Kim, Joonki;Lee, Hye-Jung;Tyagi, Wricha;Kovach, Michael;Sweeney, Megan;McCouch, Susan;Cho, Yong-Gu
한국작물학회:학술대회논문집
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한국작물학회 2017년도 9th Asian Crop Science Association conference
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pp.163-163
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2017
A deletion analysis of the Oryza sativa dihydroflavonol reductase (DFR) promoter defined a 25 bp region (-386 to -362) sufficient to confer pericarp-specific expression of ${\beta}$ -glucuronidase(GUS) reporter gene in transgenic rice. Site-specific mutagenesis of these conserved sequences and subsequent expression analysis in calli which transiently expressed the mutated promoter::GUS gene showed that both bHLH (-386 to -381) and Myb (-368 to -362) binding sites in the DEL3 (-440 to 70) promoter were necessary for complete expression of the GUS gene including the tissue-specific expression of DFR::GUS gene. The GUS gene was expressed well in the mutated Myb (-368 to -362) binding site, but not as strong as in normal condition, implying that the Myb is also necessary to express GUS gene fully. Also, we found the non-epistatic relation between Rc and DFR. There were no changes of expression patterns GUS under the Rc and rc genotypes. Thus, DFR expression might be independent of the presence of functional Rc gene and suggested that Rc and Rd (DFR) share the same pathway controlling the regulation of flavonoid synthesis but not a direct positive transcriptional regulator of DFR gene.
Insulin-like growth factor-I (IGF-I) 유전자의 발현은 사람 및 쥐에서 두 개의 promoters (P1과 P2)로부터의 전사와 alternative RNA splicing 및 differential RNA polyadenylation과 같은 복잡한 기전들에 의하여 조절되는데 조직에 따라 성장호르몬을 포함한 여러 요소들이 관여하는 것으로 알려져 있다. 또한 사람의 IGF-I 유전자 exon 1의 upstream에 존재하는 P1에 hepatocyte nuclear factor l$\alpha$와 CAAT/enhancer-binding protein (C/EBP) isoform 들이 결합하여 조직 및 발달단계 특이한 발현에 중요한 역할을 할 것으로 제안되었지만, exon 1의 downstream sequence가 IGF-I 유전자의 조직 특이적 발현을 조절하는 지에 대하여는 연구되어 있지 않다. 연령이 다른 쥐의 간 및 뇌 조직에서 total RNA를 분리하고 solution hybridization/RNase protection 방법으로 분석하여 IGF-I 유전자의 발현이 태어난 후 간 조직에서는 점차적으로 증가하였지만 뇌조직에서는 감소하여 발달단계에 따라 조직 특이하게 발현되는 것을 확인하였다. IGF-I exon 1의 주요한 전사 개시점으로부터 아래쪽에 존재하는 C/EBP 결합부위를 포함하고 있는 cis-acting element에 해당하는 oligonucleotide들과 간 및 뇌조직에서 분리한 핵단백질들을 이용하여 DNA-결합 활성을 가진 분자량이 다른 C/EBP$\alpha$나 C/EBP$\beta$ 단백질들을 확인하였으며 southwestern 및 western immnoblotting 분석을 하여 간 조직의 핵 추출물에서는 42$^{C}$EBP$\alpha$/, 와 p38$^{C}$EBP$\alpha$/, p35$^{C}$EBP$\alpha$/, p38$^{C}$EBP$\beta$/, 그리고 p35$^{C}$EBP$\beta$/가 IGF-I exon 1 oligonucleotide와 복합체를 형성하고 뇌 조직에서는 p42$^{C}$EBP$\alpha$과 p38$^{C}$EBP$\beta$가 복합체 형성에 관여하는 것으로 나타났다. 이러한 결과들은 FRE-C/EBP isoform 복합체 형성이 IGF-I 유전자 발현의 조직 특이적 조절에 중요한 역할을 할 것으로 제안한다.할을 할 것으로 제안한다.
Protease nexin-1 (PN-1)은 활성화 자리에 serine기를 갖는 단백질 분해 효소 즉, 트롬빈, 트립신, 플라스미노겐 활성화 효소 등의 작용을 억제한다. 본 연구에서는 흰쥐의 Sprague-Dawley계통을 이용하여 조직별 mRNA발현여부 및 정도를 조사하였다. PN-1의 발현이 나타난 조직은 뇌 (전뇌, 후뇌), 심장, 간, 폐, 난소, 난관 등이다. 이들 중 유전자 발현이 가장 높은 조직은 암컷의 전뇌(forebrain) 였다. 특히, 생식기관들 중에서는 암컷의 난소와 난관에서만 발현이 관찰되는 등 PN-1 유전자는 성별에 따라 서로 다르게 발현됨이 확인되었다 이러한 결과들로 미루어 PN-1은 여포 형성과정과 초기배 형성과정 등의 생식 및 발생작용과 관련이 있을 것으로 생각된다.
Toll-like receptors (TLRs), which recognize structurally conserved components among pathogens, are mainly expressed by antigen-presenting cells such as dendritic cells (DCs), B cells, and macrophages. Recognition through TLRs triggers innate immune responses and influences antigen-specific adaptive immune responses. Although studies on the expression and functions of TLRs in antigen-presenting cells have been extensively reported, studies in lymphoid tissue inducer (LTi) cells have been limited. In this study, we observed that LTi cells expressed TLR2 and TLR4 mRNA as well as TLR2 protein and upregulated OX40L, CD30L, and TRANCE expression after stimulation with the TLR2 ligand zymosan or TLR4 ligand LPS. The expression of tumor necrosis factor superfamily (TNFSF) members was significantly upregulated when cells were cocultured with DCs, suggesting that upregulated TNFSF expression may contribute to antigen-specific adaptive immune responses.
Epigenetic factors, such as DNA methylation status, may regulate adipogenesis and lipogenesis, thus affecting intramuscular fat (IMF) deposition in longissimus dorsi muscle (LM) of beef cattle. In Korean cattle steers, the LM consists mainly of muscle tissue. However, the LM tissue also contains IMF. We compared the gene expression levels between the IMF and muscle portions of the LM after tissue separation. Real-time polymerase chain reaction analysis showed that the mRNA levels of both adipogenic peroxisome proliferator-activated receptor gamma isoform 1 (PPARG1) and lipogenic fatty acid binding protein 4 (FABP4) were higher (p<0.01) in the IMF than in the muscle portion of the LM. We determined DNA methylation levels of regulatory regions of the PPARG1 and FABP4 genes by pyrosequencing of genomic DNA. DNA methylation levels of two of three CpG sites in the PPARG1 gene promoter region were lower (p<0.05) in the IMF than in the muscle portion of the LM. DNA methylation levels of all five CpG sites from the FABP4 gene promoter region were also lower (p<0.001) in the IMF than in the muscle portion. Thus, mRNA levels of both PPARG1 and FABP4 genes were inversely correlated with DNA methylation levels in regulatory regions of CpG sites of the corresponding gene. Our findings suggest that DNA methylation status regulates tissue-specific expression of adipogenic and lipogenic genes in the IMF and muscle portions of LM tissue in Korean cattle.
Gho, Won Gyung;Choi, Yuri;Park, Kwang-Ho;Huh, Jong-Ki
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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제44권3호
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pp.120-127
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2018
Objectives: The aim of this study was to reveal how collagenases (matrix metalloproteinase [MMP]-1, 8, 13) and tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (TIMP-1) are expressed in immunohistochemistry of retrodiscal tissue in temporomandibular joint disorder patients. Materials and Methods: This study was conducted on 39 patients who underwent discoplasty or discectomy. Immunohistochemical staining was undertaken and expression levels of MMP-1, 8, 13, and TIMP-1 were evaluated. The status of internal derangement of disc, osteoarthritis, and joint effusion were analyzed using magnetic resonance imaging (MRI). Disc status observed during operation was also categorized. Results: The more severe disc derangement was observed on MRI, the more increased expression of MMPs and TIMP-1 appeared. Regarding MMP-13 expression, 86.7% of late-stage disc displacement patients showed grade II or III. Expression level of MMPs or TIMP was not statistically significant associated with joint effusion level. In perforation and/or adhesion groups, all patients showed grade II or III expression of MMP-13. Once perforation occurred, MMP-13 showed increased expression with statistical significance. Conclusion: MMP-1 and MMP-13 expression seem to be related to progression of osteoarthritis whereas MMP-8 does not seem to have a specific role with regard to temporomandibular joint disorders. TIMP-1 is considered to be partly related to internal derangement rather than osteoarthritis, but it is not significant.
Park, Seung-Won;Goo, Tae-Won;Kim, Seong-Ryul;Choi, Gwang-Ho
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제25권1호
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pp.111-114
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2012
In previous studies we have shown that a sw17255 gene was expressed in hemocyte-specific tissues of the silkworm, Bombyx mori L. (Lepidoptera: Bombycidae). It was verified that the sw17255 core promoter region contains elements that regulate the expression of this gene in hemocyte tissue; the selected promoter region spans nucleotides -1 to -2,112 upstream of the start codon. Each of the luciferase reporter gene expression vectors under the control of 4 different kinds of promoter candidates, (-2,112/-1), (-1,640/-1), (-1,169/-1) and (-579/-1), and the control reporter plasmid DNA, were introduced into B. mori larval coelom by direct injection using a syringe. The promoter candidate [E] (-579/-1) showed more than 1.67 fold transcriptional activity compared to control promoter activity. Higher productivity of an expressed gene in the transgenic silkworm by this promoter combination could be achieved in the near future. The foreign recombinant protein could be easily harvested from the blood of the transgenic silkworm.
Matrix metalloproteinases (MMPs) are a family of host-derived proteolytic enzymes and implicated in the remodeling and degradation of extracellular matrix under both physiological and pathological conditions. Connective tissue degradation in periodontal diseases is thought to be due to excessive MMP activities over their specific inhibitors. The effects of lipopolysaccharide (LPS) from Prevotella intermedia, one of the major putative pathogens of periodontitis, on the expression of mRNA for MMPs and tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) in human gingival and periodontal ligament fibroblasts were examined by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). The expression of mRNAs encoding MMP-1, -2, -3, -10, and -14 was increased in human gingival fibroblasts treated with p. intermedia LPS, whereas MMP-11 and TIMP-2 mRNA expression was decreased in these cells stimulated with LPS. P. intermedia LPS increased the MMP-1, -2, -10, -11, and -14 mRNA expression and decreased TIMP-1 and -2 mRNA expression in human periodontal ligament fibroblasts. These findings imply that P. intermedia LPS may play an important role in the connective tissue degradation in periodontitis.
기존의 미세주입 및 정자 electroporation에 의한 보다 효율적인 유전자 도입방법을 개선하여 간단하고 고효율성의 유전자 변환기술을 위한 유전자 도입장치의 시제품 개발로 다수의 난자를 전기적으로 단순화할 수 있는 상업화의 가능성을 보여주었다. 도입된 유전자는 모든 초기배에서 발현됨을 보여 주었다. 특히 난황내의 합포체세포(syncytium)에서의 transient성의 강한 발현은 전기자극에 의해 많은 수의 난자에 유전자를 도입하고 100% 발현되는 체계를 이용하여 transient 시기에서 인간 유용단백질 생산의 가능성을 타진할 수 있는 결과를 보여 주었다. 어류유전자 발현의 작동되는가를 검색하기 위해 신경세로조직특이 tubulin promoter 를 이용한 결과 gfp의 발현이 뇌주변과 척추를 중심으로 체내 전반의 신경세포내에 발현이 강하게 나타남을 보여 주었다. 한편 reporter 유전자 이외에 간세포로부터 전체 RNA를 분리시켜 vitellogenin의 분해산물인 phosvitin cDNA의 길이와 promoter지역인 1.6 kb에 대한 primer쌍들을 선정한 상태에서 PCR에 의해 각각 cDNA와 gDNA로부터 cloning 중에 있으며 human factor Ⅶ과 epidermal growth factor, vitellogenin의 3종의 target 단백 질유전자를 구축 및 검정 화인 중에 있다.
The peroxisome proliferator-activated receptor ${\gamma}$$(PPAR{\gamma})$ plays a central role in adipogenesis and lipid storage. The $(PPAR{\gamma})$ ligands, thiazolidinediones (TZDs), enhance in vitro adipogenesis in several cell types, but the role of the TZDs on in vivo adipogenesis is still poorly understood. To investigate how $PPAR{\gamma}$ ligand troglitazone regulates adipogenesis in female mice, we examined the effects of the troglitazone on adipose tissue mass, morphological changes of adipocytes, and the expression of $PPAR{\gamma}$ target and adipocyte-specific genes in low fat diet-fed female C57BL/6 mice. Administration of troglitazone for 13 weeks did not change body and total white adipose tissue weights compared with control mice. Troglitazone treatment also did not cause a significant decrease in the average size of adipocytes in parametrial adipose tissue although it is reported to increase the number of small adipocytes in male animals. Troglitazone did not affect the mRNA expression of $PPAR{\gamma}$ and its target genes as well as adipocyte-specific genes in parametrial adipose tissue. These results suggest that $PPAR{\gamma}$ does not seem to be associated with adipogenesis in females with functioning ovaries and that its inability to induce adipogenesis may be due to sex-related factors.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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