This study was conducted to investigate physiological characteristics of Trichoderma spp. isolated from Pleurotus spp. Damage tests of Pleurotus spp. and mycotoxins tests of Trichoderma spp. were also done. The optimal growth temperature of Trichoderma spp. was $27{\sim}30^{\circ}C$. Although, T. longibrachiatum was able to grow at $37^{\circ}C$ and grew $30{\sim}40$ times faster than Pleurotus. The colony colour on PDA medium of T. cf. virens was yellowish green, T. longibrachiatum was yellow, and T. harzianum was turning to bright green. In damage tests of Pleurotus by Trichoderma, T. cf. virens caused the most severe damage to Pleurotus. T. longibrachiatum and T. harzianum caused less damage on Pleurotus but were able to cause greater damage to P. eryngii. One of the mushroom cultivars, P. ostreatus 8 was the most resistant to all Trichoderma spp.. Chitinolytic mycotoxin released by Trichoderma spp. caused 52.7% damage to Pleurotus. Mycotoxins released by T. longibrachiatum caused the greatest damaged(78.6%) on P. eryngii.
Seasonal and spatial variations in propagule numbers of Trichoderma species were investigated every other month for one year in deciduous and coniferous forest soils and evaluated the relationships of Trichoderma spp. populations to soil environmental factors. The total population of Trichoderma spp. increased until summer and then declined until winter. The yearly mean frequency of Trichoderma spp. exceeded 1.4% of total fungal propagules in two sites. Decreases of absolute an relative propagule numbers of Trichoderma spp. with increasing soil depth were found and variation in Trichoderma spp. propagules caused by differences in soil depth ($0{\sim}50cm$) was greater than that caused by differences in sampling time. The most common species occurring in two sites was T. viride, followed by T. polysporum, T. koningii, and T. hamatum. Individual species of Trichoderma showed diferent abundance trend in accordance with sampling time. T. viride was dorminant from spring to autumn, while T. polysporum dominated over the other speicies in winter. Variations in propagule number of Trichoderma sppp. were principally mediated by the actions of biotic environmental factors rather than by the direct effects of abiotic factors. In multiple-regression analyses, 48% of the total vaiation in Trichoderma spp. propagules in deciduous site could be accounted for by total fungal propagules and soil CMCase actvity. In coniferous site, 65% of total variation could be accounted for by total fungal and bacterial propagules, moisture content and organic carbon content.
Field studies were conducted over two seasons during the summers of 1997 and 1998 to investigate the effects of different spatial arrangements(random or highly aggregated) of sclerotia of Sclerotinia sclerotiorum and alginate pellet types(bran or polyethylene glycol) on colonization of sclerotia by Trichoderma spp. Treatment with alginate pellets increased the mean percentages of sclerotia colonized by Trichoderma spp. in both years. Distribution patterns of sclerotia affected the mean percentage of sclerotia colonized by Trichoderma spp. in both years, indicating that a highly aggregated distribution of sclerotia was more favorable to colonization by Trichoderma spp. The effects of the different pellet types(bran or PEG) were not siginificant in both years(P>0.05). The application of higher densities(200 pellets per 1 $m^2$) of alginate pellets resulted in higher mean percentages of sclerotia colonized by Trichoderma spp. in 1998(P<0.05), but did not in 1997.
Isolates of Trichoderma spp. collected from Pleurotus ostreatus and P. eryngii beds, which included loosened substrate compactness and development of green colour, were grouped into three species. The occurrence of different species of Trichoderma was as T. cf. virens(70.8%), T. longibrachiatum(16.7%) and T. harzianum(12.5%). The conidia of Trichoderma spp. were ellipsoidal, obovoid and phialides were bowling pins, lageniform and the length of phialides was $3.5{\sim}10.0{\times}1.3{\sim}3.3{\mu}m$. Phialides of T. cf. virens and T. harzianum were tending clustered, but it was solitary disposition in T. longibrachiatum. T. cf. virens was characterized by predominantly effuse conidiation, sparingly branched, and fertile to the apex and it was penicillate type. RAPD analysis could detect variability amongst three different species of Trichoderma using two newly designed URP-primers. However, intra-specific variation could not be detected in all the isolates except for rDNA sequence data classified Trichoderma isolates into three distinct groups representing three species. The profiles of rDNA sequences of isolates representing a species showed high similarity in T. cf. virens and T. harzianum. However, there was a variation in rDNA sequences of isolates representing T. longibrachiatum. The results of present study reveals that molecular techniques of RAPD and rDNA sequencing can greatly aid in classification based on morphology and precise identification of fast evolving species of Trichoderma.
Lee, Song Hee;Jung, Hwa Jin;Hong, Seung-Beom;Choi, Jong In;Ryu, Jae-San
Mycobiology
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제48권4호
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pp.313-320
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2020
In Pleurotus sp., green mold, which is considered a major epidemic, is caused by several Trichoderma species. To develop a rapid molecular marker specific for Trichoderma spp. that potentially cause green mold, eleven Trichoderma species were collected from mushroom farms and the Korean Agricultural Culture Collection (KACC). A dominant fungal isolate from a green mold-infected substrate was identified as Trichoderma pleuroticola based on the sequences of its internal transcribed spacer (ITS) and translation elongation factor 1-α (tef1) genes. In artificial inoculation tests, all Trichoderma spp., including T. atroviride, T. cf. virens, T. citrinoviride, T. harzianum, T. koningii, T. longibrachiatum, T. pleurotum, and T. pleuroticola, showed pathogenicity to some extent, and the observed symptoms were soaked mycelia with a red-brown pigment and retarded mycelium regeneration. A molecular marker was developed for the rapid detection of wide range of Trichoderma spp. based on the DNA sequence alignment of the ITS1 and ITS2 regions of Trichoderma spp. The developed primer set detected only Trichoderma spp., and no cross reactivity with edible mushrooms was observed. The detection limits for the PCR assay of T. harzianum (KACC40558), T. pleurotum (KACC44537), and T. pleuroticola (CAF-TP3) were found to be 500, 50, and 5 fg, respectively, and the detection limit for the pathogen-to-host ratio was approximately 1:10,000 (wt/wt).
식물 병원성 진균인 Rhizoctonia solani에 대한 길항능이 있는 Trichoderma 계열의 미생물 균주를 선별하였다. R. solani의 성장을 저해하는 능력이 우수한 균주를 선별하기 위하여 일차적으로 PDA 평판에서 inhibition zone을 측정하였고, 병원성 진균의 세포벽을 용해시킬 수 있는 세포외 효소인 glucanase 및 chitinase 활성을 분석하였다. 4∼5 mm 이상의 inhibition zone을 보여주었고, glucanase 및 chitinase 활성이 우수한 Trichoderma sp. UK-3와 T. viride 균주들을 선별할 수 있었다.
길항균 Trichoderma spp.가 입고병 및 식물토양병 방제에 효과적이었으므로 T. hamatum strain Tr-5와 Rhizoctonia solani 사이의 토양근권내의 상호작용을 구명하고, 생물학적 방제로서의 활용성을 알고저 기초적인 실험을 하였다. 길항성이 우수한 Trichoderma spp.의 토양내 분포비를 구명하고저 채집한 토양시료에서 길항균과 토양 미생물의 분포를 조사하였다. 전세균, 전진균, 방선균 및 Trichodema spp.의 분포비는 65%, 8.8%, 25.9% 및 0.28%로 세균이 많고 Trichoderma spp.의 분리비는 가장 적었다. Trichoderma spp.를 분리하여 동정한 결과 T. koninggii, T. pseudokoninggii, T. aureoviride, T. hamatum 및 T. viride의 5종이 동정되었고, 이중 균주 Tr-5인 T. hamatum을 공시하여 균기생성여부를 관찰한 결과 R. solani에 대한 기생성을 관찰하였으며 효소적으로 균사가 용균되어 파괴됨을 관찰하였다. Trichoderma spp.의 토양내 발아력을 조사한 결과 자연토양에서 Trichoderma spp. 모든 종은 $1.7{\sim}7.3$ 이내의 발아력을 나타내었고, 살균토양에서는 90% 이상의 포자발아력을 나타내어 자연토양에서 Trichoderma 정균현상이 관찰되었다. 길항력이 있는 T. koninggii, T. pseudokoninggii, T. hamatum 및 T. viride 등 4균주의 토양근권내 완두뿌리 근권점유율실험에서 4종 균주 모두는 토양깊이 1cm 범위까지는 점유율이 크게 나타났으나 $2{\sim}3\;cm$에 서는 분포수가 감소하였고 4 cm 이하에서는 뿌리 점유분포수가 크게 감소하였다. 인삼근을 심은 폿트실험에서 Fusarium solani, Cylindrocarpon destructans, Rhizoctonia solani균의 단독처리구에 비해 길항력이 있는 T. hamatum Tr-5 처리구에서는 근부현상이 감소하였다.
표고버섯은 Trichoderma spp.의 침입을 받으면 두 균이 접하는 부위에 다량의 laccase을 분비하여 갈색 대치선을 형성하는 것으로 알려져 있다. 하지만, 어떤 경우에는 이러한 갈변현상이 전혀 혹은 거의 나타나지 않거나 상대적으로 늦게 발현되기도 한다. 또한, 현장에서는 Trichoderma spp.의 종류에 의해 오염이 된 톱밥배지에서 갈색 대치선이 형성되지 않은 채 표고버섯에 따라 그리고 두 길항균이 처한 사항에 따라 표고버섯의 laccase 유도정도 및 갈변현상의 형성 및 변화 정도가 다른 것으로 나타났다. 본 연구는 표고버섯과 Trichoderma spp.의 균사가 서로 접한 부위에서 발생하는 두 균의 상호작용에 대해 다양하게 조사하였다. 1. YME 배지에서 표고버섯의 laccase 활성은 주로 10일 이후에 증가되기 시작하였고 20일을 기점으로 급격히 증가하였으며 30일을 전후하여 다시 감소하기 시작했다. 또한, laccase 활성도는 균체량 상관이 있었다. 2. 본 연구에 사용된 모든 Trichoderma spp.는 표고버섯의 laccase 활성을 촉진시켰으며 균주별로 약간의 차이가 있었다. 3. YMEA 배지에서 대치배양된 표고버섯은 모든 Trichoderma spp.의 침투에 대해 brown-line을 형성함으로써 길항작용을 보이면서 두 길항균은 서로의 균사생장을 억제하였으며 표고버섯의 균사생장이 더 억제되는 것으로 나타났다. 하지만, T12균주의 경우 6일 이하로 배양된 표고버섯의 영양균사의 갈색 대치선의 형성을 유도하지 못했다. 4. Brown-line 형성 이후 Trichoderma spp.의 영양균사는 표고버섯의 영양균사 위로 계속해서 생장을 하였으며 이때, 갈색 대치선은 Trichoderma spp. 영양균사의 정단부위 직전에 형성되면서 이동하였다. 하지만, T4와 표고버섯의 영양균사가 서로 근접했을 경우 뚜렷한 갈색 대치선이 먼저 형성되고 그 이후 서로의 영역을 침범(over-growing)하지 못했으며 갈색 대치선은 이동하지 않고 안정적이었다. 5. 두 길항균이 서로 대치한 지역의 laccase 활성율을 부위별로 조사한 결과 laccase 활성율은 Trichoderma류의 종류에 상관없이 모든 처리구에서 B, C, A의 순으로 나타났다. 6. 두 길항균이 서로 대치한 지역의 pH를 조사한 결과 표고버섯의 균사 분포지역의 pH는 4.3~4.4, T12, T13의 경우 pH 4.5~5.0, T1, T2, T5의 경우 pH 5.5~6.7의 범위였으며 두 길항균의 길항작용 지역의 경우 두 균이 갖는 pH 범위의 중간정도의 값을 나타냈다. 이러한 결과는, T12, T13의 경우 표고버섯의 갈변 현상 유도가 느리거나 거의 유도하지 않는 점을 고려한다면, 갈변 현상 형성에 있어서 길항균의 pH 범위가 중요한 역할을 하는 것을 추정할 수 있었다. 7. 미강이 첨가된 톱밥배지 상에 3, 6, 9cm 기배양된 표고버섯에 접종된 Trichoderma spp.는 모든 처리구에서 갈색 대치선을 형성하였다. 하지만, 한천배지에서와는 상반되게 대치 후 2~3일이 지나면 표고버섯의 영양균사는 Trichoderma spp.의 균사 위로 생장을 하였다. 또한, 이때 배지의 pH는 표고버섯의 점유지역의 경우 pH 4.0~4.5, Trichoderma spp.의 경우 pH 5.0~6.0, 그리고 갈색 대치선을 형성지역의 경우 pH 4.5~5.5의 범위였으나 표고버섯이 Trichoderma spp. 위로 생장한 지역의 pH는 4.3~4.8의 범위를 나타냈다.
Trichoderma spp. cause large crop losses of the cultivated shiitake mushroom, Lentinula edodes. We bred several shiitake strains that are resistant to Trichoderma spp. using di-mon mating to establish a useful method for controlling the greenmold disease. We examined the competitive ability of L. edodes against Trichoderma spp. using a dual culture system to select resistant strains. By screening Trichoderma-resistant strains, we found that among 11 parental strains, 4 strains, including KFRI 36, were confirmed resistant strains. They showed especially strong resistance to T. harzianum, which formed deadlock after mycelial contact and then invaded into the territory of T. harzianum. KFRI 171 also showed resistance to T. atroviride strains. Among 13 strains, which were made by hybridization of shiitake strains, 5 were confirmed to be resistant to Trichoderma, including KFRI 58-1. Their resistance was not correlated to the resistant activity of their parents’ strains. Two strains lose resistance and two strains acquire resistance compared to their parents’ strains. In SEM observation, the mycelium of L. edodes at the interaction zone of Lentinula-Trichoderma was rugged and swollen by T. harzianum.
L-asparaginase (ASNase) is a therapeutic enzyme used to treat acute lymphoblastic leukemia. Currently, the most widely used ASNases are originated from bacteria. However, owing to the adverse effects of bacterial ASNases, new resources for ASNase production should be explored. Fungal enzymes are considered efficient and compatible resources of natural products for diverse applications. In particular, fungal species belonging to the genus Trichoderma are well-known producers of several commercial enzymes including cellulase, chitinase, and xylanase. However, enzyme production by marine-derived Trichoderma spp. remains to be elucidated. While screening for extracellular ASNase-producing fungi from marine environments, we found four strains showing extracellular ASNase activity. Based on the morphological and phylogenetic analyses using sequences of translation elongation factor 1-alpha (tef1α), the Trichoderma isolates were identified as T. afroharzianum, T. asperellem, T. citrinoviride, and Trichoderma sp. 1. All four strains showed different ASNase activities depending on the carbon sources. T. asperellem MABIK FU00000795 showed the highest ASNase value with lactose as a carbon source. Based on our findings, we propose that marine-derived Trichoderma spp. are potential candidates for novel ASNase production.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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