A Tomato spotted wilt virus (TSWV-KP) was isolated from Paprika (Capsicum annuum var. grossum) showing necrosis spot on the leaves and malformation of the fruit in Yesan, Korea. The virus infected Chenopodium amaranticolor, C. quinoa, Petunia hybrida, Nicotiana glutunosa, Gomphrena globosa, and Physalis floridana. Ten plants including tomato were observed to have systemic TWSV-KP infection. The virus produced necrosis or necrotic ring spots on the inoculated leaves and mosaic, vein necrosis or death on the upper leaves of Datura stramonium, N. clevarandii, N. rustica, and N.tabacum cvs. Thin sections of the infected leaf tissue contained spherical to oval particles, a characteristic of a Tospovirus. The virion contained three molecules of genomic RNAs, which were approximately 9.0, 4.9 and 3.0 kb. The nucleocapsid (N) protein of the purified virion migrated as a single band with molecular weight of about 29 kDa in SDS-PAGE. The N gene of TSWV-KP showed 96.5-97.2% and 97.7-98.5% identities to the three different TSWV isolates of Genbank Database at the nucleotide and amino acid, respectively.
Tomato spotted wilt virus (TSWV) was identified from seven plants at two areas, Anyang and Dangjin, in Korea. The isolates of TSWV were seven as TSWV-KATm from tomato, TSWV-KAPo from potato, TSWV-KABal from balsam, TSWV-KACTm from cherry tomato and TSWV-KAIxe from Ixeris dentata at Anyang area, and TSWV-KDSe from sesame and TSWV-KDRP from red pepper at Dangjin area. Pathogenicity of seven TSWV isolates was various on the assay plants, and could not be grouped definitely. Three isolates of TSWV-KAIxe, TSWV-KACTm and TSWV-KABal had relatively narrower host ranges among the seven isolates. Percentage of nucleotide substitution in nucleotide sequences encoding nucleocapsid protein (NCP) was 1.2-1.7% among seven TSWV isolates and TSWV-KP. Korean TSWV isolates were divided into three groups by nucleotide homology or amino acid compositions. From the analysis of nucleotide sequences of Korean TSWV isolates compared with those of TSWV reported from other 5 countries including Japan, the Korean seven isolates of TSWV was grouped with German TSWV (D13926). No Korean TSWV isolates were grouped with those from The Netherlands, Brazil and USA.
토마토반점위조바이러스(TSWV)는 토마토 식물체에 가장 심한 피해를 주는 바이러스들 중의 한 종이다. 2015년에 선단 부위가 고사되는 토마토 식물체의 잎에서 분리한 TSWV-GT를 토마토 품종들에 대한 내병성 검정에 활용하였다. 우리나라에서 시판되고 있는 토마토 51품종 중 'TY 스마트사마'와 '마놀리아'는 내병성, '티티찰', 'TY 센스큐' 및 '베네키아'는 중간내병성이었다.
Tomato spotted wilt virus (TSWV) is one of the plant viruses transmitted by thrips and causes severe economic damage to various crops. From 2008 to 2011, to identify natural host species of TSWV in South Korea, weeds and crops were collected from 5 regions (Seosan, Yesan, Yeonggwang, Naju, and Suncheon) where TSWV occurred and were identified as 1,104 samples that belong to 144 species from 40 families. According to reverse transcription-polymerase chain reaction, TSWV was detected from 73 samples from 23 crop species, 5 of which belonged to family Solanaceae. Additionally, 42 weed species were confirmed as natural hosts of TSWV with three different life cycles, indicating that these weed species could play an important role as virus reservoirs during no cultivation periods of crops. This study provides up-to-date comprehensive information for TSWV natural hosts in South Korea.
Cloning of the 5'untranslated region (5' UTR) and Nterminus of the glycoprotein precursor (G2G1) open reading frame of tomato spotted wilt virus has been problematic, possibly because of the toxicity of a signal peptide at the beginning of th G2G1 protein precursor. The toxicity of the signal peptide to bacterial growth and the reason for the expression of the peptide gene in Escherichia coli were investigated by cloning the 5' UTR and the signal peptide sequence separately. Cells transformed with the plasmid containing both the first 30 amino acids of the glycoprotein and the 5' UTR showed a severe growth inhibition whereas transformants harboring either the plasmid with the signal sequence or the 5'UTR alone did not show any ingibition. An E. coli promoter-like sequence was found in the 5'UTR and tis promoter acivity was confirmed with a promoter-less GUS gene cloned downstream of the 5'UTR. In the cloning of the Tomato spotted wilt virus (TSWV) glycoprotein G2G1 open reading frame all the recovered plasmids contained stop codons in the signal sequence region. However, clones containing no stop codon were recovered when the signal sequence and the 5'UTR were cloned separately.
Park, Chung Youl;Min, Hyun-Geun;Lee, Hong-Kyu;Maharjan, Rameswor;Yoon, Youngnam;Lee, Su-Heon
식물병연구
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제24권4호
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pp.348-352
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2018
A multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction (mRT-PCR) assay was developed for the detection of Clover yellow vein virus (ClYVV), Peanut mottle virus (PeMoV), and Tomato spotted wilt virus (TSWV), which were recently reported to infect soybean and azuki bean in Korea. Species-specific primer sets were designed for the detection of each virus, and their specificity and sensitivity were tested using mixed primer sets. From among the designed primer sets, two combinations were selected and further evaluated to estimate the detection limits of uniplex, duplex, and multiplex RT-PCR. The multiplex RT-PCR assay could be a useful tool for the field survey of plant viruses and the rapid detection of ClYVV, PeMoV, and TSWV in leguminous plants.
식물 바이러스는 작물 수확량에 상당한 손실을 일으키고 작물 생산을 지속적으로 위협하여 세계 식량 안보에 심각한 위협이 된다. 그 중 tomato spotted wilt virus (TSWV)는 주로 원예작물을 감염시키는 가장 위협적인 식물 바이러스로 넓은 기주 범위를 가진다. Reverse-transcription quantitative real-time PCR (RT-qPCR)은 TSWV의 민감한 검출을 위해 널리 사용되고 있지만 표준화의 어려움으로 인해 유용성이 감소한다. 따라서 본 연구에서는 TSWV 검출을 위해 민감하고 정확한 reverse transcription droplet digital polymerase chain reaction (RT-ddPCR)을 확립하였다. TSWV 검출에 대한 RT-qPCR 및 RT-ddPCR의 민감도를 비교하였고, TSWV에 대한 RT-ddPCR의 특이성 분석은 고추에서 주로 발생하는 바이러스 및 음성 대조군에서 특이성을 확인한 결과 증폭되지 않았다. RT-ddPCR 및 RTqPCR에 의해 측정된 TSWV의 선형회귀곡선은 모두 높은 선형성을 나타냈지만, RT-ddPCR 분석이 10배 이상 더 민감하고 더 낮은 TSWV의 copy 수를 검출할 수 있었다. 종합적으로, 우리의 연구 결과는 RT-ddPCR이 TSWV 검출에 대해 높은 민감도와 특이성을 제공하고 낮은 농도의 현장 시료에서 TSWV 검출하는 데 적합하다는 것을 보여준다.
2020년 전라북도 완주 소재 약용작물 전시포장에서 재배중인 범부채(Iris domestica) 140개체 가운데 3개체의 잎에서 괴사증상이 발견되었다. Reverse transcription polymerase chain reaction 검정결과 증상을 나타내는 3개체가 tomato spotted wilt virus (TSWV)에 감염된 것으로 확인되었다. 증상주로부터 분리한 TSWV 분리주 'Blackberry lily-kr1'의 전체 염기서열을 결정하였으며, 유전자 은행에 있는 다른 분리주들과 L, M, S 분절유전체 부위의 염기서열 상동성을 비교하였다. 'Blackberry lily-kr1' 분리주는 L 분절 유전체는 우리나라에서 보고한 'JJ' 분리주(MF159046) 또는 'HJ' (LC273305) 분리주와 상동성이 높았으며, M과 S 분절 유전체는 'JJ' 분리주(MF159058과 KY021439)와 가장 상동성이 높았다. MEGA X 프로그램의 maximum likelihood 방법을 이용하여 'Blackberry lily-kr1'의 다른 TSWV 분리주들과의 계통학적 연관성에 관한 분석을 한 결과 L, M, S 분절유전체 모두 고추에서 분리한 'JJ' 분리주 및 환삼덩굴(Humulus japonicas)에서 분리한 'HJ' 분리주와 높은 연관성을 보였다. 건전한 I. domestica 식물에 'Blackberry lily-kr1'을 감염시킨 Nicoatiana rustica 식물 즙액을 접종한 결과 50일 후에 잎에 괴사 또는 이중 고리형태의 괴사 증상이 형성되었다. 이는 노지에서 재배하는 범부채에서 관찰된 괴사증상이 TSWV 감염에 의한 것임을 시사하는 결과이다. 이 연구는 우리나라에서 범부채에서 TSWV 발생에 관한 최초의 보고이다.
2019년 6월 충남 논산의 당귀 재배 농가에서 원형반점, 괴사반점, 황화, 모자이크 등의 증상을 보이는 당귀잎을 채집하였고, 이들 시료에 대한 바이러스 감염 여부를 확인하기 위하여 전자현미경 검경과 감염우려가 있는 바이러스 3종(cucumber mosaic virus, broad bean wilt virus 2, tomato spotted wilt virus [TSWV])에 대해 reverse transcription polymerase chain reaction 진단을 수행한 결과 TSWV에 대해 양성반응을 보였다. 당귀 TSWV의 생물학적 특성을 구명하기 위해 순수분리하여 5과 28종의 지표식물과 일당귀에 즙액접종하여 기주범위와 병원성을 확인하였다. TSWV의 3 segment (L, M, S)의 전체 염기서열을 결정하고 기존에 보고된 TSWV 분리주와 계통분석을 한 결과, 당귀 TSWV 분리주(NS-AG-28)는 논산지역의 머위 분리주(TSWV-NS-BB20)와 가장 유사한 것으로 나타났다. TSWV는 넓은 기주범위를 가지고 있고 특히 고추, 토마토 등 가지과 작물에 큰 피해를 주고 있기 때문에, 당귀가 TSWV의 중간기주로서 작용하지 않도록 주의하고, 당귀의 바이러스병 피해를 예방하기 위하여 지속적인 모니터링이 요구된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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