• 제목/요약/키워드: Trypsin inhibitor

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어류 알의 Protease Inhibitor 활성 분포 (Distribution of Protease Inhibitors from Fish Eggs as Seafood Processing Byproducts)

  • 지성준;이지선;신준호;박권현;김진수;김경섭;허민수
    • 한국수산과학회지
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    • 제44권1호
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    • pp.8-17
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    • 2011
  • To identify and examine the distribution of proteolytic inhibitory activity in crude extracts from fish eggs, and to determine the applicability of these protease inhibitors as anti-degradation agents in surimi-based products and fish meat, we compared the inhibitory activities of various extracts from fish eggs to those of commercial proteases, such as trypsin and papain. We used the optimal conditions for the screening of trypsin activity: 30 ug/uL of 0.1% trypsin and 0.6 mM Na-benzoyl-L-arginine-p-nitroanilide (BAPNA) with a pH of 8.0 at $40^{\circ}C$ for 60 min. The activities of papain and four commercial proteases were investigated after mixing with 100 ug/uL enzymes and 0.3% casein with a pH of 8.0 at $40^{\circ}C$ for 60 min. We performed a screening assay to detect the inhibitory activity (%) of crude extracts from eight species of fish eggs against the target proteases trypsin and papain. The assay revealed a wide distribution of trypsin and papain inhibitors in fish eggs. The specific inhibitory activities (11.6.28.6 U/mg) of crude extracts from fish eggs against trypsin and BAPNA substrate were higher than that (0.64 U/mg) of egg whites, used as a commercial inhibitor. The inhibitory activities of crude extracts from fish eggs against trypsin, and of egg whites against casein substrate (1.94.4.51 U/mg), were higher than those of papain (0.24.1.57 U/mg) and commercial protease (0.04.0.32 U/mg). The extracts from fish eggs were rich in protease inhibitors that exhibited strong inhibitory activity against trypsin, a serine protease, and papain, a cysteine protease.

오줌 유래 Trypsin 억제제가 출혈성쇼크에 미치는 영향 (The Effects of Urinary Trypsin Inhibitor on Hemorrhagic Shock)

  • 권오경;김종민;이희천;정언승;양한석;변종환;송동호;조명행
    • Biomolecules & Therapeutics
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    • 제5권3호
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    • pp.223-227
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    • 1997
  • The protective effect of human urinary trypsin inhibitor(UTI) on acute hemorrhagic shock in beagle dog was studied. Hemorrhagic shock was experimentally induced in thoracotomized beagle dogs by removing blood and maintaining low arterial blood pressure for 30 min, and then blood removed was entirely transfused back into the dogs within one hour. When the blood was transfused, UTI was administered together to check the potential protective effect of UTI on hemorrhagic shock. The arterial blood pressure recovery was accelerated slightly by UTI treatment. Blood pH and $P_{a co2}$ returned to normal level in shorter time in the UTI treatment group. These data suggest that UTI may have protective effects on experimentally induced hemorrhagic shock.

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The High Production of Multimeric Angiotensin-converting-enzyme-inhibitor in E. coli

  • Park Je-Hyoen;Kim Sun-Hoi;Ahn Sun-Hee;Lee Jong-Hee;Kim Young-Sook;Lee Sang-Jun;Kong In-Soo
    • Fisheries and Aquatic Sciences
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    • 제4권2호
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    • pp.84-87
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    • 2001
  • Multimeric angiotensin-converting-enzyme-inhibitor (ACE}) containing a trypsin cleavable linker peptide between ACEI was constructed. We made synthetic DNA coding for the ACEI peptide with asymmetric and complementary cohesive ends of linker nucleotides. A tandemly repeated DNA cassette for the expression of concatameric short peptide multimers was constructed by ligating the basic units. The resultant multimeric peptide expressed as soluble and trypsin treated peptide was shown at the same retention time with chemically synthetic ACEI by HPLC. The present results showed that the technique developed for the production of the ACEI multimers with trypsin cleavable linker peptides can be generally applicable to the production of short peptide.

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Inhibition of Various Proteases by MAPI and Inactivation fo MAPI by Trypsin

  • Lee, Hyun-Sook;Kho, Yung-Hee;Lee, Kye-Joon
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제10권2호
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    • pp.181-186
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    • 2000
  • MAPI (microbial alkaline protease inhibitor) was isolated from cultrue broth of Streptomyces chromofuscus SMF28. The Ki values of MAPI for the representative serine proteases such as chymotrypsin and proteinase K were 0.28 and $0.63{\;}\mu\textrm{M}$, respectively, and for the cysteine proteases cathepsin B and papain were 0.66 and $0.28{\;}\mu\textrm{M}$, respectively. These data indicate that MAPI is not a potent selective inhibitor of serine or cysteine proteases. Progress curves for the inhibition of three proteases by MAPI exhibithe characteristic patterns; MAPI exhibited slow-binding inhibition of cathepsin B. It was rapidly associated with chymotrypsin before the addition of substrate and then reactivation of MAPI-inhibited enzyme was investigated in the presence of substrate. On the other hand, MAPI-proteinase K interaction was typical for those classical inhibitors. When MAPI was incubated with trypsin, there was an extensive reduction in the ingibitory activities of MAPI corresponding to 66.5% inactivation of MAPI, indicating that trypsin-like protease may play a role in the decrease of the inhibitory activity during cultivation.

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하눌타리박의 뿌리로부터 분리 정제한 Trypsin Inhibitor들의 특성 (Characterization of Trypsin Inhibitors Purified from Trichosanthes kirilowii Root)

  • 박은주;윤두희;조은정;류병호;김희숙
    • 한국식품과학회지
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    • 제26권1호
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    • pp.81-87
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    • 1994
  • 하늘타리박의 뿌리인 괄루근에서 분리 정제한 trypsin inhibitor는 TRTI-1과 TRTI-2 두 종류였으며 gel-filtration과 SDS-PAGE 전기영동에서 얻은 결과로부터 TRTI-1은 $4,000{\sim}5,000\;Da$의 분자량을 가진 monomer이며 TRTI-2는 $20,000{\sim}24,000\;Da$의 분자량을 가친 homodimer임을 알 수 있었다. 온도의 안정성에 있어서는 TRTI-1은 $100^{\circ}C$에서 2시간 이상 안정하였으며, TRTI-2는 $0{\sim}70^{\circ}C$의 온도에서는 안정하였으나 $80^{\circ}C$에서부터는 안정성이 떨어지면서 $100^{\circ}C$에서는 저해능이 완전히 소실되었다. Trypsin 활성에 대해서 TRTI-1, TRTI-2 및 상품화된 soybean BBI의 농도에 따른 저해능을 보면 TRTI-1, TRTI-2 및 soybean BBI의 각각의 농도가 $0.8{\mu}M,\;6{\mu}M,\;4{\mu}M$일 때 1mg/ml의 trypsin을 50% 저해하였으며, trypsin의 반응속도에 대한 TRTI의 저해 실험에서 TRTI-1와 TRTI-2 모두 trypsin의 가수분해를 경쟁적으로 저해하였으며 $K_{m}$값은 저해제가 없는 경우 $0.37\;{\mu}M$에 대해 각각 0.97, $0.63\;{\mu}M$이었다. 여러 protease에 대한 TRTI-1과 TRTI-2의 저해능 실험 결과 elastase, pepsin, Nagarase, papain, thermolysin, chymotrypsin, thrombin 및 collagenase 등은 저해하지 못하였고 trypsin만을 특이하게 저해하였다.

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복상어와 고등어의 Trypsin에 관한 비교 효소학적 연구 -1. Trypsin의 정제와 반응조건- (Comparative Studies on the Enzymatic Properties of Trypsins from Cat-shark and Mackerel -1. Purifications and Reaction Conditions of the Trypsins-)

  • 변재형;조득문;허민수
    • 한국수산과학회지
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    • 제24권5호
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    • pp.273-288
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    • 1991
  • 연골어류와 경골어류의 진화에 관한 생리생화학적 차이를 특정한 소화효소의 성질과 구조면에서 밝혀 보고자 본 연구를 시도하였다. 양 어종을 대표하는 종류로서 복상어와 고등어를 시료로 선정하고, 소화효소 중 trypsin을 대상으로 하여, 우선 그 정제방법의 확립, 분자량의 측정, 반응 및 안정성에 미치는 pH 및 온도의 영향, 그리고 금속이온과 화학약제가 반응에 미치는 영향 등을 분석 검토하였으며, 그 내용을 요약하면 다음과 같다. 1. 정제방법에 관하여, 민저 복상어 trypsin은 4 염화탄소로서 탈지 추출한 조효소에 대하여 $50-70\%$ 포화 황산암모늄 염석, DEAE-Sephadex A-50칼럼 크로마토그래피, benzamidine-Sepharose 6B, 친화성 크로마토그래피, Sephadex G-75-120 겔 여과법을 거쳐 disc- 전기영동법, SDS-PAG 전기영동법 및 겔 여과법상 균질상태로 얻었다. 또, 고등어의 trypsin은 역시 4염화탄소로서 탈지 추출한 조효소에 대하여 $30-70\%$포화 황산암모늄 염석, benzamidine-Sepharose 6B 친화성 크로마토 그래피, DEAE-Sephadex A-50 크로마토그래피 등의 재크로마토그래피, benzamidine-Sepharose 6B에 의한 재크로마토그래피 등의 정제과정을 거쳐 disc- 전기영동법, SDS-PAG 전기영동법 및 겔 여과법으로 균질의 가칭 trypsin-A와 B를 달리하였다. 2. 이들 유래를 달리하는 각 trypsin의 분자량은 SDS-PAG 전기영동법으로 측정했을 때, 복상어 trypsin 31,700, 고등어 trypsin-A 30,000, 고등어 trypsin-B 29,000, 그리고 겔 여과법으로 측정했을 때, 복상어 21,500, 고등어 trypsin-A 23,700, 고등어 trypsin-B 21,500이었다. 3. 이들 효소들의 알맞은 반응조건은 복상어 trypsin pH 9.0, $45-50^{\circ}C$, 고등어 trypsin-A와 B pH 8.0, $50^{\circ}C$였다. pH와 온도조건에 따른 안정성을 각각 pH와 온도조건별로 30분간 전처리한 후에 그 활성에 미치는 영향으로 비교해 본 결과, pH의 변화에 대하여는 복상어 trypsin은 pH 10.0에서, 그리고 고등어 trypsin-A는 pH 7.0-9.0에서, 고등어 trypsin-B는 pH 8.0에서 안정하였고, 온도조건에 대하여는 복상어 trypsin은 $25^{\circ}C$까지, 그리고 고등어는 trypsin-A가 $10^{\circ}C$까지, 고등어 trypsin-B는 $35^{\circ}C$까지는 안정하였으나, 그 이후부터는 불안정하였다. 4. 이들 효소들은 공통적으로 금속이온 Ag^{2+},\;Cu^{2+}$$Hg^{2+}$에 의하여 저해를 받았으며, 그 저해의 정도는 고등어 trypsin-A와 B가 보다 심하게 받았다. 또 이들 효소들은 antipain, leupeptin, TLCK(to-syllysine chloromethyl ketone) 및 SBTI(soybean trypsin inhibitor)에 의하여 현저한 저해를 받았고, PMSF(phenylmethane sulfonylfluoride), DFP(diisopropyl fluorophosphate) 및 benzamidine에 의하여 어느정도 저해를 보여 모두 serine-계의 trypsin임을 뒷받침하였다

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대두(Glycine max) trypsin 억제제의 불활성화 및 품종별 억제활성 (Inactivation of trypsin inhibitor and inhibitory activity of soybean(Glycine max) cultivars)

  • 류병우;한강완
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제33권2호
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    • pp.109-115
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    • 1990
  • 대두 STI의 열처리에 의한 불활성화에 L-cysteine 및 sodium sulfite의 첨가 효과를 조사하고, 대두 품종별 STI활성을 측정하였으며 활성도와 단백질 및 cysteine함량 그러고 소화율과의 관계를 비교하였다. 열처리에 의한 STI의 불활성화에 L-cysteine과 sodium sulfite의 첨가는 불활성화 효과를 크게 증가시켰으며 대두 품종간 불활성화 정도는 차이를 보이지 않았으며 L-cysteine과 sodium sulfite의 첨가는 불활성화된 STI의 재활생화를 크게 억제하였다. 품종별 STI의 활성도는 대두분말 g당 $64.7{\sim}86.47\;TIU$의 범위에 있었으며, 장백>힐>장엽, 광교>단엽>백운>단경>팔달, 새알, 덕유>황금 이었으며, 단백질 함량과 STI의 활성도와는 상관관계(r=-0.192)가 없는 것으로 나타났다. 품종별 cysteine 함량은 힐, 장백, 단경, 단엽, 황금, 백운, 장엽, 새알, 덕유, 광교, 활달의 순서이었으며, cysteine의 함량은 $73.5{\sim}40.0\;{\mu}mole/g$ 대두분 이었다. 또한 cysteine함량과 STI 활성도 사이에 정의 상관(r=0.6568)을 나타냈다. 품종별 소화율은 광교, 백운, 팔달, 단경, 새알, 힐, 장엽, 덕유, 황금, 장백, 단엽의 순서이었으며 $81.9{\sim}76.7%$ 정도이었다. 또한 소화율과 STI활성도 사이에는 부의 상관(r=-0.7695)을 나타내었다.

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Characterization and Potent Application of Pleurotus floridanus Trypsin Inhibitor (PfTI)

  • Pannippara, Manzur Ali;Kesav, Sapna;Raghavan, Rekha Mol Kollakal Naduvil;Mathew, Abraham;Bhat, Sarita Ganapathy;Kozhiyil, Elyas Kothanan
    • Natural Product Sciences
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    • 제26권3호
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    • pp.207-213
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    • 2020
  • Characterization and in vitro inhibition studies of protease inhibitor from the mushroom Pleurotus floridanus (PfTI) towards the pest Papilio demoleus is studied. The addition of 1 mM Mn2+, Na2+, Ba2+ and Ni 2+ enhanced the PfTI activity. The ICP-atomic emission spectrum showed the presence of Ca2+, Mg2+ and Zn2+ in the PfTI. Surfactants SDS and CTAB at a concentration of 1% reduced the PfTI activity whereas, the nonionic detergents Triton X and Tween 80 increased the activity. The inhibitory activity gradually decreased with increase in concentration of DMSO and H2O2. The activity was increased by dithiothreitol up to a concentration of 80 μM and inactivated at 140 μM. The activity of PMSF modified PfTI was drastically reduced to 0.234 U/mL at 4 mM concentration and similar results were obtained for modification of cysteine by N-Ethylmaleimide at slightly higher concentrations. The complex of trypsin and PfTI showed complete loss in fluorescence intensity at 343 nm compared with control. In vitro inhibition studies of PfTI with midgut proteases isolated from citrus pest P. demoleus with protease activity of 1.236 U was decreased to 0.613 U by 50 μL (0.1 mg/mL) of the inhibitor. Inhibitor was stable up to 0.04 M concentration of HCl.

수종해조의 단백계수와 in vitro Digestibility (Nitrogen Conversion Factors and in vitro Protein Digestibility of some Seaweeds)

  • 류홍수;;이강호
    • 한국수산과학회지
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    • 제15권4호
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    • pp.263-270
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    • 1982
  • 해중의 영양학적인 기초자료를 얻기 위하여 multi-enzyme system을 이용한 체외소화율과 아미노산분석을 기초로 한 단백질수를 측정하였다. 김 (P. tenera)의 체외소화율은 $78.5\sim82.2$로서 산지와 건조조건에 따라 약간의 차이를 보였으며, 잎파래(E. linza)나 다른 갈조류 (미역 U. pinnatifida, 톳 H. fusiforme, 모자반 S. fuuellum)에 비하여 높았고 효소활성 저해물질 (trypsin inhibitor)의 함량은 갈조류에서 높았다. 잎과래는 채외소화율이 김보다 낮음에도 불구하고 효소활성저해물질이 가장 낮은 특이한 결과론 보였다. 전체적으로 해조류의 체의소화을이 다른 연구자들의 생체실험에 의한 소화율 (in vivo digestility)보다 높은 결과를 보인 것은multi-enzyme system을 이용한 체외소화율 측정 방법을 해조류의 정확한 소화율 측정에 적용하기에는 문제성이 있는 것으로 밝혀졌다. 일륜 김에 대한 microwave cooking의 영향은 가열시간이 15분 경과하여도 현저한 소화율 증가는 볼 수 없었으며, 효소활성 저해물질함량은 서서히 감소하는 경향을 보였다. 또한 한국식으로 구운김의 체외소화율은 microwave로 15분 가열한 시료와 비슷하였다. 아미노산 분석 결과를 이용한 단백계수(Factor method)는 김의 경우 6.52로 계산되었고, 잎파래는 6.00, 미역 6.11, 모자반 5.85, 톳은 5.83이었으며, Kjeldahl전소분석결과를 이용한 단백계수(Kjeldahl Method)는 김 6.29, 잎파래 5.83, 미역 5.40, 모자반 5.45, 톳 5.49로 나타나, 종래의 조단백계수(6.25)보다 낮은 결과를 보였다. 해조추의 비단백태질소의 정확한 규명이 없는 상태에서, 해조의 단백질함량 측정에는 아미노산 분석결과를 이용한 새로운 단백계수(Factor Method)를 사용함이 바람직한 것으로 생각되었다.

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국내산 감자 주요 품종의 아미노산 및 단백질 조성 (Protein and Amino Acid Composition of Domestic Potato Cultivars)

  • 권오윤;김미연;손찬욱;류희문;김형진;윤원기;김환묵;김미리
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제37권1호
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    • pp.117-123
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    • 2008
  • 국내에서 생산된 감자 중 세풍, 남서, 수미, 조풍 및 대서의 5가지 품종에 대하여 단백질 profile 및 아미노산 조성을 분석하였다. 총 질소함량은 $1.27{\sim}1.64%$이었으며, 남서가 높았고 수미가 낮게 나타났다. 아미노산 조성은 품종 간에 유의적인 차이가 있었다. 한편, 주요 감자 단백질은 papatin(40 kDa), trypsin inhibitor(20 kDa) 및 protease inhibitor(15 kDa)이었으며, 이들의 함량은 각각 $22.16{\sim}25.81%$, $25.22{\sim}20.91%$$14.12{\sim}25.23%$이었다. Papatin 함량은 조풍, 세풍, 수미감자가 높은 함량을 보인 반면, trypsin inhibitor는 조풍감자가 5.22%로 가장 낮은 함량을 보였다. Protease inhibitors인 20 kDa와 15 kDa를 합한 값은 $24.7{\sim}35.0%$이었으며, 세풍이 가장 적었고 조풍에 가장 많이 함유되어 있었다.