A collagenase was isolated from the culture filtrate of Vibrio mimicus (ATCC 33658). The enzyme was purified to homogeneity by ammonium sulfate precipitation and DEAE-Sephadex A-50 chromatography, which an activity recovery of 22%. The molecular weight of the purified enzyme was estimated to be 42 kDa by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and gel filtration, indication a monomer structure. The optimum pH and temperature od the enzyme for insoluble collagen (Type I) were around 7.75 and 28$\circ$C, respectively. Some chelating agents and serine protease inhibitor inactivated the enzyme, but L-cysteine and histidine did not affect the activity. The amino acid composition indicated that the collagenase contained high amounts of amino acid residues of glycine and alanine. The K$_{m}$ and R$_{cat}$/K$_{m}$ values for the collagenase, using insoluble collagen (type I) as substrate, were 2.86 mg/ml and 972.28 U/mg-protein, respectively.
Journal of Physiology & Pathology in Korean Medicine
/
v.25
no.3
/
pp.528-532
/
2011
This study was designed to investigate the collagen metabolism and tyrosinase activity of Meretrix extracts (ME). The effect of ME on type I procollagen production and collagenase activity in human normal fibroblasts HS68 after UVB (312 nm) irradiation was measured by ELISA method. The tyrosinase activity after treatment of ME was measured as well. Type I procollagen production was recovered by ME in UVB damaged HS68 cells. The increased collagenase activity after UVB damage was significantly recovered by ME. The tyrosinase activity and L-DOPA oxidation were significantly reduced as well. However, the effects on tyrosinase activity and L-DOPA oxidation were not powerful enough to be used as whitening agents. ME showed the anti-wrinkle effects and some whitening effects in vitro. These results suggest that ME may be a useful drug as an anti-wrinkle treatments.
Both SCC 12 and SCC 13 cell lines were derived from squamous cell carcinoma (SCC) of the skin (Wu and Rheinwald, 1981). In the present study, we compared the inherent invasive activity in their raft cultures where most in vivo characteristics of epidermis can be reproduced by cell culture method. The raft culture of SCC 12 cell line produced many invading colonies within the collagen lattice and basal-like cells in the middle of differentiating cell layers, but no invasive activity was observed in the SCC 13 raft culture. We investigated which factors are implicated in inherent invasive activity of SCC 12 cell line by examining basal levels of type I collagenase, EGF receptor, fibronectin, and its receptor in two cell lines. Among them, only type I collagenase was significantly higher in invasive SCC 12 cells than in non-invasive SCC 13 cells. Furthermore, we tried to investigate mechanisms underlying between SCC 12 cell's inherent invasive activity and its high basal level of type I collagenase. As one of them, discrepancy in TGF alpha mediated responses between two cell lines was observed. In SCC 13 cells, TGF alpha initially stimulated type I collagenase at 12 h after TGF alpha treatment and then its down regulation was followed from 24 h even though TGF alpha was continuously present in the medium. However in SCC 12 cells, TGF alpha continuously stimulated type I collegenase up to 48 h. We propose that defect in EGF receptor's down-regulation may be involved in lack of type I collagenase's down-regulation and its possible connection to invasive activity of SCC 12 cell line.
Amongst 27 isolates from deteriorated leather samples, Arthrobacter creatinolyticus KP015744 zzx28 was found to be an efficient collagenase producer. Collagenase production of 13.33 µmoles/min was shown at an optimum temperature at 37℃ after 72h and at pH 7.5 by using 2 ml/dL inoculum in 10 mg/ml collagen peptide type I as a substrate. In presence of Hg2+, EDTA and 𝛽-mercaptoethanol the collagenase production by the isolate was strongly inhibited however Fe2+, Ca2+and DMSO enhanced production of the enzyme. Specific activity was found to be 19.46×103 U/mg and molecular weight 66 kD by SDS PAGE. Isolate also has potential to hydrolyze keratin which is another important protein found in leather. Experimental results propose that collagenase can be effectively used as a tool for collagen and keratin rich solid waste treatment.
Objectives : Draconis Resina (DR), the resin of Daemonorops draco Bl., is used to circulate the blood and to stop bleeding. It also has been used to generate flesh including ulceration. The present study investigated the effects of DR extract on collagen metabolism in human fibroblasts and tyrosinase activity in mushroom tyrosinase.Methods : The effect of DR extract on type I procollagen production (collagen type I synthesis) and collagenase (matrix metalloproteinase-1, henceforth referred as MMP-1) activity in human normal fibroblasts cell line. Hs68 cells after ultraviolet B (UVB, 312 nm) irradiation was measured using the enzyme - linked immunosorbent assay (ELISA). The tyrosinase activity was also measured to find out the whitening effects in mushroom tyrosinase by ELISA method.Results : There was no cytotoxicity at DR extract at concentrations of 10 μg/ml, 30 μg/ml, and 100 μg/ml. DR extract significantly inhibited the increase of collagenase activity, whereas it did not show on the reduction of type I procollagen in UVB damaged Hs68 cells. DR extract did not reduce the L - DOPA oxidation. However, it significantly reduced the tyrosinase activity by DR extract at concentraions of 0.1 mg/ml, 1 mg/ml and 10 mg/ml.Conclusions : In conclusion, DR showed the anti-wrinkle and whitening effects via the inhibition of collagenase production and the tyrosinase activity. These results suggest that DR may have potential as an anti-aging ingredient in cosmetic herb markets.
The collagenase gene from Vibrio parahaemolyticus 04 was subcloned into an expression vector pET-29b. The recombinant collagenase was expressed in Escherichia coli BL2l(DE3) and partially purified by Hi-Trap affinity and Sephacryl S-100 size exclusion chromatographies. The recombinant enzyme was purified by 43.7-fold and the yield was 73%. SDS-PAGE revealed that the molecular weight of the enzyme was approximately 35 kDa. Substrate specificity study of the enzyme displayed that the enzyme showed the highest activity with the type I collagen and the synthetic peptide, Z-GPGGPA, indicating that the enzyme was indeed a collagenase. The enzyme showed broad pH optimum around pH 6-12 and was stable between pH 5.5 and 11.5. The optimum temperature for the type I collagen degradation was $35^{\circ}C$. The thermostability measurement of the enzyme indicated that the enzyme was stable up to $55^{\circ}C$, but the activity was diminished quickly above $60^{\circ}C.$
W. J. Yang;S. J. Yang;Kim, W. H.;T. B. Kang;Park, S. S.
Proceedings of the SCSK Conference
/
2003.09b
/
pp.239-240
/
2003
Type I (collagen) and procollagen are reduced in aged human skin. This reduction could result from increased degration by metalloproteinases and from reduced procollagen synthesis and skin collagenase is required for initiation of the degration of type I collagen. In the present study, we study on assay the collagen and collagenase in natural plants using the fibroblast human skin cell. We select the 15 kind of plants used to herbal and 4 kind of fraction(by methylene chloride, ethyl acetate, n-butanol, water). Among these extract, the ethyl acetate fraction from benincasa hispida/prunus persica, trichosanthes kiriowii, trogopterus xanthipes and methylene chloride fractions from benincasa hispida/prunus persica, torilis japonica and n-butanol fraction from cnidium officinale, chrysanthemum sibiricum were selected for further experiments as they exhibited distinctive amount of collagen compared to other natural extracts. These extracts were again subjected to collagenase assay test. Benincasa hispida/prunus persica extract was shown to have exellent collagen synthesis activity from result of the collagen assay test and the other extract was shown to have over 130% of collagen synthesis activity. But, in the study of collagenase assay test just only trogopterus xanthipes extract was shown to have collagenase inhibition.
Objectives : This study was designed to investigate the collagen metabolism and tyrosinase activity of Angelicae Gigantis Radix extracts (AGR). Methods : The effect of AGR on type I procollagen production and collagenase activity in human normal fibroblasts HS68 after UVB (312 nm) irradiation was measured by ELISA method. The tyrosinase activity after treatment of AGR was measured. Results : Type I procollagen production was recovered by AGR in UVB damaged HS68 cells. The increased collagenase activity after UVB damage was significantly recovered by AGR and the tyrosinase activity was significantly reduced. However, the L-DOPA oxidation was not changed. Conclusion : AGR showed the anti-wrinkle effects and whitening effects in vitro. These results suggest that AGR may have potential as an anti-aging ingredient in cosmetic herbs.
Objectives : This study was designed to investigate the collagen metabolism and tyrosinase activity of Sipgeondaebo-tang Pharmacopuncture extracts (SP). Methods : The effect of SP on type I procollagen production and collagenase activity in human normal fibroblasts HS68 after UVB (312 nm) irradiation was measured by ELISA method. The tyrosinase activity after treatment of SP was measured as well. Results : Type I procollagen production was recovered by SP in UVB damaged HS68 cells. The increased collagenase activity after UVB damage was significantly recovered by SP. The tyrosinase activity was significantly reduced as well. However, the L-DOPA oxidation was not changed. Conclusion : SP showed the anti-wrinkle effects and whitening effects in vitro. These results suggest that SP may be a potential pharmacopuncture as an anti-aging pharmacopuncture treatments.
Objectives : Polygoni Multiflori Radix (PMR), the roots of Polygonum multiflorum Thunberg, is used to nourish the blood and yin and used for preventing premature greying of the hair. There are some articles on its preventing effects on the melanogenesis. However, there is no report about its effects on the collagen and elastin. The present study was designed to investigate its effects on collagen metabolism and elastase activity. Methods : The effects of PMR on type I procollagen production and collagenase activity in human normal fibroblasts Hs68 after UVB (312 nm) irradiation were measured by ELISA method. Cells were pretreated with the PMR for 24 hours prior to UVB irradiation. After UVB irradiation, cells were retreated with the sample and incubated for additional 24 hours. The amount of collagen type I was measured with a procollagen type I C-peptide assay kit. The activity of collagenase was measured with a MMP-1 human biotrak ELISA system. The elastase activities after treatment of PMR were measured as well. Results : In the present study, the collagen production was not increased. However, the increased collagenase activity after UVB damage was significantly recovered to $50.2{\pm}14.5%$, $8.2{\pm}3.1%$, and $10.0{\pm}3.3%$ (10, 30, and $100{\mu}g/ml$). The elastase activities (10, 100, and $1000{\mu}g/ml$) significantly reduced to $75.2{\pm}5.2%$, $40.3{\pm}1.2%$, and $27.0{\pm}1.9%$, respectively. Conclusion : PMR showed the inhibitory effects on collagenase and elastase activity. These results suggest that PMR may have potential as an anti-aging ingredient in cosmetic herbal treatment.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.