C57BL/6 마우스에서 자외선(Ultraviolet, UV) B 조사에 의한 표피 멜라닌세포의 변화에 대한 보중익기탕(Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang, BZYQT)의 효과를 관찰하였다. 마우스에 UVB를 매일 $80\;mJ/cm^2$ (0.5 mW/sec)씩 7일간 조사하고, BZYQT를 UV 조사전 또는 조사 후에 복강내주사 또는 피부에 도포하여, 멜라닌세포 형성 억제효과 및 형성된 멜라닌세포에 대한 미백 효과를 dihydroxyphenylalanine (DOPA) 염색으로 관찰하였다. 마우스의 귀등쪽 표피를 분리하여 관찰한바, 정상대조군에서는 $mm^2$ 당 11-16개의 멜라닌세포가 관찰되었으며, UV 조사 일주일 후 발달된 가지를 가진 DOPA양성 멜라닌세포는 급격히 증가하였다. 멜라닌세포 형성 억제 실험에서는 평균치를 기준으로 복강 내 주사군에서 16.3%, 피부도포군에서 26.6%(p<0.01)의 효과가 관찰되었으며, 형성된 멜라닌세포의 감소 효과 실험에서는 평균치를 기준으로 복강 내 주사군의 경우 3주에 24.0%(p<0.01), 6주에 26.0%(p<0.01)의 효과가 관찰되었고, 피부도포군의 경우 3주에 5.2%, 6주에 12.5%(p<0.05)의 효과를 보였다. 이상의 결과는 BZYQT가 UV에 의한 멜라닌세포 형성 억제제 및 미백제로서의 적용 가능성을 제시하였다.
본 연구는 아직 기능성 입증이 미비한 녹차나무 씨 추출물을 사용하여 자외선을 조사한 인체 피부 섬유아세포에서 항산화 효능과 MMPs 및 collagen의 변화를 살펴봄으로써 광노화 억제 효능을 평가하였다. 녹차나무 씨 추출물 농도별 라디칼 소거능을 살펴보기 위하여 ABTS와 DPPH 라디칼 소거능을 측정한 결과 녹차나무 씨 추출물 농도 의존적으로 소거능을 증가시켰다. 25 $mJ/cm^2$ 자외선을 조사한 인체 피부 섬유아세포에서 녹차나무 씨 추출물의 농도별(10 ${\mu}g/mL$, 30 ${\mu}g/mL$, 50 ${\mu}g/mL$) 처리가 미치는 영향을 살펴보았다. 항산화 효소(SOD, GPx, catalase) 활성의 변화를 측정한 결과에서 자외선 조사에 의하여 감소한 활성을 녹차나무 씨 추출물의 처리가 유의적으로 증가시켰음을 확인하였다. 또한 녹차나무 씨 추출물의 처리는 MMP-1의 합성을 감소시키고 collagen의 합성을 증가시켰으며, MMP-1, MMP-3, MMP-9의 mRNA 발현을 감소시키고 type-1 collagen의 mRNA 발현을 증가시켰다. 따라서 녹차나무 씨 추출물은 항산화 활성을 지녔으며 자외선 조사에 의한 활성산소종으로부터 보호하여 MMPs 발현을 감소시키고 collagen 분해를 억제시켜 피부 노화억제에 긍정적인 영향을 미쳤으며, 이러한 기능성 입증으로 녹차나무의 활용 증가를 기대할 수 있다.
The purpose of this study is to investigate the protective effects of Yukmijiwhang-tang(YM) water extracts against the UVB irradiation on the human keratinocyte HaCaT cells. We observed the effects of YM on the oxidative stress, gene expression of pro-inflammatory cytokine such as TNF-${\alpha}$ and IL-$1{\beta}$, and matrix metalloproteinase-9 in UVB-irradiated HaCaT cells. On the effects of oxidative stress and antioxidant function on the treatment with YM, The activity of xanthine oxidase(XO) was significantly decreased by treatment of YM in all the concentrations(p<0.01). The activity of superoxide dismutase(SOD) and catalase(CAT) was significantly increased by treatment of YM in a dose dependent manner(p<0.05 and p<0.01). DPPH radical was erased by treatment of YM under dose of $500{\mu}g/m{\ell}$ concentration. Treatment of HaCaT cells with YM had also significantly reduced intracellular ROS produced by UVB irradiation in a dose dependent manner(p<0.05, p<0.01, p<0.001). Gelatin zymography assay showed that YM downregulated the MMP-9 activity in UVB-irradiated HaCaT cells. RT-PCR analysis revealed that YM suppressed the expression of IL-$1{\beta}$ and MMP-9 however, it has no effects on the expression of TNF-${\alpha}$ and MMP-3. Our study suggests that Yukmijiwhang-tang exert protective actions on the UVB-irradiated HaCaT cells largely by anti-oxidative and anti-inflammatory processes.
칼슘, 마그네슘과 같은 양이온은 피부 장벽을 보호하는 기능이 있다고 알려져 있다. 본 연구의 목적은 칼슘, 마그네슘, 망간, 불소로 이루어진 미네랄워터의 피부 장벽 보호 기능을 확인하기 위한 것이다. 피부가 자외선에 노출되게 되면 밀착연접(tight junction, TJ)이 파괴되며, 밀착연접으로 이루어진 피부 장벽도 손상 받게된다. 미네랄워터가 자외선에 의해 손상된 피부의 장벽기능을 보호할 수 있는지 평가하기 위해 인공피부 모델을 이용한 실험을 진행하였다. 인공피부에 자외선을 조사하고 미네랄워터를 처리하면 피부 장벽 손상을 막아준다. TJ permeability assay를 통하여 자외선 처리 시 손상된 밀착연접 장벽이 미네랄워터 처리에 의해 유지되는 것을 확인하였다. 각질형성세포를 이용한 실험에서 미네랄워터가 밀착연접 구조를 유지시켜 주고, 자외선에 의해 감소된 occludin 단백질의 생성량이 회복되는 것을 확인하였다. 따라서 본 연구를 통해 미네랄워터는 자외선에 의한 피부 장벽 파괴를 막아주는 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
Objectives : The purpose of this study is to investigate the effect of Shinsuwisaengtang (SSWST) extracts on antioxidant activity and inhibition of phototoxicity as a medicine for skin damage due to ultra violet stimulation. Methods : To determine the cytotoxicity of Hs68 cells from SSWST extracts, we investigated cell viability by MTT assay. To determine the protective effect of phototoxicity, we investigated cell viability after UVB radiation. The DPPH radical scavenging activity was examined to determine the antioxidant effect of SSWST extracts. Hoechst 33258 staining was performed to observe the protective effect of SSWST on UVB. Results : The cytotoxicity of SSWST extracts in Hs68 cells was not appeared significantly in all concentration. SSWST extracts significantly increased the viability of UVB-stimulated Hs68 cells at a concentration of 25, 50 and $100{\mu}g/ml$. SSWST extract showed higher DPPH radical scavenging than the control group. It was observed that SSWST extracts inhibited the apoptosis of the UVB-stimulated Hs68 cells through a fluorescence microscope. Conclusions : It was observed that SSWST did not induce cytotoxicity at a constant concentration and had a protective effect on phototoxicity and an antioxidant effect. Thus, it is considered that it maybe used as a medicine to cure skin damage caused by UVB and photoaging changes in the future.
두릅순에서 얻은 70% 에탄올 추출물의 in vitro 항산화 효과를 측정하고, UVB에 의한 피부광노화를 유도하는 주요 원인인 ROS의 생성을 억제하는 효과가 있는지 알아보기 위하여 인간유래각질세포 (HaCaT)를 이용하여 실험을 수행하였다. 두릅순의 총 폴리페놀과 플라보노이드 함량은 각각 20.15 mg tannic acid/g dry wt, 18.75 mg rutin/g dry wt 이었고, 70% 에탄올 추출물의 DPPH 라디칼을 소거능 ($IC_{50}$)은 $98.5{\mu}g\;AA\;eq./mL$이었으며, $1,000{\mu}g/mL$ 농도에서 ABTS 라디칼 소거능과 환원력 (FRAP)은 각각 $41.8{\mu}g\;ascorbic\;acid\;(AA)\;eq./mL$과 $29.7{\mu}g\;AA\;eq./mL$로 우수한 항산화효과를 보였다. 두릅순 추출물을 HaCaT 세포에 24시간 전처리했을 때 UVB 조사에 의한 ROS 생성이 유의하게 감소되었으며, 산화적 스트레스에 민감하게 반응하는 전사인자인 Nrf-2와 각질세포에서 ROS를 제거하는 역할을 하는 주요 항산화효소인 SOD-1의 단백질 수준의 발현은 증가한 반면, UVB 조사에 의하여 증가하였던 HO-1의 단백질 발현은 감소되었다. 그러나, catalase의 단백질 발현에는 영향을 주지 못하였다. 본 연구결과는 두릅순 70% 에탄올 추출물에 함유된 항산화효능이 우수한 어떤 페놀화합물들이 UVB 조사로 인하여 생성된 ROS를 직접적으로 제거할 뿐 아니라 각질세포에 존재하는 방어시스템의 활성화를 통하여 산화적 스트레스로 인한 악영향을 막아줄 가능성을 제시하고 있다. 따라서, 두릅순 70% 에탄올 추출물은 UVB에 의한 피부손상 및 피부광노화를 억제하는 기능성식품 및 화장품 소재로 이용될 수 있을 것이다.
The aim of this study is to evaluate the effects essential oil from Lavendular officinalis on the production of UVB-irradiated-induced nitric oxide(NO), in vivo and in vitro. NO is a recently discovered mediator of cell communication involved in a variety of physiological and pathophysiological processes. This enzyme is present in various tissues including smooth muscle cells and macrophages and take part in several immunopathological process. In vitro, the cytotoxicity and cell viability of aroma oil was evaluated by the MTT assay in the concentration of 0.01, 0.05, 0.1%. And, the effect of aroma oil was investigated to production of NO in human fibroblast cells line CCD-986sk ($2{\times}10^5$ cell/well) after UVB-irradiation with aroma oil (0.01, 0.1, and 1%). The result showed that aroma oil did not affected the production of NO. In vivo, it was investigated to production of NO after UVB- irradiation with aroma oil. The experimental groups were divided into four groups. Aroma oil was stimulated the production of NO by itself. As the results, all of the in vitro and in vivo, aroma oil were affected production of NO by dependent the concentration-manners.
본 연구는 포도수확 후 버려지는 가지를 이용한 포도전정가지 추출물(grape pruning stem extracts, GPSE)에 함유된 polyphenol류가 UVB로 유도된 HR-1 hairless mice의 손상된 피부에 대한 피부증식 억제, 항 알레르기, 아포토시스 억제능을 분석하여 기능성 화장품 소재로서의 응용 가능성을 확인하고자 하였다. 포도전정가지에서 polyphenol 성분을 80% 에탄올로 추출하고 여과하여 농축한 후, 동결건조하여 $-20^{\circ}C$에 보관하면서 사용하였다. GPSE의 유효성분 함량은 HPLC를 사용하여 선행연구논문에 보고하였다. 피부손상을 유도하기 위해 UVB를 HR-1 hairless mice에 조사하였고, GPSE가 피부 알레르기 반응을 일으키는지 확인하기 위하여 toluidine blue 염색을 통하여 비만세포의 수를 확인한 결과 포도전정가지 추출물(GPSE)를 도포한 그룹에서는 정상군과 유사한 결과를 나타내어 GPSE 도포군은 알레르기 반응이 없으며 suncream 대조군 대비 현저하게 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 표피의 증식표지자인 PCNA 면역조직화학적 염색을 시행한 결과 GPSE와 serum base 혼합물의 모든 농도에서 대조군 대비 평균 42%로 표피상피세포 증식 억제 효과를 나타내었다. 또한 GPSE와 serum base 혼합물이 자외선 조사로 인한 아포토시스 억제율은 대조군 대비 평균 27% 억제 한다는 것을 알 수 있었다. 이상의 결과로 포도전정가지로부터 추출한 페놀성 화합물이 화장품 기초 원료인 serum base에 함유토록 제조된 GPSE는 피부증식 억제, 알레르기 억제, 아포토시스 억제효과를 얻을 수 있었다. 본 연구의 의의는 지역포도농가에서 수확 후 버려지는 포도전정가지에서 폴리페놀류와 같은 유효성분을 확보하여 고부가가치를 창출할 수 있는 기능성화장품 원료로서의 활용 가치가 높을 것으로 기대된다.
자외선은 피부 광노화의 주요 요인이며, 효과적인 자외선 차단제가 피부의 건강과 아름다움을 위해 필요하다. 본 연구는 세포 실험을 통하여 자외선에 의해 유도된 세포 사멸, 산화적 스트레스, matrix metalloproteinase 1 발현에 미치는 죽여추출물의 영향을 알아보고자 수행하였다. HaCaT 인간 각질세포를 여러 농도의 죽여추출물 유무 조건에서 자외선을 조사하고 세포의 생존율과 생화학적 과정들의 변화를 분석하였다. 죽여추출물은 자외선을 조사한 세포의 생존율을 증진시켰고, procaspase 3가 활성화 형태로 절단되고, Bax/Bcl-2 비율이 증가하는 세포 자살 과정을 완화시켰다. 죽여추출물은 자외선에 노출된 세포에서 활성산소의 발생과 지질 과산화도 감소시켰다. 또한 죽여추출물은 자외선에 의해 자극된 matrix metalloproteinase 1의 발현과 c-Jun N-terminal kinase의 인산화를 억제하였다. 본 연구는 죽여추출물이 자외선에 의한 세포 사멸, 산화적 스트레스, 그리고 matrix metalloproteinase 1 발현을 억제함을 보여 주었으며, 이 추출물이 피부 광노화의 일부 현상을 억제하는 화장품 원료로 유용함을 시사하였다.
본 연구는 무창약등의 계함에서 vitamin D-결핍사료로 31일간 사육한 육용 Hubbard계 병아리의 전신에 UVB를 0.204또는 0.408mJ/$\textrm{cm}^2$(조사시간 30분 또는 60분) 조사하고 경시적으로 간장내 25-hydroxyvitamin $D_3$[25(OH)$D_3$] 함양을 측정코자 실시되었다. 먼저 지질을 추출하고 Sep-Pak silica cartridge에 의하여 25(OH)$D_3$를 분리한 다음, 순상 HPLC에 의하여 25(OH)$D_3$ 함양을 분석하였다. UVB를 조사하지 않은 대조구 병아리의 간장중 25 (OH)$D_3$ 농도는 평균 17.5ng/g이었으며 0.204mJ/$\textrm{cm}^2$ 처리후 순시간대의 농도는 37.8ng/g이었고 66시간대에 40.50ng/g의 최고치를 보였다. 그 후 간장의 25(OH)$D_3$ 함량이 감소되었다. 0.408mJ/$\textrm{cm}^2$ 조사시에는 12시간대에 35.7ng/g이었고 42시간대에 61.4ng/g의 최고치를 나타내었다. 그 후 감소되어 138시간대에 39.50ng/g을 보였다. UVB 조사로 증가된 절대량은 0.204mJ/$\textrm{cm}^2$때 23ng/g, 0.408mJ/$\textrm{cm}^2$때 43.9ng/g(191%)으로서 열사선양을 2배로 하였을 때 간장중 25(OH)$D_3$의 생산량은 약2부였다. 그리고 조사선양을 2배로 하니까 간장중 25(OH)$D_3$의 최고치가 24시간 더 빨리 나타나는 경향을 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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