Phlegm smear testing for acid-fast bacilli (AFB) requires careful examination of tubercle bacilli under a microscope to distinguish between positive and negative findings. The biggest weakness of this method is the visual limitations of the examiners. It is also time-consuming, and mistakes may easily occur. This paper proposes a method of identifying tubercle bacilli that uses a computer instead of a human. To address the challenges of AFB testing, this study designs and investigates image systems that can be used to identify tubercle bacilli. The proposed system uses an electronic microscope to capture digital images that are then processed through feature extraction, image segmentation, image recognition, and neural networks to analyze tubercle bacilli. The proposed system can detect the amount of tubercle bacilli and find their locations. This paper analyzes 184 tubercle bacilli images. Fifty images are used to train the artificial neural network, and the rest are used for testing. The proposed system has a 95.6% successful identification rate, and only takes 0.8 seconds to identify an image.
연구배경 : 저자들은 최근 결핵균의 자극에 의해 peripheral blood monocytes (PBM)에서 IL-$1{\beta}$와 $TNF{\alpha}$가 생성되고, 기도상피세포에서는 IL-8과 RANTES와 같은 chemokine이 생성된다는 사실을 밝힌 바 있다. 이와같은 사실은 기도상피세포가 IL-8과 RANTES와 같은 chemokine을 분비함으로써 결핵의 병인에 능동적으로 참여함을 시사한다고 하겠다. 기도상피세포에서 발현하는 chemokine들이 결핵의 병태생리에 관여한다면, 폐결핵을 일으키는 가진 균주인 H37Rv와 폐결핵을 일으키지 않는 균주인 H37Ra로 자극하였을때 기도상피세포에서 분비되는 chemokine의 성상이 다를 것이라는 가정이 가능하다. 실제로 독성을 가지고 있는 Erdman 균주와 독성을 가지고 있지 않는 H37Ra의 lipoarabinomannan(LAM) 의 구조가 다르고, 이 LAM으로 대식세포를 자극하였을때 H37Ra LAM은 대식세포에서 $TNF{\alpha}$를 생성시키지만 H37Rv LAM은 $TNF{\alpha}$를 생성시키지 못하고 이와같은 차이가 결핵균에 대한 생체의 방어기전을 설명한다는 보고가 있다. 본 연구는 폐결핵의 병태생리에서 기도상피세포의 역할을 규명하고자, 독성이 있는 균주인 H37Rv와 독성이 없는 균주인 H37Ra를 사용하여 결핵균의 독성여부에 따른 기도상피세포에서 분비되는 chemokine의 차이를 연구하고자 하였다. 방 법 : 정상인에서 채취한 말초혈액에서 말초혈액 단핵세포(PBM)를 분리하여, sonicated H37Rv, H37Ra($5{\times}10^5$ bacilli, A TCC) 또는 LPS($10{\mu}l/ml$)로 자극하면서 24시간 동안 배양하였다. 또한 PBM에 대한 interferon gamma($IFN{\gamma}$)의 영향을 평가하고자 PBM를 결핵균으로 자극하기 한 시간전에 $IFN{\gamma}$(10ng/ml, R & D) 로 전처치한 군과 $IFN{\gamma}$ 전처치 없이 자극한 군을 두었다. 24시간후 상층액을 채취하여 상층액의 일부는 $-70^{\circ}C$에서 보관하였고 이후 ELISA kit(R & D)를 이용하여 $TNF{\alpha}$와 $IL-1{\beta}$의 농도를 측정하였다. 배양된 PBM의 상충액(1 : 2 희석액 )으로 배양된 A549 세포를 다시 자극하면서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양후, 상층액은 IL-8, RANTES의 측정을 위하여 $-70^{\circ}C$에서 보관하고, 남아있는 A549 세포에서 tRNA를 추출하였다. 배양 상층액에서는 ELISA kit(R & D)를 이용하여 IL-8, RANTES의 농도를 측정하였고, 추출한 tRNA는 Northern blot analysis를 이용하여 IL-8, RANTES의 mRNA의 양을 측정 정량하였다. 결 과 : 말초혈액 단핵세포를 LPS, H37Rv, 또는 H37Ra로 자극하였을 때 대조군에 바하여 $TNF{\alpha}$와 IL-$1{\beta}$의 생성이 읖미 있게 증가하였다. 독성이 없는 H37Ra로 자극하였을 때가 독성이 있는 H37Rv로 자극하였을 때보다 $TNF{\alpha}$와 IL-$1{\beta}$의 생성이 많았으나 통계적인 유의성은 없었다. $IFN{\gamma}$로 전처치하였을 때 $TNF{\alpha}$와 IL-$1{\beta}$의 생성이 전처치하지 않은 군에 비해 증가하였으나 H37Rv군과 H37Ra군 사이에 통계적으로 유의한 차이는 없었다. A549 세포를 결핵균이나 LPS로 자극한 말초혈액 단핵세포 배양액으로 자극하였을 때, RANTES와 IL-8 의 유전자 발현이 대조군에 비하여 의미있게 증가하였다(p<0.001). 또한 H37Ra 배양액으로 자극한 군에서 H37Rv 배양액으로 자극한 군에 비하여 RANTES와 IL-8의 유전자 발현이 의미있게 증가하였다 (p<0.05). A549 세포를 결핵균이나 LPS로 자극한 말초혈액 단핵세포 배양액으로 자극하였을 때 RANTES와 IL-8의 생성이 대조군에 비하여 의미있게 증가하였다. 그러나 유전자 발현과는 달리, H37Ra 배양액으로 자극한 군에서 H37Rv 배양액으로 자극한 군에 비하여 RANTES와 IL-8의 생성이 증가하였지만 통계적인 유의성은 없었다. 결 론 : 기도상피세포는 폐결핵에서 RANTES와 IL-8과 같은 강력한 chemokine을 분비하여 염증반응을 증폭시킴으로써 폐결핵의 병인에 능동적으로 참여함을 추정할 수 있었다. 그러나 말초혈액 단핵세포에서의 $TNF{\alpha}$와 IL-$1{\beta}$의 생성은 결핵균주의 독성여부에 따라 차이가 없었고, A549 세포에서도 RANTES와 IL-8의 유전자 발현은 H37Ra 에서 유의하게 증가하였으나 RANTES와 IL-8의 생성은 유의한 차이가 없어 결핵균의 독성 여부가 균주에 따른 생체의 면역반응즉 chemokine 생성의 차이 때문이라는 본 연구의 가설을 증명할 수는 없었다.
In order to assay one lot of the potency of tuberculin for intradermic use, four guinea pigs sensitized with heat killed M. tuberculosis were used by the method originally of the Agriculture Research Service Center(A. R. S.) and Bureau of Animal. Industry(B. A. I.) in the United. States of America in which guinea pigs were used on 21st day after sensitization. There is doubt whether the guinea pigs are sensitized or not. Therefore, this study has taken the method of Middle Brook-Dubos hemagglutination test, and observed the humoral hemagglutinating antibody in the blood. The results obtained are as follows. 1. The maximum titer of hemagglutinating antibody was demonstrated 30days after sensitizing the guinea pigs with killed tubercle bacilli. The maximum titer was continued for a period of 45 days and thereafter declined gradually. 2. The swelling and redness of the region of the sensitized guinea pigs was shown to be reached to the maximum size within 24 hours after intradermal inoculation with HCSM tuberculin and gradually reduced 96 hours after inoculation. The swelling and redness could not be detected by macro-observation after 14 days.
An attempt was made to verify the antibacterial activities of the soluble extracts of Gardenia jasminoides(SEGJ) against mycobacteria other than tubercle bacilli (MOTT); M. kansasii, M. scrofulaceum, M. simiae, M. szulgai, M.xenopi, M. avium-intracellulare complex, M. gordonae and M. flarescens. In addition, the effect of the SEGJ on the yellow pigmentation and violet pigmentation (crocin reaction) of the colonies of the MOTT grown on7H10-crocin agar plates was observed. The SEGJ gave a growth stimulatory activity against most species of mycobacteria except for M. szulgai at low concentration of the SEGJ in terms of crocin pigment OD=0.02 or less, but exerted an inhibitory activity at high concentration of OD=0.04 or more. The growth-inhibitory activity of the SEGJ was dose-dependent but the yellow pigmentation of the scotochromogens was not affected by the dose of the SEGJ that was growth-inhibitory. Crocin positive reaction was observed only with M. kansasii.
보관온도 및 기간에 따른 객담내 인형결핵균의 생활력 변화와 객담오염 방지를 위한 방부제의 선택을 위해 도말염색표본에서 현미경으로 항산균을 검출할 수 있었던 41개의 객담으로 관찰한 결과를 보면 다음과 같다. 객담을 $4^{\circ}C$에 보관할 경우 1주까지는 모두 배양검사에서 결핵균이 발육했으나, 2, 3, 4주에서는 각각 9.8%, 19.5% 및 25.8%의 객담이 배양에서 결핵균이 발육하지 않았다. $25^{\circ}C$에서는 1주에서도 19.5%의 객담이 배양음성이었고, 2, 3, 4주에서는 각각 36.6%, 70.7%, 90.2%가 배양음성이라 고온보관으로 균이 많이 사멸하는 것을 알 수 있었다. $25^{\circ}C$에서 객담을 1주이상 보관하면 오염율도 매우 높았다. 이와 같은 오염을 0.5% boric acid(BA), 5% trisodium phosphate(TP) 및 0.5% cetylpyridium chloride(CP) 첨가로 막을 수 있으나, CP를 제외하고는 결핵균에 유독해 방부제로 적합하지 않았다. CP 첨가 객담은 $25^{\circ}C$이상의 여름철 기온에서 3, 4주간 방치해도 각자 61.0% 및 31.7%가 배양에서 결핵균이 발육하였다. 그런데 BA첨가 객담은 같은 기간에 각각 34.1% 및 4.9%만이 배양양성이라 균에 유독함을 알 수 있었다. 따라서 여름철과 같이 기온이 높을 때 객담을 배양할 수 있는 검사실까지 운송하는데 2주이상 걸리는 상황에서는 CP가 유용한 방부제로 이용될 수 있다고 본다.
Despite the incidence of tuberculosis has been greatly reduced with chemotherpy, it is still a common disease in Korea. The pharyngeal and laryngeal tuberculosis usually result from direct contamination of the laryngeal or pharyngeal mucosa by sputum heavily laden with Mycobacterium tuberculosis, secondary infection from the lungs via lymphatic or hematogenous routes, or a primary affection from inhaled tubercle bacilli. Recently the authors experienced a pharyngolaryngeal tuberculosis and report this case with brief literatures review.
Four stereoisomers of inositol p-aminosalicylate, that is hexaris-O-(p-aminosalicylyl)-myo-inositol, hexaris-O-(p-aminosalicylyl)-muco-inositol were synthesized by p-aminosalicylyl chloride with myo-, epi-, scyllo-, and muco-inositol respectively. Their antibacterial activity was tested against human type tubercle bacilli $H_{37}$/Rv, in contrast to 1.25.gamma./ml of p-aminosalicylic acid used as control. Hexaris-O-(p-aminoslicylyl)-muco-inositol showed the strongest antibacterial action at 0.625.gamma./ml, the other compounds more or less active than p-aminosalicylic acid.
Hamidieh, Faezeh;Farnia, Parissa;Nowroozi, Jamileh;Farnia, Poopak;Velayati, Ali Akbar
Tuberculosis and Respiratory Diseases
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제84권1호
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pp.1-12
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2021
Mycobacterium tuberculosis has infected more than two billion individuals worldwide, of whom 5%-10% have clinically active disease and 90%-95% remain in the latent stage with a reservoir of viable bacteria in the macrophages for extended periods of time. The tubercle bacilli at this stage are usually called dormant, non-viable, and/or non-culturable microorganisms. The patients with latent bacilli will not have clinical pictures and are not infectious. The infections in about 2%-23% of the patients with latent status become reactivated for various reasons such as cancer, human immunodeficiency virus infection, diabetes, and/or aging. Many studies have examined the mechanisms involved in the latent state of Mycobacterium and showed that latency modified the expression of many genes. Therefore, several mechanisms will change in this bacterium. Hence, this study aimed to briefly examine the genes involved in the latent state as well as the changes that are caused by Mycobacterium tuberculosis. The study also evaluated the relationship between the functions of these genes.
Since Robert Koch found tubercle bacilli in 1882, the studies on tubercle bacilli of human and animal had been carried out. Being old tuberculin(OT) introduced in 1890, the specificity of the diagnosis of tuberculosis has been improved by continual uses of heat concentrated synthetic medium(HCSM) and purified protein derivatives(PPD) tuberculin. Now, two types of tuberculin test are used worldwidly ; the single intradermal test(SIT) using bovine tuberculin and the single intradermal comparative tuberculin test(SICTT) using avian and bovine tuberculins. In the SICTT, each countries have used with different combination of both avian and bovine tuberculins' titers. However, this kinds of studies have not reported in Korea. Therefore, the studies on the combination of their tuberculins' titers were performed through intradermal test of guinea pigs sensitized with either Mycobacterium bovis or M avium and were examined in 10 cattles of SIT positive reactors. Also, IFN-${\gamma}$ assay, the latest diagnostic method of bovine tuberculosis, was experimentally applied to SIT positive reactors. For determining the optimal titers, sensitized guinea pigs with M bovis and M avium were intradermally injected avian and bovine tuberculin. In guinea pigs sensitized with M bovis, bovine tuberculin 50 T.U. showed significant difference from all tested concentrations of avian tuberculin(p < 0.05). In guinea pigs sensitized with M avium, there is significantly different between bovine tuberculin and avian tuberculin by 25 T.U.(p < 0.01). Therefore, optimal titers of bovine and avian PPD tuberculins' titers for the SICTT in Korea were 5,000 and 2,500 tuberculin units, respectively, and the swelling diffences between bovine and avian site in SIT positive reactors were above 3mm. Also, in IFN-${\gamma}$ assay, the 9 SIT positive reactors were showed all the positive reactions.
환자는 9개월간의 적절한 화학 요법에도 불구하고 지속적으로 균양성인 개방성 공동을 가진 26세의 남자로 좌측 상폐야에 국한된 직격 $4{\times}5cm$ 크기의 공동을 가지고 있었다. 저자들은 난치성 폐결핵으로 판단 후 화학요법과 함께 인공 기흉을 시도하였는데 pneumothorax apparatus Erka를 사용하여 1회당 약 400~500ml씩 10~14일 간격으로 주기적으로 시행하였다. 시행 4개월 후 객담 항산균 도말검사가 음전되고 11개월 후에 결핵균 배양 검사가 음전되었으며, 13개월 후에는 방사선 검사상 공동이 완전히 허탈되었다. 이 시술로 인한 합병증은 관찰되지 않았으며 현재 완치 상태로 추구 관찰 중이다. 인공 기흉법은 과거 화학 요법이 일반화 되기 이전 20세기 초반에 시행되어지던 폐결핵 치료의 고전적인 방법으로 허탈 요법의 일종이다. 이 방법은 효과면에서 화학요법을 능가하지 못하고, 부작용 또한 문제가 되어 이제는 거의 시행되어지지 않게 되었다. 그러나 강력한 화학요법에도 불구하고 개방성 공동이 잔존하는 경우가 있으며, 이럴 때 수술이 여의치 않는 경우 적응증이 된다면 인공 기흉을 화학 요법과 병행하여 치유에 도움을 줄 수 있다고 생각하고 이에 한 예를 보고하는 바이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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