Trehalose-tethered monomeric and dimeric berberines were synthesized in 50% and 30% from the reaction of berberrubine with 6-tosyl-${\alpha}$,${\alpha}^{\prime}$-trehalose and 6,6'-ditosyl-${\alpha}$,${\alpha}^{\prime}$-trehalose, respectively, and fully characterized by MS (HR and ESI) and NMR ($^1H$, $^{13}C$, COSY and HSQC). Spectrophotometric and spectrofluorimetric titrations indicated that compared with berberine, trehalose-tethered monomeric berberine had comparable DNA-binding affinity toward calf-thymus DNA, whereas trehalose-spaced dimeric berberine exhibited higher DNA-binding affinity. The potential application of these conjugates is also briefly discussed.
Kim, Chang-Hoon;Nam, Uk-Ho;Synn, Dong-Su;Park, Jae-Sung
한국생물공학회:학술대회논문집
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한국생물공학회 2003년도 생물공학의 동향(XIII)
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pp.730-735
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2003
본 실험에서는 분리된 곤충병원성 선충 6종의 온도에 따른 trehalose의 농도와 병원성의 상관관계를 조사하였으며 온도 적응, oil, glycerol을 이용하여 trehaolse 생성량 조절에 대하여 조사하였다. 저온에서는 S. longicaudum G1 종이 $81.92{\mu}g/mg$로 가장 높게 나타났으며, 고온에서는 S. glaseri Agr B3 $71.22{\mu}g/mg$로 가장 높게 나타났다. 또한 S. longicaudum G1을 저온에서 적응 시켰을 경우 병원성과 trehaolserk 향상되었으며 S. glaseri Agr B3 종일 경우 고온에 적응 시켰을 경우 역시 향상되었다. glycerol 20%과 oil 전 농도에서 처리하였을 경우 도 종 모두 다소 향상되는 것으로 나타났다.
동결건조로 레트로바이러스를 저장 시 활성유지에 가장 좋은 첨가물로 trehalose , trehalose&PVP 를 첨가해 주었고 DSC 를 통해 열적분석을 하여 온도에 따른 레트로바이러스의 열적변화를 살펴 본 결과 첨가물을 넣어 준 경우 더욱 높은 온도에서 열적 변화가 있었다. 이것을 바탕으로 저장 온도에 따른 레트로바이러스의 활성유지를 조사하기 위해 다양한 온도에서 장기간 보관 한 결과 trehalose 를 첨가한 경우 $4^{\circ}C$ 의 온도 까지 애서도 8 주동안 60% 이상의 높은 활성을 유지하였고 trehalose&PVP 의 경우에도 비슷한 활성을 보였으나 첨가물을 넣지 않은 경우에는 모든 온도에서 40%미만의 낮은 활성도를 보였다.
본 연구에서는 백설기의 품질변화를 최소화할 수 있는 방안으로 효소제(BS-300 0.3%)와 트레할로스(trehalose 3%, 6%)를 첨가한 6가지의 백설기를 제조하여 품질변화를 관찰하였다. 쌀가루의 RVA호화특성을 조사한 결과, 효소제와 트레할로스를 첨가한 쌀가루는 가공의 안정도가 높아지고, 노화도가 감소되는 것으로 나타났다. DSC를 이용하여 백설기의 노화정도를 비교한 결과, 효소제와 트레할로스를 첨가한 시료에서 노화억제 효과가 나타났고 효소제와 트레할로스 6%를 함께 첨가한 시료에서 가장 큰 효과가 나타났다. 제조한 백설기의 저장기간에 따른 품질변화는 효소제와 트레할로스의 병행처리가 보수성을 향상시키며 색도 및 경도 변화를 억제하는 것으로 나타났다. 따라서 백설기의 품질개선에 가장 효과적인 배합비는 효소제 0.3%와 트레할로스 6%가 함께 첨가된 백설기로 나타났다.
Trehalose is a non-reducing disaccharide in increasing demand for applications in food, nutraceutical, and pharmaceutical industries. Single-step trehalose production by trehalose synthase (TreS) using maltose as a starting material is a promising alternative process for industrial application due to its simplicity and cost advantage. Pseudomonas monteilii TBRC 1196 was identified using the developed screening method as a potent strain for TreS production. The TreS gene from P. monteilii TBRC 1196 was first cloned and expressed in Escherichia coli. Purified recombinant trehalose synthase (PmTreS) had a molecular weight of 76 kDa and showed optimal pH and temperature at 9.0 and 40℃, respectively. The enzyme exhibited >90% residual activity under mesophilic condition under a broad pH range of 7-10 for 6 h. Maximum trehalose yield by PmTreS was 68.1% with low yield of glucose (4%) as a byproduct under optimal conditions, equivalent to productivity of 4.5 g/l/h using enzyme loading of 2 mg/g substrate and high concentration maltose solution (100 g/l) in a lab-scale bioreactor. The enzyme represents a potent biocatalyst for energy-saving trehalose production with potential for inhibiting microbial contamination by alkaline condition.
The purpose of this study was to determine toxic effect of sucrose and trehalose prior to cryopreservation on nuclear maturation and embryonic development in immature bovine oocytes. All cryoprotectant was prepared in tissue culture medium 199-HEPES (TCM 199-HEPES) with 10% fetal bovine serum (FBS). Immature oocytes were exposed to 1.2M ethylene glycol (EG) and 0.1M sucrose or 1.2M EG and 0.1M trehalose for 3 min and then were exposed to 3.2 M EG and 0.25 M sucrose or 3.2 M EG and 0.25 M trehalose for 1 min. Oocytes treated with cryoprotectants were exposed to 0.25 M sucrose or 0.25 M trehalose for 5 min and then 0.1 M sucrose or 0.1 M trehalose for 5 min. Depending on type of sugar added to cryopreservation solution, oocytes were allocated to sucrose group and trehalose group, respectively. Oocytes exposed to TCM 199-HEPES with 10% FBS were considered as control. Oocytes were cultured in TCM 199 supplemented with 10% FBS, 5 ng/ml epidermal growth factor, 0.01 IU/ml luteinizing hormone, and $1\;{\mu}g/ml$ estradiol for 24 h in $39^{\circ}C$, 5% $CO_2$. Nuclear maturation was assessed by staining oocytes with 1% aceto-orcein. Oocytes were fertilized in vitro and were cultured in TCM 199 supplemented with 10% FBS, 5 mM sodium pyruvate, and antibiotics in $39^{\circ}C$, 5% $CO_2$. The rates of cleavage and blastocyst, and cell number in blastocyst were assessed. Metaphase II rates were not different among experimental groups regardless of type of sugar. The cleavage rate of trehalose group (73.3%) was significantly higher (p<0.05) than those of sucrose group (62.8%) and control group (60.8%). The blastocyst rate was significantly higher in trehalose group (p<0.05). Mean cell number in blastocyst were not different among experimental groups, although cell number of blastocyst in trehalose group was significantly higher on day 7 (p<0.05). In conclusion, sucrose and trehalose were not toxic to immature bovine oocytes prior to cryopreservation. In particular, trehalose was more effective on embryonic development.
유용한 기능을 갖는 미생물을 농업현장에 쉽게 이용할 수 있게 하기 위하여 일반적으로 이들 균을 담체와 함께 건조시켜 입단화나 분말화 시킨다. 생체균을 건조하는 과정에서 미생물은 수분손실로 인해 삼투현상에 직면하며 거의 대부분이 사멸하고 만다. 본 연구에서는 높은 염농도나 건조에 의해 야기되는 균의 사멸을 감소시키기 위해 삼투보호제로 알려진 trigonelline이나 trehalose가 균의 생존에 미치는 영향을 조사하였다. 형광성 Pseudomonas, SSL3 균주의 염내성 농도는 5%가 한계농도이며, 7% 이상에서는 생장이 불가능하였다. 염농도가 높은 액체 배지에 trigonelline을 첨가하여 균의 생육을 조사한 결과 trigonelline은 배지의 종류나 염농도와 상관없이 균의 생장을 억제하는 효과가 있었다. 한편 trehalose를 액체배지에 첨가하면 10mM 농도이하에서는 4% NaCl을 포함한 LB 액체배지에서도 균의 생장이 증진되었으며 150mM이상의 농도에서는 균의 생장이 억제되었다. 균을 건조분말화시킬 때 trehalose를 첨가하여 토양중에서 균의 생존율을 조사한 결과 건조토양에서도 액체배지에서와 마찬가지로 trehalose를 첨가하면 첨가하지 않은 대조구에 비하여 균의 생존율이 증진되었다. Trehalose를 첨가한 제재화 균은 수분이 충분한 토양이나 건조한 토양 어느쪽에서든지 대조구에 비하여 균의 생존이 증진되었으며 특히 미생물 제제를 $-20^{\circ}C$나 $-70^{\circ}C$에 보관한 토양의 경우에 trehalose가 첨가된 제제의 생존율이 월등히 뛰어났다. FTIR의 분석결과 trehalose를 첨가한 4% 염농도에서 생장한 균에서는 대조구에 비하여 2차 amide기의 변화가 경감되었다. 이 결과에서 보듯이 trehalose는 염농도나 한발조건에 의해서 야기되는 균의 수분 스트레스로부터 균의 외막을 보호하여, 단백질구조의 급격한 변화를 감소시키므로 균의 생존율이 증진되는 것으로 사료된다.
배추는 재배 온도에 따라 수확량과 품질에 많은 영향을 받을 수 있다. 고온 스트레스 저항성 배추품종 육성을 위해 본 연구는 스트레스 저항성에 관련이 있다고 알려진 trehalose 유전자 관련 다형성 마커를 개발하였다. 아라비돕시스 trehalose 합성 유전자와 유사한 총 28개의 배추 EST를 NCBI database에서 찾고 고온에 상대적으로 약한 지부품종과 고온에 잘 견디는 품종인 권심을 대상으로 다형성을 조사하였다. 이 중 10개의 EST에서 insertion/deletion 또는 single nucleotide polymorphism을 발견하여 이를 바탕으로 쉽게 이용이 가능한 10개의 다형성 PCR 마커를 개발하였다. 본 연구에서 개발된 trehalose 분자마커는 앞으로 배추 작물에서 환경 스트레스 저항성과 유전적 연관성을 확인하는데 이용될 수 있고 MAS를 이용한 품종육성에 이용될 수 있다고 기대된다.
Pseudomonas sp. BCNU 106 accumulated approximately 4.12 mM trehalose after cultivation of 12 hr probably by the arising action of trehalose-6-phosphate synthase/phosphatase. The cDNA clones of trehalose-6-phosphate synthase/ phosphatase were isolated from Pseudomonas sp. BCNU 106, and named as PsTPS and PsTPP(Pseudomonas sp. BCNU 106 trehalose-6-phosphate synthase/phosphatase). The two mRNA levels of trehalose-6-phosphate synthase/ phosphatase peaked at 12 hr after exposure to toluene, and thereafter were declined slightly These results support an important role of trehalose accumulation by expressions of PsTPS and PsTPP in toluene-tolerance of Pseudomonas sp. BCNU 106.
In many organisms, trehalose has been Down as an energy source and a protectant against various environmental stresses such as desiccation, freezing, heat and osmotic pressure. Previously, we have isolated and characterized the genes encoding trehalose-6-phosphate synthase (ZrTPS1) and trehalose-6-phosphate phosphatase (ZrTPS2) from one of the most osmotolerant yeasts, Zygosaccharomyces rouxii. We have also generated transgenic plants by co-introduction of ZrTPS2 and ZrTPS2 into potato plant (ZrTPS2-2A-ZrTPS1 plant) in an attempt to metabolically engineer trehalose in the transgenic plant using the foot-and-mouth disease virus(FMDV) 2A system and to generate drought resistant crop plants. In this research, we assayed previously generated the ZrTPS2-2A-ZrTPS1 plant biofunctionally by drought treatment, and measured the amount of trehalose in the ZrTPS2-2A-ZrTPS1 transgenic plants. The ZrTPS2-2A-ZrTPS1 transgenic plant showed strong drought resistance in spite of little or no accumulation of transgenic in he transgenic plant compared with control plant.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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