중 40명)을 보였다. 결 론 : 신속검사의 양성 예측율과 특이도가 매우 높은 결과를 보였으며, 외래 상기도 감염 환자에서의 항생제 사용여부를 결정하는데 있어 간편하게 시행할 수 있는 방법이라고 생각된다.

• 생명과학회지
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• 제30권4호
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• pp.402-409
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• 2020

신경괴사증바이러스(NNV)는 25 nm의 작은 입자 크기에 RNA1 (3.4 kb, RdRp), RNA2 (1.4 kb, capsid protein) 두 가닥의 RNA를 유전정보를 가진다. NNV는 1980년대 말 처음 보고된 이후 전 세계적으로 120여종의 어류에 감염을 일으키며 심각한 피해를 일으키고 있는 바이러스이다. NNV 감염에 의한 피해를 최소화하고 효율적인 백신들을 개발하기 위해서는 무엇보다 NNV 감염에 따른 세포내 신호전달체계를 이해할 필요가 있다. NNV는 세포내 감염 이후 숙주가 가진 바이러스 복제에 필요한 요소들을 이용할 수 있도록 숙주세포의 cell cycle arrest 등의 기작을 이용하는 것으로 알려졌다. 반면에 숙주 세포는 NNV와 감염된 세포를 제어하기 위해 RIG-1-like receptor signaling pathway 등을 통해 NNV 감염을 인지한 다음 IFN signaling pathway를 통해 항바이러스 작용에 필요한 ISG들을 발현시킨다. 또한 감염된 세포들을 사멸시키기 위해 ER stress를 통한 unfolded protein response (UPR), mitochondria-mediated cell death 작용을 통해 감염된 세포의 apoptosis를 유발한다. NNV 감염 기작에 대한 세포신호전달연구는 아직 초기단계이며 검증해야 할 pathway들이 아직도 많이 남아있는 상황이다. 따라서 NNV 감염과 연관된 다양한 세포신호전달체계를 탐색하고 질병 특이적인 세포신호전달체계를 이해함으로써 신속하고 정확한 진단법 및 백신 개발에 많은 도움이 될 것으로 생각된다.

• Nuclear Medicine and Molecular Imaging
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• 제43권5호
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• pp.451-458
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• 2009

목적: 광학적 분자 발광영상은 발광효소를 이용하여 발광하는 빛의 신호를 영상화하는 기법이다. 발광하는 광량이 분자 변화 또는 세포 수와 비례하고 신호 대 잡음비가 좋아서 영상을 얻고, 정략분석이 가능하다. 이 연구에서는 정량적 분석을 위해 비례적 측정 정량화기법을 개발하였다. 대상 및 방법: 개발 중인 ALIS (animal light imaging system) 광학발광영상 카메라에서 박테리아 수를 달리한 박테리아 광원 3가지와 또 다른 3가지 광원을 이용하여 발광영상을 측정하였다. 일정한 세기의 광원에 대해서 측정 방법을 수학적으로 표현하기 위해 cd와 광속의 개념을 이용하여 간단한 수식을 유도하였다. 실험을 통해 측정시간 1초를 기준으로 얻어진 값으로 표준 정량화 함수를 얻었다. 얻어진 정량화 함수를 이용하여 박테리아를 이용한 실험에 필요한 함수의 상수 값을 구했으며, 세 가지 세기가 다른 광원을 이용하여 측정한 값을 측정시간과 함께 정량화 식에 대입하여 측정하였다. 결과: 표준측정함수를 이용하여 측정시간에 비례하는 정량적 값을 얻을 수 있었다. 정량화결과를 측정시간으로 나눠준 값은 일정하였으며, 측정시간에 대비한 비례적 값을 얻을 수 있었다. 결론: 측정한 결과를 정량화 함수에 대입하여 정량화시킨 값은 표준정량화 하기에 적합하였다. 이 정량화 방법은 다른 광학적 분자영상 장비에 적용하여도 빛의 세기를 표준화 시킬 수 있을 뿐 만 아니라 성격이 다른 각각의 광원에 대해서도 보다 정량적인 분석을 시행할 수 있으므로, 새로운 표준 정량화 방법으로 발전시킬 수 있을 것으로 기대한다.

• Journal of Microbiology
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• 제45권1호
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• pp.21-28
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• 2007

In order to search for specific genotypes related to this unique phenotype, we used whole genomic DNA microarray to characterize the genomic diversity of Helicobacter pylori (H. pylori) strains isolated from clinical patients in China. The open reading frame (ORF) fragments on our microarray were generated by PCR using gene-specific primers. Genomic DNA of H. pylori 26695 and J99 were used as templates. Thirty-four H. pylori isolates were obtained from patients in Shanghai. Results were judged based on In(x) transformed and normalized Cy3/Cy5 ratios. Our microarray included 1882 DNA fragments corresponding to 1636 ORFs of both sequenced H. pylori strains. Cluster analysis, revealed two diverse regions in the H. pylori genome that were not present in other isolates. Among the 1636 genes, 1091 (66.7%) were common to all H. pylori strains, representing the functional core of the genome. Most of the genes found in the H. pylori functional core were responsible for metabolism, cellular processes, transcription and biosynthesis of amino acids, functions that are essential to H. pylori's growth and colonization in its host. In contrast, 522 (31.9%) genes were strain-specific genes that were missing from at least one strain of H. pylori. Strain-specific genes primarily included restriction modification system components, transposase genes, hypothetical proteins and outer membrane proteins. These strain-specific genes may aid the bacteria under specific circumstances during their long-term infection in genetically diverse hosts. Our results suggest 34 H. pylori clinical strains have extensive genomic diversity. Core genes and strain-specific genes both play essential roles in H. pylori propagation and pathogenesis. Our microarray experiment may help select relatively significant genes for further research on the pathogenicity of H. pylori and development of a vaccine for H. pylori.

• 대한임상검사과학회지
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• 제47권3호
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• pp.105-111
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• 2015

2013년 12월 말, 에볼라 바이러스는 서아프리카에서 발발했다. 기니를 시작으로 라이베리아, 시에라리온으로 빠르게 퍼지게 되었다. 에볼라 바이러스(자이르형 에볼라 바이러스)는 외피, 비분절, 음성단일가닥 RNA바이러스이다. 에볼라 바이러스는 인수공통 전염병이다. 바이러스는 처음 감염된 야생동물과 접촉 한 후, 혈액, 땀, 소변, 정액, 모유 등의 체액과의 직접적인 접촉을 통해 사람 대 사람으로 전염된다. 그러나 공기로 전염되지는 않는다. 잠복기는 2~21일이다. 에볼라 바이러스는 내피세포, 단핵 식세포, 간세포를 감염시킨다. 감염 후 바이러스가 숙주의 면역 시스템을 회피하기 위해 여러 메커니즘을 사용한다. 이것은 혈관, 간 등의 내부 조직 및 기관에 막대한 피해를 주어 죽음에 이르게 한다. RNA 바이러스에 대한 대부분의 실험은 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)라 기술에 의존한다. 이 방법은 매우 민감하지만 숙련된 과학자, 전원 공급 장치 요구하며 비싸다. 스트립 분석기법(효소면역분석법, ELISA)은 에볼라 바이러스 항원 또는 항체를 검출한다. 이 기법은 저렴하며, 전기, 냉장 장치가 필요하지 않다. 실험적인 치료 및 백신 개발에 관한 지속적인 노력에도 불구하고, 에볼라 바이러스 질환은 현재 치료법에 제한이 있다. 그러므로 신속하고 정확한 진단이 환자관리, 감염예방, 관리대책에 있어서 매우 중요하다.